1-Azakenpaullone

1-Azakenpaullone은 CDK1/사이클린 B, CDK5/p25 및 GSK-3β를 효과적으로 억제하며, 각각 0.018 μM, 4.2 μM 및 2.0 μM의 IC50을 가집니다. [1] 인간 췌장섬에서 이 화합물(5mM)은 포도당(8mM)과 함께 β-세포 증식을 촉진합니다. [2] 이는 INS-1E 세포 복제를 효과적으로 촉진하고 글루코리포독성으로 유발된 세포 사멸로부터 INS-1E 세포를 보호합니다. [3][4]

1-Azakenpaullone (10 또는 100 pmol, i.c.v.) 전처리는 유도된 운동 과잉 활동, PPI 파괴 및 인지 결함을 완화하고, 로타로드 테스트에서 유도된 운동 협응 장애를 개선합니다. [5]

• 키나아제 준비 및 분석

  GSK-3β는 버퍼 A에서 1 mL당 10 mM 디티오트레이톨 BSA 1 mg에 1/100 희석한 후, 기질로 5 μL의 40 μM GS-1 펩타이드를 사용하여, 최종 부피 30 μL에 15 μM [γ-³²P]ATP (3000 Ci·mmol^-1; 1 mCi·mL^-1) 존재 하에 분석됩니다. 30℃에서 30분 배양 후, 상층액 25 μL 분취량을 2.5×3 cm 크기의 Whatman P81 인산셀룰로스 종이 조각에 스팟하고, 20초 후, 필터를 10 mL 인산/L 물 용액으로 5회 세척합니다. 젖은 필터는 1 mL ACS 섬광액 존재 하에 계수됩니다. CDK1/사이클린 B의 키나아제 활성은 버퍼 C에서 1 mg/mL 히스톤 H1과 함께, 최종 부피 30 μL에 15 μM [γ-³²P]ATP (3000 Ci·mmol^-1; 1 mCi·mL^-1) 존재 하에 분석됩니다. 30℃에서 10분 배양 후, 상층액 25 μL 분취량을 P81 인산셀룰로스 종이에 스팟하고 위에 설명된 대로 처리합니다. CDK5/p25의 활성은 CDK1/사이클린 B에 대해 설명된 대로 버퍼 C에서 분석됩니다. (버퍼 A: 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 1 mM 디티오트레이톨, 25 mM Tris/HCl pH 7.5. 버퍼 C: 균질화 버퍼이지만 5 mM EGTA, NaF 없음 및 단백질 분해 효소 억제제 없음.)

• 세포주

  INS-1E β cell

• 농도

  20 μM

• 배양 시간

  4 days

• 방법

  Cell replication is determined by BrdUrd incorporation after treatment with 1-Azakenpaullone for 24 h. The relative cell number is determined after treatment with this compound for 4 days using the CyQuant cell proliferation assay. Results are presented as fold change relative to control.

• 동물 모델

  Male NMRI mice

• 용량

  ~500 pmol

• 투여

  i.c.v.