Avasimibe

1 μg/mL 농도의 Avasimibe는 인간 단핵구 유래 대식세포(HMMs)에서 거품 세포 형성 중 LDL 결합을 억제하고 스캐빈저 수용체 수를 감소시켜 총 콜레스테롤(TC)과 에스테르화 콜레스테롤(EC)을 감소시킵니다. 이 화합물은 2 μg/mL 농도에서 10 μg/ml LDL과 사전 배양한 확립된 HMM 거품 세포에서 콜레스테롤 유출을 증가시킵니다. [1] 이는 원숭이 일차 간세포 배양 배지에서 Lipoprotein(a) 축적을 용량 의존적으로 11.9% -31.3% 억제하며, 이러한 변화는 주로 ApoA 감소와 관련이 있습니다. [2] 이 화학 물질을 HepG2 세포에서 10 nM, 1 μM 및 10 μM 농도로 24시간 동안 배양하면 ApoB 분비가 각각 25%, 27%, 43% 감소합니다. 이는 ApoB 합성이 감소하는 것이 아니라 ApoB의 세포 내 분해가 촉진되어 ApoB 분비가 감소하기 때문입니다. [3] 이 화합물은 분석 샘플의 총 억제제 농도를 고려하여 IC-21 대식세포에서 3.3 μM의 IC50으로 ACTC를 억제합니다. [4] 이는 인간 P450 동효소 CYP2C9, CYP1A2 및 CYP2C19를 각각 2.9 μM, 13.9 μM 및 26.5 μM의 IC50으로 억제합니다. [5] 이 억제제는 교모세포주에서 ACAT-1 발현과 콜레스테롤 에스테르 합성을 억제합니다. 이는 카스파제-8 및 카스파제-3 활성화로 인한 세포 주기 정지 및 세포 사멸을 유도하여 교모세포의 성장을 억제합니다. [6]

Avasimibe는 정상 사료를 섭취하고 3주 동안 매일 30 mg/kg의 CI-1011을 경구 투여한 9마리의 건강한 수컷 원숭이에서 Lipoprotein(a) 및 총 콜레스테롤 수치를 유의하게 감소시켰으며, Lipoprotein(a) 및 총 콜레스테롤 수치는 대조군 수준의 각각 68% 및 73%로 감소했습니다. 이 화합물은 주로 저밀도 지질단백질(LDL) 감소로 인해 총 콜레스테롤을 감소시킵니다. [2] 이는 어린 인간 APP 형질전환 마우스의 뇌 추출물에서 피질 및 해마의 아밀로이드 플라크 부하를 감소시키고 불용성 Abeta40 및 Abeta42와 아밀로이드 전구 단백질(APP)의 C-말단 절편 수준을 감소시킵니다. 이 화학 물질은 노령 인간 APP 형질전환 마우스에서 성상교세포증 억제 및 미세아교세포 활성 향상을 통해 확산성 아밀로이드 플라크를 감소시킵니다. [7]

• P450 억제 연구

  모든 억제 분석에는 최소 15명의 기증자로부터 얻은 인간 간 미크로솜(HLM) 풀이 사용됩니다. IC50 측정의 경우, 기질 프로브는 대략적인 생체 외 Km 값으로 사용됩니다. 모든 배양은 100 mM 인산 칼륨 완충액(pH 7.4)과 1 mM NADPH로 수행됩니다. CYP1A2 억제 연구를 위해, 0.5 ml의 총 부피로, 0.1 mg/ml HLM, 30 μM 페나세틴, 1 mM NADPH와 이 화합물(0, 0.3, 0.75, 1.5, 3, 7.5, 15, 30 및 40 μM의 50 mM 농도)이 포함된 인산 칼륨 완충액(pH 7.4)에서 이중으로 배양을 수행합니다. 37 °C에서 7분 동안 사전 배양한 후, NADPH를 첨가하여 효소 반응을 시작합니다. 반응 혼합물은 25분 후 500 μl의 얼음처럼 차가운 100 ng/ml 파라세타몰-D₄/CH₃CN으로 퀀칭됩니다. 표준물(4-아세트아미도페놀, 단일선)과 품질 관리(낮음, 중간 및 높음에 대한 삼중선)는 실온에서 준비됩니다. 혼합 후, 샘플 0.2 ml를 다른 플레이트로 옮기고 3000 rpm에서 10분간 원심분리한 후 LC/MS/MS 분석을 위해 제출합니다. Supelco Discovery Amide C16, 100 × 2.1 mm (5-μm 입자 크기) 컬럼 (Supelco, Bellefonte, PA)이 사용됩니다. 이동상은 등용매이며, 0.2 ml/min에서 40:60 [아세토니트릴/포름산, 0.1% (v/v)]입니다.

• 세포주

  primary human monocyte-derived macrophages

• 농도

  1 μg/mL or 2 μg/mL

• 배양 시간

  48 hours

• 방법

  For foam cell formation, the growth medium (RPMI medium containing 10% human serum) is aspirated and the BMMs are rinsed four times with RPMI medium, and then HMMs are exposed to RPMI medium containing bovine serum albumin (BSA, 0.2%) and (DMSO, 0.2%, vehicle for CI-1011) (control medium) with and without agacLDL (100 μg protein/ml) and this compound (1 μg/ml) for 48 hours. For cholesterol efflux experiments, HMMs are preincubated with ag-acLDL (100 μg protein/ml) for 24h, and then exposed to control RPMI medium with and without HDL (100 μg protein/ml), this compound (2 μg/ml) or HDL plus this compound (2 μg/ml) for 24–48 hours. Additionally, the appearance of [¹⁴C]FC in the medium is monitored by first preincubating HMMs with RPMI medium containing ag-acLDL (100 μg protein/ml) radiolabeled with [4-¹⁴C]FC (0.5 μCi/ml) in an ethanolic spritz (final concentration, 0.1%) for 24 h. The medium is removed, cells rinsed three times with RPMI medium, and then cells are exposed to control RPMI medium with and without this compound (1–10 μg/ml) for 4–48 h. At each time point, the medium is aspirated and centrifuged to pellet nonadherent cells. The appearance of [¹⁴C]FC in the medium is measured by liquid scintillation spectroscopy. Cellular lipids are extracted using hexane:isopropanol (3:2, v/v) for 1 h. The distribution of cellular radiolabeled cholesterol is measured by subjecting an aliquot of the cell extract and FC and EC standards to thin layer chromatography using petroleum ether:hexane:glacial acetic acid solvent system (85:15:2, v/v). The percent FC efflux is calculated as: medium [¹⁴C]FC dpm/ cell [¹⁴C] dpm×100. FC and TC mass are quantified by gas liquid chromatography using stigmasterol (1 mg/ml) as an internal standard. EC mass is calculated as the difference between TC and FC, and all values are normalized to cell protein. The MBC is defined as the lowest concentration that exhibited 99.9% or more reduction of the numbers of colonies compared with the cfu in the initial inoculum.

• 동물 모델

  male cynomolgus monkeys

• 용량

  30 mg/kg

• 투여

  Orally at a single dose per day for 3 weeks