Fiche technique

Description biologique

Spécificité	MCP1 Antibody [M3B19] détecte les niveaux endogènes de la protéine MCP1 totale.
Contexte	La protéine chimiotactique des monocytes-1 (MCP-1/CCL2) est un membre de la famille des chimiokines C-C et fonctionne comme un puissant facteur chimiotactique pour les monocytes. Elle est considérée comme identique à JE, un gène initialement identifié dans les fibroblastes de souris comme étant induit par le facteur de croissance dérivé des plaquettes. Le gène humain MCP-1 est situé sur le chromosome 17q11.2 et code une protéine de 76 acides aminés avec un poids moléculaire d'environ 13 kDa. MCP-1 appartient à une sous-famille de chimiokines qui comprend au moins quatre membres : MCP-1, MCP-2, MCP-3 et MCP-4. CCL2 est produit par une grande variété de types cellulaires, soit de manière constitutive, soit en réponse à des stimuli tels que le stress oxydatif, les cytokines et les facteurs de croissance. Ses sources comprennent les cellules endothéliales, les fibroblastes, les cellules épithéliales, les cellules musculaires lisses, les cellules mésangiales, les astrocytes, les monocytes et la microglie – des types cellulaires qui jouent des rôles importants dans la défense immunitaire antivirale à la fois dans la circulation et les tissus. Fonctionnellement, CCL2 dirige la migration et l'infiltration des monocytes, des lymphocytes T mémoires et des cellules tueuses naturelles (NK). Les effets biologiques de CCL2 sont médiatisés par son récepteur, CCR2, dont l'expression est plus restreinte par rapport à celle de CCL2. CCR2 existe en deux isoformes épissées alternativement, CCR2A et CCR2B, qui ne diffèrent que par leurs régions C-terminales.

Spécificité

MCP1 Antibody [M3B19] détecte les niveaux endogènes de la protéine MCP1 totale.

Contexte

La protéine chimiotactique des monocytes-1 (MCP-1/CCL2) est un membre de la famille des chimiokines C-C et fonctionne comme un puissant facteur chimiotactique pour les monocytes. Elle est considérée comme identique à JE, un gène initialement identifié dans les fibroblastes de souris comme étant induit par le facteur de croissance dérivé des plaquettes. Le gène humain MCP-1 est situé sur le chromosome 17q11.2 et code une protéine de 76 acides aminés avec un poids moléculaire d'environ 13 kDa. MCP-1 appartient à une sous-famille de chimiokines qui comprend au moins quatre membres : MCP-1, MCP-2, MCP-3 et MCP-4. CCL2 est produit par une grande variété de types cellulaires, soit de manière constitutive, soit en réponse à des stimuli tels que le stress oxydatif, les cytokines et les facteurs de croissance. Ses sources comprennent les cellules endothéliales, les fibroblastes, les cellules épithéliales, les cellules musculaires lisses, les cellules mésangiales, les astrocytes, les monocytes et la microglie – des types cellulaires qui jouent des rôles importants dans la défense immunitaire antivirale à la fois dans la circulation et les tissus. Fonctionnellement, CCL2 dirige la migration et l'infiltration des monocytes, des lymphocytes T mémoires et des cellules tueuses naturelles (NK). Les effets biologiques de CCL2 sont médiatisés par son récepteur, CCR2, dont l'expression est plus restreinte par rapport à celle de CCL2. CCR2 existe en deux isoformes épissées alternativement, CCR2A et CCR2B, qui ne diffèrent que par leurs régions C-terminales.

Informations dutilisation

Application

IHC

Dilution

Réactivité

Mouse

Source

Rat Monoclonal Antibody

MW

11 kDa

Tampon de stockage

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

Stockage
(À partir de la date de réception)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

Méthodes expérimentales
IHC	Experimental Protocol： Deparaffinization/Rehydration 1. Deparaffinize/hydrate sections: 2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each. 3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each. 4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each. 5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each. 6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min. Staining 1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each. 2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min. 3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each. 4. Wash sections in wash buffer for 5 min. 5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature. 6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C. 7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each. 8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature. 9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each. 10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use. 11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity. 12. Immerse slides in dH2O. 13. If desired, counterstain sections with hematoxylin. 14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each. 15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each. 16. Mount sections with coverslips and mounting medium.

Méthodes expérimentales

IHC

Experimental Protocol：

Deparaffinization/Rehydration

1. Deparaffinize/hydrate sections:

2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each.

3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each.

4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each.

5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each.

6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min.

Staining

1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each.

2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min.

3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.

4. Wash sections in wash buffer for 5 min.

5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature.

6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C.

7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each.

8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature.

9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each.

10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use.

11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity.

12. Immerse slides in dH2O.

13. If desired, counterstain sections with hematoxylin.

14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.

15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each.

16. Mount sections with coverslips and mounting medium.

Références

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19441883/

Données dapplication

IHC

Validé par Selleck

Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded mouse testicles tissue with F3225 at 1:10 dilution.