CW069

N° de catalogueS7336 Lot:S733601

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Données techniques

Formule

C₂₃H₂₁IN₂O₃

Poids moléculaire

500.33

N° CAS

1594094-64-0

Solubilité (25°C)*

In vitro

DMSO

100 mg/mL (199.86 mM)

Ethanol

4 mg/mL (7.99 mM)

Water

Insoluble

In Vivo (Ajoutez les solvants au produit individuellement et dans lordre.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Validé par les laboratoires Selleck. Si vous avez besoin dajustements à cette formulation, contactez notre équipe commerciale pour des tests personnalisés.	5.000mg/ml (9.99mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 100 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5% DMSO 1 95% Corn oil Validé par les laboratoires Selleck. Si vous avez besoin dajustements à cette formulation, contactez notre équipe commerciale pour des tests personnalisés.	1.000mg/ml (2.00mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 20 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble.
* Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre.
* Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)

Préparation des solutions mères

Activité biologique

Description

CW069 est un inhibiteur allostérique et sélectif de la microtubule motor protein HSET avec une IC50 de 75 μM, présentant une sélectivité significative par rapport au KSP.

Cibles

HSET

75 μM

In vitro

CW069 augmente les fuseaux multipolaires dans les cellules N1E-115 avec des centrosomes surnuméraires sans altérer la morphologie des fuseaux bipolaires dans les cellules fibroblastiques dermiques humaines normales. Ce composé inhibe la croissance des cellules cancéreuses N1E-115 avec une IC50 de 10 μM, mais pas dans les cellules NHDF ou les cellules primaires de moelle osseuse humaine.

Caractéristiques

Inhibiteur allostérique, sélectif pour HSET.

Protocole (de référence)

Test kinase :^{^[1]}	Essai enzymatique ATPase in vitro Le protocole est optimisé pour être utilisé avec la HSET et la KSP pleine longueur, N-terminale, 6His-taguée, et mesure l'activité stimulée par les MT des protéines. L'inhibition de l'activité Gsp synthétase de HSET/KSP est observée spectrophotométriquement en couplant l'hydrolyse de l'ATP à l'oxydation du NADH via les réactions de la pyruvate kinase/lactate déshydrogénase. L'essai est initié en ajoutant de la Gsp synthétase/amidase purifiée (12,8 nM) à un mélange d'essai contenant les composants suivants (concentration finale) : 6 nM de protéine, 0,07 mg/ml de MT (University Biologicals), 1,56 mM de glutathion, 10 mM de spermidine, 2 mM d'ATP, 2,7 mM de MgCl₂, 1 mM de phospho(énol)-pyruvate, 0,2 mM de NADH, 50 μg/ml de lactate déshydrogénase, 100 μg/ml de pyruvate kinase, et diverses concentrations de ce composé, le tout dans 50 mM de Na PIPES (pH 6,8) à 37°C. L'essai de détection ADP-Glo (Promega) est réalisé comme décrit dans les instructions du fabricant. Toutes les additions de composés ont été effectuées à l'aide d'un multidrop BioMek Nxp. Les plaques ont été lues à l'aide d'un lecteur de microplaques Pherastar.
Test cellulaire :^{^[1]}	Lignées cellulaires N1E-115 cells, NHDF and primary human bone marrow cells. Concentrations ~400 μM Temps dincubation 72 hours Méthode Cells are cultured in DMEM supplemented with 10% fetal calf serum (FCS) at 37°C and 5% CO2. All compounds used in the Sulforhodamine B colorimetric (SRB) assay are dissolved in DMSO and diluted in culture medium to a final concentration of 0.2% DMSO. For the SRB assay and live-cell imaging, cells are seeded in 96-well plates at a density of 2,500 cells per well. After 24 hr, the cells are treated with this compound for 72 hr, with triplicate wells for each concentration. For the SRB assay, the cells are then fixed with trichloroacetic acid (TCA) and stained with SRB. Fluorescence is quantified using an Infinite 200 PRO plate-reader at a wavelength of 545 nm. Compound-treated wells are compared with solvent control wells and the concentration of this chemical that results in 50% of the solvent-control cell growth is designated as the IC50 concentration, calculated using Graphpad PRISM 6. At least three biological replicates are performed for each assay.

Test kinase :^{^[1]}

Essai enzymatique ATPase in vitro
Le protocole est optimisé pour être utilisé avec la HSET et la KSP pleine longueur, N-terminale, 6His-taguée, et mesure l'activité stimulée par les MT des protéines. L'inhibition de l'activité Gsp synthétase de HSET/KSP est observée spectrophotométriquement en couplant l'hydrolyse de l'ATP à l'oxydation du NADH via les réactions de la pyruvate kinase/lactate déshydrogénase. L'essai est initié en ajoutant de la Gsp synthétase/amidase purifiée (12,8 nM) à un mélange d'essai contenant les composants suivants (concentration finale) : 6 nM de protéine, 0,07 mg/ml de MT (University Biologicals), 1,56 mM de glutathion, 10 mM de spermidine, 2 mM d'ATP, 2,7 mM de MgCl₂, 1 mM de phospho(énol)-pyruvate, 0,2 mM de NADH, 50 μg/ml de lactate déshydrogénase, 100 μg/ml de pyruvate kinase, et diverses concentrations de ce composé, le tout dans 50 mM de Na PIPES (pH 6,8) à 37°C. L'essai de détection ADP-Glo (Promega) est réalisé comme décrit dans les instructions du fabricant. Toutes les additions de composés ont été effectuées à l'aide d'un multidrop BioMek Nxp. Les plaques ont été lues à l'aide d'un lecteur de microplaques Pherastar.

Test cellulaire :^{^[1]}

Lignées cellulaires
N1E-115 cells, NHDF and primary human bone marrow cells.
Concentrations
~400 μM
Temps dincubation
72 hours
Méthode
Cells are cultured in DMEM supplemented with 10% fetal calf serum (FCS) at 37°C and 5% CO2. All compounds used in the Sulforhodamine B colorimetric (SRB) assay are dissolved in DMSO and diluted in culture medium to a final concentration of 0.2% DMSO. For the SRB assay and live-cell imaging, cells are seeded in 96-well plates at a density of 2,500 cells per well. After 24 hr, the cells are treated with this compound for 72 hr, with triplicate wells for each concentration. For the SRB assay, the cells are then fixed with trichloroacetic acid (TCA) and stained with SRB. Fluorescence is quantified using an Infinite 200 PRO plate-reader at a wavelength of 545 nm. Compound-treated wells are compared with solvent control wells and the concentration of this chemical that results in 50% of the solvent-control cell growth is designated as the IC50 concentration, calculated using Graphpad PRISM 6. At least three biological replicates are performed for each assay.

Références

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24210220/

Validation du produit par le client

: Données de [ , , J Cell Sci, 2017, 130(21):3676-3684 ]

De Selleck CW069 A été cité par 8 Publications

Two cancer cell lines utilize Myosin 10 and the kinesin HSET differentially to maintain mitotic spindle bipolarity [ PLoS One, 2025, 20(5):e0325016]	PubMed: 40440343
Molecular landscape and functional characterization of centrosome amplification in ovarian cancer [ Nat Commun, 2023, 14(1):6505]	PubMed: 37845213
KIF24 depletion induces clustering of supernumerary centrosomes in PDAC cells [ Life Sci Alliance, 2022, 5(11)e202201470]	PubMed: 35803737
Terminally differentiated osteoclasts organize centrosomes into large clusters for microtubule nucleation and bone resorption [ Mol Biol Cell, 2022, mbcE22030098]	PubMed: 35511803
IFT proteins interact with HSET to promote supernumerary centrosome clustering in mitosis. [ EMBO Rep, 2020, 9:e49234]	PubMed: 32270908
Unraveling mitotic protein networks by 3D multiplexed epitope drug screening [ Mol Syst Biol, 2018, 14(8):e8238]	PubMed: 30104419
Centrosome Clustering Is a Tumor-selective Target for the Improvement of Radiotherapy in Breast Cancer Cells [Choe MH Anticancer Res, 2018, 38(6):3393-3400]	PubMed: 29848688
Precocious Centriole Disengagement and Centrosome Fragmentation Induced by Mitotic Delay [ Nat Commun, 2017, 13;8:15803]	PubMed: 28607478

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