AG-490

AG-490은 3.5 μM의 IC50으로 HER-2 유도 세포 증식을 억제합니다. [1] 전-B 급성 백혈병(ALL) 세포에서 구성적으로 활성화된 JAK2의 특정 용량 의존적 억제에 상응하여, 이 화합물(5 μM)은 프로그램된 세포 사멸을 유도하여 정상 혈액 생성에 해로운 영향 없이 모든 ALL 세포의 성장을 거의 완전히 차단합니다. 이 화학 물질은 Lck, Lyn, Btk, Syk 및 Src의 활성을 억제하지 않습니다. [2] 그것(60-100 μM)은 Stat3sm의 구성적 활성화를 차단하고, 균상식육종(MF) 종양 세포의 자발적 성장뿐만 아니라 인터루킨 2 유도 성장도 각각 75 μM 및 20 μM의 IC50 값으로 억제합니다. [3] 이 화합물은 JAK3 및 STAT5a/b의 활성을 차단하여 25 μM의 IC50으로 IL-2 매개 인간 T 세포 성장을 강력하게 억제합니다. [4] 그것은 MOPC, MPC11 및 S194 세포에서 Stat3의 구성적 활성화를 유의하게 억제하여 극적인 용량 의존적 세포 사멸을 유도합니다. [6] 이 화학 물질(100 μM)은 Akt 인산화를 억제하고, 핵 인자-κB의 활성화를 억제하며, GSK-3β의 활성화를 유발하여 c-Myc의 감소로 이어집니다. 그것(50 μM)은 Bcr-Abl의 T315I 및 E255K 돌연변이를 발현하는 BaF3 세포의 세포 사멸을 유도할 수 있습니다. [7] 이 화합물은 30 μM에서 Epo 유도 야생형 JAK2 인산화뿐만 아니라 JAK2 V617F 돌연변이의 구성적 인산화도 억제합니다. 또한 BaF3 세포에서 JAK2 V617F 돌연변이에 의해 유도되는 사이토카인 독립적 세포 성장을 강력하게 억제합니다. [8]

AG-490 투여는 비처리 마우스의 골수에서 CD45⁺ 및 HLA-DR⁺ 세포 수를 48% 및 46%에서, 그리고 비처리 마우스의 비장에서 38% 및 22%에서 탐지 불가능한 수준으로 급격히 감소시킵니다. [2] 이 화합물의 생체 내 투여는 마우스 골수종 종양 세포의 세포 사멸을 유발하지만, IL-12 매개 대식세포 활성화 및 림프구에 의한 IFN-γ 생성을 억제하지 않습니다. [6] 시험관 내 JAK2 V617F 돌연변이 활성 차단과 일치하게, 이 화학 물질을 0.5 mg/일로 10일 동안 처리하면 누드 마우스에서 JAK2 V617F 돌연변이 유도 종양 형성 및 종양 세포 침습을 효과적으로 억제합니다. [8] 이 약물과 IL-12의 병용 요법은 마우스 골수종 종양 모델에서 단독 요법보다 더 큰 항종양 효과를 유도합니다. [6]

• 시험관 내 키나제 자가인산화

  AG-490은 DMSO 10%-H₂O-에탄올 45%에 용해됩니다. 조막 추출물(0.125 μg/mL)은 50 mM HEPES 완충액, pH 7.6, 및 125 mM NaCl에서 EGF(20 nM)로 4 °C에서 15분 동안 사전 활성화됩니다. EGFR 또는 ErbB2 키나제의 자가인산화 활성은 V자형 96웰 플레이트에서 4 °C에서 30초 동안 분석됩니다. 막 추출물(8 μL)은 반응 혼합물(12 μL, 50mM HEPES, pH 7.4, 125 mM NaCl, 12 mM M₈Ac₂, 2 mM MnCl₂, 1 mM NaVO₃, 1 μM ATP, 및 1 μCi[γ-³²P]ATP, 최종 농도) 및 이 화합물의 증가하는 농도(4 μL)를 포함하는 각 웰에 첨가됩니다. 뜨거운 샘플 버퍼를 첨가하여 반응을 중단시킨 후, 샘플은 6% SDS-폴리아크릴아미드 젤 전기영동 미니젤에서 실행되고, 젤은 건조되며, 선형 노출 시간 동안 오토라디오그래피가 수행됩니다. 수용체 밴드는 덴시토메트릭 방식으로 스캔되고, 결과는 Ez-Fit 프로그램으로 분석됩니다. JAK2의 자가인산화 분석을 위해, JAK2는 이 화학 물질의 증가하는 농도(0-50 μM)로 16시간 동안 전처리된 G2 세포 용해물에서 항-JAK2 항체를 사용하여 면역침전됩니다. 면역 복합체는 그 후 항-포스포티로신 항체로 면역블롯팅됩니다. JAK2 자가인산화를 평가하여 시험관 내 키나제 활성의 용량 의존적 억제가 입증됩니다.

• 세포주

  Pre-B ALL

• 농도

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~ 50 μM

• 배양 시간

  16 hours

• 방법

  Cells are exposed to different concentrations of AG-490 for 16 hours. For the determination of cell proliferation, [³H]tymidine (1 μCi) is added 6 hours or more before the cultures are terminated. Cells are then collected and samples counted in a liquid scintillation counter.

• 동물 모델

  SCID mice intravenously injected with ALL cells

• 용량

  0.85 mg + 0.5 mg daily

• 투여

  Continuous pump infusion supplemented with daily intraperitoneal injections