4μ8C

4μ8C는 기질(RIDD)이 IRE1의 활성 부위에 접근하는 것을 차단하고 Xbp1 스플라이싱과 IRE1 매개 mRNA 분해를 모두 선택적으로 비활성화합니다. IRE1 억제는 측정 가능한 급성 독성 없이 ER stress를 유도합니다. [1]

4μ8C는 IRE1 억제제로서 CD4+ T 세포에서 IL-4, IL-5, IL-13 생성을 차단합니다. [2]

4μ8c는 죽상동맥경화증 병변을 감소시키고 마우스에서 플라크 발달을 효과적으로 완화하는 IRE1 Inhibitor III입니다.

• 시험관 내 IRE1 RNase 및 RIDD 분석

  방사성 표지된 Xbp1 기질 절단 분석은 포유류 IRE1 반응 완충액을 사용한다는 점을 제외하고는 이전과 동일하게 수행됩니다. 시험관 내 RIDD 기질은 마우스 Min6 세포(Ins2)에서 RT-PCR 또는 클론된 XBP1 cDNA에서 PCR로 분리된 주형에서 ³²P ATP 또는 Cy5-UTP 존재 하에 T7-MAXIscript Kit를 사용하여 시험관 내 전사로 합성됩니다. 결과물은 전체 길이 기질을 얻기 위해 겔 정제됩니다. 반응물은 인광 영상 또는 LI-COR Odyssey 스캐너를 사용한 근적외선 영상을 통한 분석을 위해 15% UREA-PAGE로 분리됩니다.

• 세포주

  Wild-type MEFs

• 농도

  ~128 μM

• 배양 시간

  24 hours

• 방법

  Cells are seeded in phenol red-free cell culture medium in 96 or 24 well dishes at a density of 5 × 10³ or 5 × 10⁴ cells per well, respectively. Cultures are incubated for 16 h before treatment with 4μ8C for 24 h. Cultures are then analyzed by the addition of 200 μM WST1 and 10 μM phenazine metho-sulfate. After development of the reagent for 2 h at 37°C, the hydrolyzed dye is detected by absorbance at 450 nm, after subtracting background and absorbance at 595 nm. Alternatively, cell viability is determined by staining of the adherent culture with crystal violet. Quantitation of the dye uptake is analyzed by extensive washing of the stained cells with water and solublization of the crystal violet in methanol followed by absorbance measurements at 595 nm.

• 동물 모델

  C57BL/6 mice

• 용량

  10 mg/kg

• 투여

  i.p.