Apatinib (YN968D1) mesylate

Apatinib (YN968D1)은 잠재적인 항혈관신생 및 항종양 활동을 가진 새로운 경구 생체이용 가능한 선택적 억제제입니다. Apatinib은 VEGFR2에 선택적으로 결합하고 억제합니다. Apatinib은 또한 Ret, c-kit 및 c-src의 활동을 각각 0.013 μM, 0.429 μM 및 0.53 μM의 IC50으로 강력하게 억제할 수 있습니다. Apatinib은 VEGFR-2, c-kit 및 PDGFRβ의 세포 인산화를 억제합니다. Apatinib은 20 ng/mL VEGF에 의해 자극된 증식을 유의하게 억제합니다 (IC50 = 0.17μM). Apatinib은 FBS에 의해 유도된 인간 제대정맥 내피 세포의 증식, 이동 및 튜브 형성을 효과적으로 억제하고 쥐 대동맥 고리의 싹을 차단했습니다. [1] Apatinib은 수송 기능을 억제함으로써 ABCB1 및 ABCG2 매개 MDR을 역전시키지만, AKT 또는 ERK1/2 경로를 차단하거나 ABCB1 또는 ABCG2 발현을 하향 조절함으로써는 역전시키지 않습니다. Apatinib은 확립된 ABCB1 및 ABCG2 기질의 세포독성을 유의하게 강화하고 ABCB1 또는 ABCG2 과발현 세포에서 DOX 및 Rho 123의 축적을 증가시켰습니다. 또한 Apatinib은 [¹²⁵I]iodoarylazidoprazosin을 이용한 ABCB1 및 ABCG2의 광친화성 표지를 농도 의존적으로 유의하게 억제했습니다. [2]

Apatinib은 광범위한 인간 종양 이종이식편의 성장을 유의미한 용량 의존적으로 억제합니다. [1] Apatinib은 누드 마우스 이종이식 모델에서 ABCB1 매개 MDR을 역전시킵니다. [2] Apatinib은 K562/ADR 이종이식편을 가진 누드 마우스에서 독소루비신의 항종양 활성을 유의하게 향상시킵니다. [3]

• 효소 결합 면역흡착 분석법

  티로신 함유 기질 용액으로 폴리(글루, 알라, 티르) 6:3:1 무작위 공중합체를 사용합니다. 기질은 PBS에 1 mg/mL 스톡으로 -20 °C에서 보관하고, 96웰 플레이트(100 μL/웰)를 코팅하기 위해 PBS로 500배 희석합니다. 플레이트는 분석 전날 코팅하고 접착 씰로 밀봉한 후 4 °C에서 밤새 보관합니다. 분석 당일, 기질 용액을 버리고 분석 플레이트 웰을 PBST(0.05% v/v Tween 20 포함 PBS)로 한 번, Hepes 버퍼(50 mM, pH 7.4)로 한 번 세척합니다. 시험 화합물은 10% DMSO 탈이온수로 희석하고 25 μL 부피를 세척된 분석 플레이트 웰에 옮깁니다. 8 μM ATP를 함유하는 염화망간 용액(40 mM)을 모든 시험 웰에 추가합니다(25 μL). 분석의 동적 범위를 결정하기 위해 화합물 희석액과 ATP 유무에 따른 염화망간 용액을 포함하는 대조군 및 공백 웰도 포함합니다. 새로 희석된 효소(50 μL)를 각 웰에 추가하고 플레이트를 실온에서 20분 동안 배양합니다. 그런 다음 액체를 버리고 웰을 PBST로 두 번 세척합니다. 0.5% (w/v) 소 혈청 알부민(BSA)을 함유하는 PBST로 1:6000 희석된 마우스 IgG 항-포스포티로신 항체를 추가하고(100 μL/웰), 액체를 버리고 웰을 PBST로 두 번 세척하기 전에 플레이트를 실온에서 1시간 동안 배양합니다. 0.5% (w/v) BSA를 함유하는 PBST로 1:500 희석된 고추냉이 과산화효소(HRP) 접합 양 항-마우스 Ig 항체를 추가하고(100 μL/웰), 액체를 버리고 웰을 PBST로 두 번 세척하기 전에 플레이트를 실온에서 추가로 1시간 동안 배양합니다. 0.03% (w/v) 과붕산나트륨을 함유하는 50 mM 인산-시트르산 완충액(pH5.0)에 1 mg/mL의 2,2‘-아지노-비스(3-에틸벤즈티아졸린-6-설폰산) 용액을 신선하게 준비하고, 각 웰에 100 μL를 추가합니다. 그런 다음 플레이트를 실온에서 20-60분 동안 배양하여 405 nm에서 측정된 대조군 웰의 광학 밀도 값이 약 1.0이 될 때까지 기다립니다. 화합물 효소 억제에 대한 IC50 값은 공백 값을 뺀 후 Microcal Origin을 사용하여 보간합니다.

• 세포주

  HUVEC

• 농도

  ~25 μM

• 배양 시간

  72 h

• 방법

  The HUVEC are seeded into 96-well plates. After 24 h of incubation, cells are exposed to the test agents (vehicle as control) together with 20 ng/mL VEGF or 20% FBS for another 72 h. After fixation with 10% trichloroacetic acid, the cells are stained with 0.4% sulforhodamine B for 30 min at 37 °C and then washed with 1% acetic acid. Tris is added to dissolve the complex, and the optical density is measured at 520 n

• 동물 모델

  Ls174t, HCT 116, SGC-7901, HT-29, A549, NCI-H460 xenografted BALB/cA nude mice

• 용량

  50, 100, 200 mg/kg

• 투여

  p.o.