BMS-777607

BMS-777607은 선택적 ATP 경쟁적 Met 키나제 억제제로, GTL-16 세포 용해물에서 20 nM의 IC50으로 c-Met의 자가인산화를 강력하게 차단하고, GTL-16 세포주, H1993 및 U87과 같은 Met-구동 종양 세포주에서 선택적인 증식 억제를 보여줍니다. [1] 이 화합물은 PC-3 및 DU145 전립선암 세포에서 IC50이 <1 nM인 간세포 성장 인자(HGF) 유발 c-Met 자가인산화를 억제합니다. 이 화합물은 종양 세포 성장에 거의 영향을 미치지 않지만, PC-3 및 DU145 세포에서 HGF 유도 세포 분산에 억제 효과를 나타내며, 0.5 μM에서 거의 완전한 억제를 보입니다. 또한 두 세포주 모두에서 용량 의존적으로 자극된 세포 이동 및 침윤을 억제합니다(IC50 < 0.1 μM). [2] 이 화합물(~10 μM)을 고도로 전이성인 마우스 KHT 세포에 2시간 동안 적용하면 총 c-Met에 영향을 미치지 않으면서 IC50이 10 nM인 자가인산화된 c-Met의 기본 수준을 강력하게 제거하여 ERK, Akt, p70S6K 및 S6을 포함한 하류 신호 전달 분자의 인산화를 용량 의존적으로 억제합니다. 이 화합물(~1 μM)로 24시간 처리하면 MET 유전자 발현 감소와 일치하는 나노몰 범위의 용량에서 KHT 세포 분산, 운동성 및 침윤을 강력하게 억제하고, 세포 증식 및 콜로니 형성에 미미한 영향을 미칩니다. [3]

BMS 777607 (6.25-50 mg/kg)의 경구 투여는 관찰된 독성 없이 무흉선 생쥐의 GTL-16 인간 종양 이종이식편의 종양 부피를 유의하게 감소시킵니다. [1] 이 화합물 (25 mg/kg/일)의 투여는 KHT 폐 종양 결절 수 (28.3%)를 감소시키고, 형태학적 출혈을 개선하며, 대조군 치료와 비교하여 명백한 전신 독성 없이 설치류 섬유육종 KHT 세포를 주사한 6-8주령 암컷 C3H/HeJ 생쥐에서 전이성 표현형을 유의하게 손상시킵니다. 이 화학 물질의 저용량 (10 mg/kg) 또한 대조군 차량에 비해 폐 결절 형성의 경미하지만 유의하지 않은 억제를 제공합니다. [3]

• Met 키나제 분석

  키나제 반응은 바큘로바이러스 발현 GST-Met, 3 μg의 폴리(Glu/Tyr), 0.12 μCi ³³P γ-ATP, 30 μL의 키나제 완충액(20 mM Tris-Cl, 5 mM MnCl2, 0.1 mg/mL BSA, 0.5 mM DTT)에 있는 1 μM ATP로 구성됩니다. 반응은 30 °C에서 1시간 동안 배양되고 차가운 트리클로로아세트산(TCA)을 최종 농도 8%로 첨가하여 중지됩니다. TCA 침전물은 Filtermate 범용 수확기를 사용하여 GF/C 유니필터 플레이트에 수집되고, 필터는 TopCount 96웰 액체 섬광 계수기를 사용하여 정량화됩니다. 기질 인산화의 50%를 억제하는 데 필요한 농도(IC50)를 결정하기 위해 용량 반응 곡선이 생성됩니다. 이 화합물은 DMSO에 10 mM로 용해되고 10가지 농도에서 중복으로 평가됩니다.

• 세포주

  Rodent fibrosarcoma KHT cells

• 농도

  Dissolved in DMSO as a stock solution (10 mM), final concentration ~10 μM.

• 배양 시간

  2, 24 and 96 hours

• 방법

  KHT cells are exposed to serial dilution of BMS 777607 for 96 hours, then the MTT assay and trypan blue exclusion are used for the determination of cell proliferation and cell death, respectively. KHT cell colonies are incubated with this compound for 24 hours and then stained with crystal violet (0.1%) and photographed for the assessment of cell scattering. 2 mm scratch on the confluent KHT cell monolayer is made using a sterilized 1 ml pipette tip followed by treated with this compound for 24 hours, then the number of cells that have migrated into the denuded area is counted on 4 random fields for the evaluation of cell migration. For the examination of cell invasion, the commercial transwell inserts (8 μm pore membrane) pre-loaded with Matrigel are incubated with serum-free medium in the presence or absence of this compound at 37 °C for 2 hours to allow rehydration of Matrigel. Then cells suspended in serum-free medium are loaded onto the top chamber (5 × 10³/insert) and complete medium (containing 10% FBS) is used in the lower chamber as a chemoattractant. After incubation for 24 hours, the Matrigel is removed and the inserts are stained with crystal violet. Invaded cells on the underside of the filter are photographed and counted.

• 동물 모델

  Rodent fibrosarcoma KHT cells are established in female C3H/HeJ mice.

• 용량

  10-25 mg/kg.

• 투여

  Oral gavage once daily.