Ridaforolimus (Deforolimus, MK-8669)

Le traitement des cellules HT-1080 avec le Déforolimus induit une inhibition dose-dépendante de la phosphorylation du S6 et du 4E-BP1, avec des IC50 de 0,2 nM et 5,6 nM, respectivement, et entraîne une diminution de la taille des cellules, une augmentation de la proportion de cellules en phase G1 du cycle cellulaire et une inhibition de l'absorption du glucose. Le Déforolimus présente une activité antiproliférative significative sur un large éventail de lignées cellulaires avec des EC50 de 0,2 à 2,3 nM. Le Déforolimus inhibe puissamment et sélectivement la production de VEGF de manière dose-dépendante. [1] Le traitement au Déforolimus induit une suppression significative de la croissance dans les lignées cellulaires NSCLC humaines avec des valeurs d'IC30 de 2,45 à 8,83 nM, à l'exception du H157 avec une IC30 de >20 nM. Le traitement au Déforolimus (2,8-5,9 nM) déphosphoryle significativement la p70S6K^Thr389 dans les cellules A549, H1703 et H157, sauf H1666 qui pourrait exprimer une variante résistante de mTORC1, et provoque une phosphorylation accrue de pAKT^ser473 et pAKT^Thr308 dans les cellules A549 et H1703. Le Déforolimus en association avec les inhibiteurs de MEK, le CI-1040 ou le PD0325901, présente un synergisme dose-dépendant dans les lignées cellulaires de cancer du poumon, ce qui est associé à la suppression de la prolifération plutôt qu'à l'amélioration de la mort cellulaire, impliquant l'inhibition de la biogenèse ribosomale de 40% en 24 heures et une diminution du rapport polysome/monosome. [2]

L'administration de Déforolimus exerce des effets antitumoraux significatifs chez les souris porteuses de xénogreffes PC-3 (prostate), HCT-116 (côlon), MCF7 (sein), PANC-1 (pancréas) ou A549 (poumon) de manière dose-dépendante, et inhibe la signalisation mTOR dans le modèle de xénogreffe SK-LMS-1 associée à l'inhibition de la croissance tumorale. [1]

• Inhibition de la cible basée sur les cellules

  Les cellules HT-1080 sont traitées avec des concentrations croissantes de Déforolimus (0-100 nM) pendant 2 heures, avant la récolte. Les lysats cellulaires sont extraits dans un tampon de lyse dénaturant, résolus sur SDS-PAGE et transférés sur des membranes PVDF. Après blocage, les membranes sont incubées avec des anticorps primaires pendant 1 heure, suivis des anticorps secondaires conjugués à la HRP appropriés pendant 1 heure à température ambiante. Les protéines immunoréactives sont détectées à l'aide de la chimioluminescence améliorée et de l'autoradiographie réalisée par exposition à un film radiographique. L'IC50 est déterminée à partir de l'inhibition des niveaux de la protéine ribosomique S6 phosphorylée (p-S6) et du 4E-BP1 (p-4E-BP1).

• Lignées cellulaires

  Colo205, H1755, H1395, H1666, A549, H157, and H1703 cells

• Concentrations

  Dissolved in ethanol, final concentrations ~ 1 μM

• Temps dincubation

  72-120 hours

• Méthode

  Cells are seeded at 2-3 × 10⁴/mL, and serial dilutions of Deforolimus are added after 2 hours, for at least three cell doublings (72-120 hours). Deforolimus effects are measured using the CellTiter 96 Aqueous nonradioactive cell proliferation assay and Sulforhodamine B assays. For Deforolimus, growth effects are described as IC30 because rapamycin and its derivatives do not significantly impede cell proliferation.

• Modèles animaux

  Male and female athymic NCr-nu mice with xenografts established by subcutaneous implantation of PC-3, A549, HCT-116, MCF7, PANC-1 and SK-LMS-1 tumors

• Dosages

  ~10 mg/kg

• Administration

  Intraperitoneally