Enzastaurin

L'application d'Enzastaurin entra Vcre une inhibition marqu V2e et dose-d V2pendante de la croissance dans toutes les lign V2es cellulaires de MM V2tudi V2es, y compris MM.1S, MM.1R, RPMI 8226 (RPMI), RPMI-Dox40 (Dox40), NCI-H929, KMS-11, OPM-2 et U266, avec une IC50 de 0,6 V2 1,6 V5M. Ce compos V2 agit directement sur les cellules tumorales humaines, induisant l'apoptose et supprimant la prolif V2ration dans les cellules tumorales cultiv V2es. Il supprime V2galement la phosphorylation de GSK3 V2^ser9, de la prot V2ine ribosomique S6S240/244 et d'AKTThr308, sans avoir d'effet direct sur la phosphorylation de VEGFR. [1] Ce produit chimique augmente l'apoptose dans les lymphocytes malins du CTCL. Lorsqu'il est combin V2 V2 des inhibiteurs de GSK3, il a d V2montr V2 une am V2lioration des niveaux de cytotoxicité. Le traitement combinant ce compos V2 et l'inhibiteur de GSK3 AR-A014418 a entra Vcre une augmentation des niveaux de prot V2ine totale V2-cat V2nine et de transcription m V2di V2e par la V2-cat V2nine. Le blocage de la transcription m V2di V2e par la V2-cat V2nine ou l'extinction g V2nique par petit ARN en V2pingle V2 cheveux (shRNA) de la V2-cat V2nine a induit les m Vames effets cytotoxiques que ceux observ V2s avec sa combinaison avec AR-A014418. De plus, le traitement avec ce compos V2 et AR-A014418 a diminu V2 les niveaux d'ARNm et l'expression de surface de CD44. [2]

Le traitement des x V2nogreffes avec Enzastaurin et la radiation a produit des r V2ductions plus importantes de la densit V2 des microvaisseaux que chaque traitement seul. La diminution de la densit V2 des microvaisseaux correspondait V2 un retard de la croissance tumorale. [3]

• Tests d'inhibition de kinases

  L'inhibition de l'activit V2 de PKC V2II, PKC V2 Va, PKC V2 Ve ou PKC V2 Vg par l'enzastaurine est d V2termin V2e V2 l'aide d'un format de dosage sur plaque filtrante mesurant l'incorporation de ³³P dans le substrat de la prot V2ine basique de la my V2line. Les r V2actions sont effectu V2es dans des volumes de r V2action de 100 V5L dans des plaques de polystyr V2ne V2 96 puits avec les conditions finales suivantes : 90 mM HEPES (pH 7,5), 0,001% Triton X-100, 4% DMSO, 5 mM MgCl₂, 100 V5M CaCl₂, 0,1 mg/mL de phosphatidyls V2rine, 5 V5g/mL de diac V2tylglyc V2rol, 30 V5M d'ATP, 0,005 V5Ci/ V5L de ³³ATP, 0,25 mg/mL de prot V2ine basique de la my V2line, des dilutions en s V2rie de ce compos V2 (1-2 000 nM) et des enzymes PKC V2II, PKC V2 Va, PKC V2 Ve ou PKC V2 Vg humaines recombinantes (390, 169, 719 ou 128 pM, respectivement). Les r V2actions sont lanc V2es par l'ajout de l'enzyme et incub V2es V2 temp V2rature ambiante pendant 60 minutes. Elles sont ensuite V2teintes avec 10% de H₃PO₄, transf V2r V2es dans des plaques filtrantes V2 96 puits en phosphocellulose anionique multiscreen, incub V2es pendant 30 V2 90 minutes, filtr V2es et lav V2es avec 4 volumes de 0,5% de H₃PO₄ sur un collecteur V2 vide. Un cocktail de scintillation est ajout V2 et les plaques sont lues sur un compteur V2 scintillation Microbeta. Les valeurs d'IC50 sont d V2termin V2es en ajustant une V2quation logistique V2 trois variables aux donn V2es de la r V2ponse V2 la dose en 10 points V2 l'aide d'ActivityBase 4.0.

• Lignées cellulaires

  HCT116 and U87MG cells

• Concentrations

  0.3-4 μM

• Temps dincubation

  72 hours

• Méthode

  Induction of apoptosis by enzastaurin is measured by nucleosomal fragmentation and terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated nick-end labeling (TUNEL) and staining in HCT116 and U87MG cell lines. Briefly, 5 × 10³ cells are plated per well in 96-well plates (1% FBS-supplemented media conditions), incubated with or without this compound for 48 to 72 hours. The absorbance values are normalized to those from control-treated cells to derive a nucleosomal enrichment factor at all concentrations as per the manufacturer's protocol. The concentrations studied ranges from 0.1 to 10 μM. In situ TUNEL staining is assayed with the In situ Cell Death Detection. Cells (7.5 ?10⁴) are plated per well in 6-well plates and incubated 72 hours in 1% FBS-supplemented media ?this chemical. labeled DNA strand breaks are detected with the BD epics flow cytometer. Ten thousand, single-cell, FITC-staining events are collected for each test.

• Modèles animaux

  Athymic nude mice; Mouse besring human MM tumors

• Dosages

  75 mg/kg twice daily; 30 mg/kg twice daily

• Administration

  By gavage