GSK690693

Le GSK690693 est très sélectif pour les isoformes Akt par rapport à la majorité des kinases des autres familles. Cependant, ce composé est moins sélectif pour les membres de la famille des kinases AGC, y compris PKA, PrkX et les isozymes de la PKC, avec des IC50 de 24 nM, 5 nM et 2-21 nM, respectivement. Il inhibe également puissamment AMPK et DAPK3 de la famille CAMK avec des IC50 de 50 nM et 81 nM, respectivement, et PAK4, 5 et 6 de la famille STE avec des IC50 de 10 nM, 52 nM et 6 nM, respectivement. Cette substance chimique inhibe la phosphorylation de GSK3β dans les cellules tumorales avec des IC50 allant de 43 nM à 150 nM. Son traitement entraîne une augmentation dose-dépendante de l'accumulation nucléaire du facteur de transcription FOXO3A. Ce composé inhibe puissamment la prolifération des cellules T47D, ZR-75-1, BT474, HCC1954, MDA-MB-453 et LNCaP avec des IC50 de 72 nM, 79 nM, 86 nM, 119 nM, 975 nM et 147 nM, respectivement. Son traitement induit l'apoptose à des concentrations >100 nM dans les cellules LNCaP et BT474. [1] Conformément au rôle d'Akt dans la survie cellulaire, il induit l'apoptose dans les lignées cellulaires ALL sensibles. [2]

Une administration unique de GSK690693 inhibe la phosphorylation de GSK3β dans des xénogreffes de carcinome mammaire humain (BT474) de manière dose-dépendante et temps-dépendante. De même, ce composé induit une réduction de la phosphorylation des substrats d'Akt, PRAS40 et FKHR/FKHRL1. Il entraîne également une augmentation aiguë de la glycémie, revenant à la ligne de base 8 à 10 heures après l'administration du médicament. L'administration de cette substance chimique induit in vivo des réductions des substrats d'Akt phosphorylés, et inhibe puissamment la croissance des xénogreffes de carcinome ovarien humain SKOV-3, de prostate LNCaP, et de sein BT474 et HCC-1954, avec une inhibition maximale de 58% à 75% à la dose de 30 mg/kg/jour. [1] Ce composé présente une efficacité indépendamment du mécanisme d'activation d'Akt impliqué. Il est le plus efficace pour retarder la progression tumorale chez les souris Lck-MyrAkt2 exprimant une forme d'Akt liée à la membrane et constitutivement active. [3]

• Tests de kinase in vitro

  Les Akt1, 2 ou 3 pleine longueur marqués His sont exprimés et purifiés à partir de baculovirus. L'activation est réalisée avec de la PDK1 purifiée pour phosphoryler la Thr308 et de la MK2 purifiée pour phosphoryler la Ser473. Pour mesurer plus précisément l'inhibition temps-dépendante d'Akt, les enzymes Akt activées sont incubées avec GSK690693 à diverses concentrations à température ambiante pendant 30 minutes avant que la réaction ne soit initiée par l'ajout de substrat. La réaction finale contient 5 nM à 15 nM d'enzymes Akt1, 2 et 3; 2 μM d'ATP; 0,15 μCi/μL[γ-³³P]ATP; 1 μM de peptide (Biotin-aminohexanoicacid-ARKR-ERAYSFGHHA-amide); 10 mM de MgCl₂; 25 mM de MOPS (pH 7,5); 1 mM de DTT; 1 mM de CHAPS; et 50 mM de KCl. Les réactions sont incubées à température ambiante pendant 45 minutes, puis terminées avec des billes Leadseeker dans du PBS contenant de l'EDTA (concentration finale, 2 mg/mL de billes et 75 mM d'EDTA). Les plaques sont ensuite scellées, les billes sont laissées à décanter pendant au moins 5 heures, et la formation de produit est quantifiée à l'aide d'un imageur Viewlux.

• Lignées cellulaires

  T47D, ZR-75-1, BT474, HCC1954, MDA-MB-453, LNCaP, etc.

• Concentrations

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~30 μM

• Temps dincubation

  72 hours

• Méthode

  Cells are plated at densities that allow untreated cells to grow logarithmically during the course of a 3-day assay. Briefly, cells are plated in 96- or 384-well plates and incubated overnight. Cells are then treated with this compound (ranging from 30 μM-1.5 nM) and incubated for 72 hours. Cell proliferation is measured using the CellTiter Glo reagent. Data are analyzed using the XLFit curve-fitting tool for Microsoft Excel. IC50 values are obtained by fitting data to Eq, 2.

• Modèles animaux

  Female CD1 Swiss Nude mice injected with LNCaP, SKOV-3, or PANC1 cells, and C.B-17 SCID mice with HCC1954, MDA-MB-453, or BT474 cells

• Dosages

  ~30 mg/kg/day

• Administration

  Administered via i.p.