Danoprevir

Catalogusnr.S1183 Batch:S118301

Afdrukken

Technische gegevens

Formule

C35H46FN5O9S
Molecuulgewicht 731.83 CAS-nr. 850876-88-9
Oplosbaarheid (25°C)* In vitro DMSO 144 mg/mL (196.76 mM)
Ethanol 144 mg/mL (196.76 mM)
Water Insoluble
In Vivo (Voeg oplosmiddelen afzonderlijk en in volgorde toe aan het product.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
5%DMSO 40%PEG300 5%Tween80 50%ddH2O

Gevalideerd door Selleck labs. Mocht u aanpassingen aan deze formulering nodig hebben, neem dan contact op met ons verkoopteam voor maatwerktesten.

 3.600mg/ml (4.92mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 72 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
Clear solution
5% DMSO 95% Corn oil

Gevalideerd door Selleck labs. Mocht u aanpassingen aan deze formulering nodig hebben, neem dan contact op met ons verkoopteam voor maatwerktesten.

 1.210mg/ml (1.65mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 24.2 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml betekent licht oplosbaar of onoplosbaar.
* Houd er rekening mee dat Selleck de oplosbaarheid van alle verbindingen intern test en de werkelijke oplosbaarheid enigszins kan afwijken van gepubliceerde waarden. Dit is normaal en is te wijten aan lichte batch-tot-batch variaties.
* Verzending op kamertemperatuur (Stabiliteitstests tonen aan dat dit product zonder koelmaatregelen kan worden verzonden.)

Voorbereiden van stamoplossingen

Biologische activiteit

Beschrijving Danoprevir is een peptidomimetische remmer van de NS3/4A-protease van het hepatitis C-virus (HCV) met een IC50 van 0,2-3,5 nM. Het remmende effect voor HCV-genotypes 1A/1B/4/5/6 is ongeveer 10 keer hoger dan voor 2B/3A. Fase 2.
Doelen
HCV NS3/4A protease
0.2 nM-3.5 nM
In vitro

Danoprevir (0,29 nM) remt de referentie genotype 1 NS3/4A-protease half-maximaal, maar een hoge dosis van deze verbinding (10 μM) vertoont geen merkbare remming in een panel van 79 proteases, ionkanalen, transporters en celoppervlakreceptoren. Het blijft gebonden aan en remt NS3/4A gedurende meer dan 5 uur na de initiële associatie. Deze chemische stof (45 nM) elimineert een van patiënten afgeleid HCV genotype 1b-replicon uit van hepatocyten afgeleide Huh7-cellen met een EC50 van 1,8 nM. In HCV subgenomische replicon-cellijnen die de individuele mutaties bevatten, verlenen V36M-, R109K- en V170A-substituties weinig of geen resistentie ertegen, maar de R155K-substitutie verleent een hoog niveau (62-voudige toename) van resistentie tegen deze verbinding. In Huh7.5-cellen die getransfecteerd zijn met chimere recombinante virussen, vertoont het antivirale remmende effecten tegen HCV-genotypes 1, 4 en 6 met IC50 van 2-3 nM, die >100-voudig lager zijn dan genotypes 2/3/5 (280-750 nM).

In Vivo

Danoprevir (30 mg/kg), toegediend aan ratten of apen, toont aan dat de concentraties ervan in de lever 12 uur na toediening de concentratie van deze verbinding overschrijden die nodig is om replicon-RNA uit cellen te elimineren.

Functies Een peptidomimetische remmer van de NS3/4A-protease van het hepatitis C-virus (HCV).

Protocol (uit referentie)

Kinase-assay:

[1]
  • Continue fluorescentie-resonantie-energieoverdracht (FRET) assay

    De assaybuffer bevat 25 μM NS4A-peptide, 50 mM Tris-HCl, pH 7,5, 15% vol/vol, 10 mM dithiothreitol en 0,5 μM QXL520-gelabeld FRET-substraat {Ac-DE-Dap(QXL520)-EE-Abu-ψ-[COO]-AS-Cys(5-FAMsp)-NH2}. K2040-enzym (50 pM) wordt toegevoegd om de reactie te initiëren. Reacties worden opgezet in zwarte 96-well platen en fluorescentiegegevens worden verzameld. Controlereacties zonder remmers en enzym zijn inbegrepen. Initiële snelheden worden berekend uit de lineaire fase van de reactie (tot 1 uur) en worden gebruikt om de IC50 te verkrijgen. Herstel van activiteit van het vooraf gevormde dit compound-NS3/4A-complex wordt beoordeeld door 10 nM NS3/4A te pre-incubereren met een tweevoudig overschot van deze chemische stof in 1× assaybuffer gedurende 15 min, gevolgd door een snelle 200-voudige verdunning van het vooraf gevormde complex in assaybuffer met substraat. Een controlereactie met dezelfde uiteindelijke condities zonder pre-incubatie van NS3/4A en deze verbinding wordt geïnitieerd door de toevoeging van enzym aan een overigens complete reactiemengsel. Extra controlereacties ontberen ofwel deze chemische stof of NS3. De voortgang van de reacties wordt gedurende 5 uur gevolgd.
Celassay:

[1]
  • Cellijnen

    Huh7 cells harboring HCV replicon

  • Concentraties

    5 pM - 100 nM

  • Incubatietijd

    48 hours

  • Methode

    Serially diluted Danoprevir is added to Huh7 cells harboring the K2040 replicon 1 day after cell plating. For antiviral assays, after a 48-hour incubation, intracellular RNA is extracted, and the level of HCV replicon RNA is quantified by reverse transcription (RT)-PCR assay with the primers (5'-CACTCCCCTGTGAGGAACTACTG-3' and 5'-AGGCTGCACGACACTCATACT-3') and a probe (5'-6-FAM-CTTCACGCAGAAAGCGTCTAGCCATGG-MGBNFQ-3' using an ABI Prism 7900 sequence detection system. Here, FAM is 6-carboxyfluorescin and MGBNFQ is a molecular-groove binding non-fluorescence quencher specific to the HCV 5' untranslated region. Single-tube reactions are performed using the TaqMan Gold RT-PCR kit. Triplicate reactions for the RNA standards and samples are performed in 50 μL with 5 μL intracellular RNA (50 ng). RT is carried out at 48 °C for 30 min followed by 10 min at 95 °C. The PCR is run as follows: 15 seconds at 95 °C and 1 min at 60 °C for 40 cycles. Each RNA concentration is determined in triplicate. The absolute concentration of replicon RNA is calculated based on its signal relative to that of a standard curve generated by known concentrations of an in vitro-transcribed RNA corresponding to a genotype 1b 5' untranslated region. Replicon levels in the presence of this compound are fitted to a four-parameter logistic function to obtain EC50.
Dierstudie:

[1]
  • Dierlijke modellen

    Sprague-Dawley rats, Cynomolgus monkeys

  • Doseringen

    30 mg/kg

  • Toediening

    Oral gavage

Referenties

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18824605/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18637752/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21480315/

Klantproductvalidatie

Western blot analysis of HCV NS3 protease cleavage of MAVS. The catalytic efficiency of four proteases (H, H-A156T, 41 and 41-A156T) from individuals H and 41 were tested in the absence or presence of an NS3 protease inhibitor (danoprevir). Expression of the HCV NS3 proteases resulted in cleavage of the lambda cI repressor with MAVS cleavage site. Expression of the protease was induced with IPTG for 3 h. The lambda cI repressor with MAVS cleavage site was not cleaved by an NS3 protease that included a substitution in catalytic residue S139A. Similarly, different catalytic efficiencies were observed with different proteases.

Gegevens van [ Mol Biol Evol , 2014 , 31(6), 1546-53 ]

Suppression of HCV replication by anti-HCV inhibitors. HCV-Feo replicon-containing cells were seeded in 96-well plates at a density of 1 x 10<sub>4</sub> cells/well. Twenty-four hours later, cells were exposed to the indicated concentrations of danoprevir. After a 72-hour treatment with inhibitors, cells were harvested and firefly luciferase activity was measured. Results are the means and SDs of three independent experiments (upper panels). PrestoBlue cell viability reagent (Invitrogen, CA) was used to examine the cytotoxic effect of inhibitors according to the manufacturer

Gegevens van [ Antimicrob Agents Chemother , 2012 , 56(10), 5365-73 ]

<p>Inhibition of HCV and CHV NS3/4A proteases in the presence of the protease inhibitors (A) 25a or (B) danoprevir. The graph illustrates the relative (%) lambda phage titer after selective growth of lambda in E. coli cells coexpressing the NS3/4A protease constructs and the lambda cI repressor expressing either MAVS or TRIF cleavage sites in the absence or presence of protease inhibitors (20 mM). No significant inhibition was detected with an HCV NS3/4A protease mutant carrying the substitution D168V, which confers resistance to protease inhibitors. Values are the means 6 standard deviations (error bars) of at least three experiments.</p>

Gegevens van [ PLoS One , 2012 , 7, e42481 ]

<p>Effects of TNFα, etanercept, and danoprevir on HCV infection in HFLC. Cells (n=6 wells/condition) were treated with TNFα (20 ng/ml) ± etanercept (1 μg/ml), danoprevir (2 μM), or media control before and during infection with Jc1G. Secreted luciferase was measured 96 hours after the start of infection. Box-and-whiskers plot; whiskers represent minimum and maximum values. Values of p were calculated by one-way ANOVA. ***, p < 0.001; ****, p < 0.0001</p>

, , Gastroenterology, 2017, 153(2):566-578

Sellecks Danoprevir Is geciteerd door 22 Publicaties

Targeting eEF1A reprograms translation and uncovers broad-spectrum antivirals against cap or m6A protein synthesis routes [ Nat Commun, 2025, 16(1):1087] PubMed: 39920115
The exon junction complex coordinates the cotranscriptional inclusion of blocks of neighboring exons [ Genes Dev, 2025, 10.1101/gad.353081.125] PubMed: 41102016
Zbtb16 determines the fate plasticity of cardiovascular progenitors through IGF2BP3-mediated mRNA stabilization [ Cell Rep, 2025, 44(8):116127] PubMed: 40779394
Small Molecule Targeting of Atypical p38 Protects Against Viral Infection [ FASEB J, 2025, 39(20):e71096] PubMed: 41082179
Preclinical characterization of a non-peptidomimetic HIV protease inhibitor with improved metabolic stability [ Antimicrob Agents Chemother, 2024, 68(4):e0137323.] PubMed: 38380945
Mechanisms of Action of the Host-Targeting Agent Cyclosporin A and Direct-Acting Antiviral Agents against Hepatitis C Virus [ Viruses, 2023, 15(4)981] PubMed: 37112961
RECOVER identifies synergistic drug combinations in vitro through sequential model optimization [ Cell Rep Methods, 2023, 3(10):100599] PubMed: 37797618
Integrative multiomics and in silico analysis revealed the role of ARHGEF1 and its screened antagonist in mild and severe COVID-19 patients [ J Cell Biochem, 2022, 10.1002/jcb.30213] PubMed: 35037717
Hepatitis C virus drugs that inhibit SARS-CoV-2 papain-like protease synergize with remdesivir to suppress viral replication in cell culture [ Cell Rep, 2021, 35(7):109133] PubMed: 33984267
Characterization of fluorescent probe substrates to develop an efficient high-throughput assay for neonatal hepatic CYP3A7 inhibition screening [ Sci Rep, 2021, 11(1):19443] PubMed: 34593846

RETOURBELEID
Selleck Chemicals onvoorwaardelijke retourbeleid zorgt voor een soepele online winkelervaring voor onze klanten. Als u op enigerlei wijze ontevreden bent met uw aankoop, kunt u elk artikel(en) binnen 7 dagen na ontvangst retourneren. In geval van problemen met de productkwaliteit, zowel protocolgerelateerde als productgerelateerde problemen, kunt u elk artikel(en) binnen 365 dagen na de oorspronkelijke aankoopdatum retourneren. Volg de onderstaande instructies bij het retourneren van producten.

VERZENDING EN OPSLAG
Selleck producten worden bij kamertemperatuur vervoerd. Als u het product op kamertemperatuur ontvangt, wees dan gerust, de Selleck kwaliteitsinspectieafdeling heeft experimenten uitgevoerd om te controleren of de normale temperatuurplaatsing van één maand de biologische activiteit van poederproducten niet beïnvloedt. Na ontvangst dient u het product op te slaan volgens de vereisten beschreven in het gegevensblad. De meeste Selleck producten zijn stabiel onder de aanbevolen omstandigheden.

NIET VOOR HUMANE, VETERINAIRE DIAGNOSTISCHE OF THERAPEUTISCHE DOELEINDEN.