A-966492

A-966492는 가장 강력한 PARP 억제제 중 하나입니다. 이 화합물은 PARP-1 효소에 대해 1 nM의 K_i와 전세포 분석에서 1 nM의 EC50을 가지며 탁월한 효능을 나타냅니다. 이는 TMZ의 효능을 용량 의존적으로 유의하게 향상시킵니다. 또한, 이 화학물질은 여러 종에 걸쳐 경구 생체 이용률이 높고, 혈뇌 장벽을 통과하며, 종양 조직으로 분포되는 것으로 보입니다. 이는 유망하고 구조적으로 다양한 벤즈이미다졸 유사체이며 전임상 단계에서 추가로 특성화되고 있습니다. [1]

A-966492는 또한 B16F10 피하 마우스 흑색종 모델에서 병용 요법으로, 그리고 MX-1 유방암 이종이식 모델에서 단일 제제 및 병용 요법으로 우수한 생체 내 효능을 보여줍니다. 또한, 이 화합물은 우수한 약학적 특성을 가지고 있으며 TMZ와의 병용 요법으로 전임상 마우스 종양 모델에서 생체 내 효능을 입증했으며, BRCA1 결핍 MX-1 종양 모델에서는 단일 제제 활성을 보여주었습니다. Sprague-Dawley 랫트, 비글견 및 시노몰구스 원숭이에서 추가로 특성화되었으며, 이 화학물질은 34-72%의 경구 생체 이용률과 1.7-1.9시간의 반감기를 나타냅니다. 생체 내에서, 이는 마우스 B16F10 동계 흑색종 모델에서 TMZ의 효능을 유의하게 향상시키며, 병용 그룹이 우수한 효능을 보여줍니다. [1]

• PARP 효소 분석

  효소 분석은 50mM Tris, pH 8.0, 1mM 디티오트레이톨(DTT) 및 4mM MgCl₂를 포함하는 완충액에서 수행됩니다. PARP 반응물은 1.5μM [³H]-NAD⁺ (1.6μCi/mmol), 200nM 바이오틴화 히스톤 H1, 200nM 단일 가닥 DNA (slDNA), 1nM PARP-1 또는 4nM PARP-2 효소를 포함합니다. SPA 비드 기반 검출을 이용한 자가 반응은 흰색 96웰 플레이트에서 100μL 부피로 수행됩니다. 반응은 PARP와 DNA를 포함하는 50μL의 2× 효소 혼합물에 50μL의 2X NAD⁺ 기질 혼합물을 추가하여 시작됩니다. 이 반응은 150μL의 1.5mM 벤즈아미드(IC50의 약 1 × 10³배)를 추가하여 종료됩니다. 정지된 반응 혼합물 중 170μL는 스트렙타비딘 코팅 Flash 플레이트로 옮겨져 1시간 동안 배양된 후 TopCount 마이크로플레이트 섬광 계수기를 사용하여 계수됩니다. K_i 데이터는 다양한 기질 농도에서의 억제 곡선으로부터 결정됩니다.

• 세포주

  C41 cell

• 농도

  ~10 nM

• 배양 시간

  30 minutes

• 방법

  C41 cells are treated with A-966492 for 30 minutes in a 96-well plate. PARP are activated by damaging DNA with 1 mM H₂O₂ for 10 minutes. Cells are washed with ice-cold phosphate-buffered saline (PBS) once and fixed with prechilled methanol/acetone (7:3) at -20 °C for 10 minutes. After they are air-dried, plates are rehydrated with PBS and blocked using 5% nonfat dry milk in PBS-Tween(0.05%) (blocking solution) for 30 minutes at room temperature. Cells are incubated with anti-PAR antibody 10H (1:50) in blocking solution at room temperature for 60 minutes followed by washing with PBS-Tween20 five times, and incubation with goat antimouse 5(6)-isothiocyanate (FITC)-coupled antibody (1:50) and 1 μg/mL 40,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) in blocking solution at room temperature for 60 minutes. After washing with PBS-Tween20 5 times, analysis is performed using an fmax Fluorescence Microplate Reader set at the excitation and emission wavelength for FITC or the excitation and emission wavelength for DAPI. PARP activity (FITC signal) is normalized with cell numbers (DAPI).

• 동물 모델

  A 0.2 cc amount of a 1:10 dilution of tumor brei in 45% Matrigel and 45% Spinner MEM is injected subcutaneously into the flank of female SCID mice.

• 용량

  12.5, 25, and 50 mg/kg/day, for 14 days

• 투여

  Orally administrated