2-NBDG

1.1 원액 준비
2-NBDG 1mg을 DDH2O 2.92mL에 녹여 1mM 농도의 화합물을 얻습니다.
참고: 원액은 빛을 피해 -20℃ 또는 -80℃에서 보관하고 반복적인 동결-해동 주기를 피하는 것이 좋습니다.
1.2 2-NBDG 작업 용액 준비.
원액을 혈청 없는 세포 배양 배지 또는 PBS에 희석하여 10-200 μM의 화학 작업 용액을 얻습니다.
참고: 실제 상황에 따라 이 시약 작업 용액의 농도를 조절하십시오.
세포 염색
2.1 부유 세포의 경우: 4℃에서 1,000g으로 3-5분간 원심분리한 다음 상층액을 버립니다. PBS로 5분씩 두 번 세척합니다.
부착 세포의 경우: 세포 배양 배지를 버리고 트립신을 첨가하여 세포를 해리시켜 단일 세포 현탁액을 만듭니다. 4℃에서 1000g으로 3-5분간 원심분리한 다음 상층액을 버립니다. PBS로 5분씩 두 번 세척합니다.
2.2 이 화합물 작업 용액 1mL를 첨가한 다음 실온에서 5-60분간 배양합니다.
2.3 4℃에서 400g으로 3-4분간 원심분리한 다음 상층액을 버립니다.
2.4 PBS로 5분씩 두 번 세척합니다.
2.5 혈청 없는 세포 배양 배지 또는 PBS로 세포를 재현탁합니다. 생존력을 테스트할 경우, 540/570nm에서 광학 밀도(O.D.)를 기록했습니다. 세포 생존력은 대조군 비율로 계산되었고, 약물의 로그 농도에 대해 플롯되어 IC50을 계산했습니다.

2-NBDG 형광 강도는 30분 국소 적용 후 정상 점막에 비해 OSCC 및 OED에서 각각 6배 및 4배 더 높았습니다. 수신기 작동 특성 분석 결과, 신생물 대 양성(정상 및 염증) 탐지에 대해 83%의 민감도와 73%의 특이도를 보였습니다. 신생물에서 더 빠른 형광 시간적 감쇠는 정상 점막보다 더 높은 흡수 및 포도당 대사율을 나타냈습니다. 생체 내 구강 표면에 국소 적용을 통한 이 화합물의 점막 전달은 가능하며, 정상 점막과 신생물을 구분하여 조절되지 않는 포도당 대사의 생체 내 비침습적 분자 이미징을 제공합니다.[2]

• 세포주

  Primary cortical astrocytes

• 농도

  25 μM to 200 μM

• 배양 시간

  1 h

• 방법

  Nine culture plates of astrocytes are used for each uptake experiment. After medium is removed and plates are rinsed in wash buffer, cells are incubated at 37 °C in buffer containing 25–200 μM 2-NBDG. After 1 h, buffers are replaced by fresh incubation buffer with 2 mM glucose and incubation is continued for 5 min. The cells are washed twice with prechilled phosphate-buffered saline and are incubated at room temperature in 0.1 mL cell lysis buffer for 10 min.

• 동물 모델

  4-week old male Golden Syrian Hamsters

• 용량

  1 mg/ml (1 ml)

• 투여

  Oral gavage