Daclatasvir (BMS-790052)

카탈로그 번호S1482 배치:S148202

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기술 자료

화학식

C40H50N8O6
분자량 738.88 CAS 번호 1009119-64-5
용해도 (25°C)* 시험관 내(In vitro) DMSO 148 mg/mL (200.3 mM)
Ethanol 148 mg/mL (200.3 mM)
Water Insoluble
생체 내(In Vivo) (개별적으로 순서대로 용매를 제품에 첨가하십시오.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml은 약간 용해되거나 불용해됨을 의미합니다.
* Selleck은 모든 화합물의 용해도를 자체적으로 테스트하며, 실제 용해도는 게시된 값과 약간 다를 수 있습니다. 이는 정상적인 현상이며, 약간의 배치 간 변동으로 인해 발생합니다.
* 실온 배송 (안정성 테스트 결과 이 제품은 냉각 조치 없이 배송될 수 있음을 보여줍니다.)

원액 준비

생물학적 활성

설명 Daclatasvir (BMS-790052, EBP883)는 광범위한 HCV 복제 유전자형 및 세포 배양에서 JFH-1 유전자형 2a 감염성 바이러스에 대해 EC50이 9-50 pM인 HCV NS5A의 고도로 선택적인 억제제입니다. 3상.
표적
HCV NS5A
9 pM-50 pM(EC50)
시험관 내(In vitro) Daclatasvir (BMS-790052)는 지금까지 보고된 HCV 복제에 대한 가장 강력한 억제제 중 하나입니다. 이 화합물의 평균 EC50 값은 HCV 유전자형 1a 및 1b 복제체에 대해 각각 50 및 9 pM입니다. 이는 최소 105의 치료 지수 (CC50/EC50)를 나타내며, 10 μM보다 높은 EC50을 갖는 10가지 RNA 및 DNA 바이러스 패널에 대해 비활성입니다. 이는 HCV에 대한 특이성을 확인합니다. HCV 유전자형 1b 복제체를 보유한 Huh7 세포에서, 이 화합물은 EC50 값이 1-15 pM 범위로 일시적 및 안정적인 HCV 게놈 복제를 모두 차단합니다. 100 pM 또는 1 nM 농도에서 NS5A의 세포 내 위치 및 생화학적 분획을 변경하는 것으로 나타났습니다. 이 화합물은 EC50이 7-13 pM인 HCV 유전자형-4 NS5A 유전자를 포함하는 하이브리드 복제체를 억제합니다. NS5A의 잔기 30은 하이브리드 복제체에서 BMS-790052 매개 저항성의 중요한 부위입니다.
특징 피코몰 EC50 값을 갖는 최초의 고도로 선택적인 C형 간염 바이러스 (HCV) NS5A 억제제.

프로토콜 (참조)

키나아제 분석:[4]
  • HCV NS5A 억제제에 대한 FRET 분석

    이 펩타이드 (Ac-Asp-Glu-Asp [EDANS]-Glu-Glu-Abu-[COO] Ala-Ser-Lys [DABCYL]-NH2)는 한쪽 끝 근처에 형광 공여체 {EDANS, 5-[(2-아미노에틸)아미노]나프탈렌-1-술폰산}를, 다른 쪽 끝 근처에 수용체 {DABCYL, 4-[(4-디메틸아미노)페닐]아조}벤조산}를 포함합니다. 공여체와 수용체 사이의 분자간 공명 에너지 전달은 펩타이드의 형광을 억제하지만, NS3 Protease가 펩타이드를 절단함에 따라 생성물은 공명 에너지 전달 억제로부터 해제됩니다. NS3 Protease에 의해 더 많은 기질이 절단될수록 공여체의 형광은 시간에 따라 증가합니다. 검출 시약은 다음과 같습니다: 5배 루시페라제 세포 배양 용해 시약을 dH2O로 1배 희석하고, NaCl (150 mM)과 FRET 펩타이드 (20 μM)를 첨가합니다. HCV-Huh-7 세포를 96웰 플레이트에 넣고 밤새 부착시켰습니다 (웰당 1×104 세포). 다음 날 Daclatasvir (BMS-790052)를 웰에 첨가하고 플레이트를 72시간 동안 배양했습니다. 그 다음 플레이트를 PBS로 헹구고, 앞서 언급된 FRET 펩타이드 검출 시약 30 μL를 각 웰에 첨가하여 FRET 분석을 수행했습니다. 신호는 Cytofluor 4000 장비를 사용하여 340 nm (여기)/490 nm (방출) 자동 모드로 설정하고 20주기 이하로 실행하며 운동 모드에서 플레이트를 판독하여 얻었습니다. FRET 분석 후, 각 웰에 루시페라제 기질 40 μL를 첨가하고 루시페라제 활성을 측정했습니다.
세포 분석:[1]
  • 세포주

    HCV replicon cells (Huh7)

  • 농도

    0.1 pM - 50 μM, dissolved in DMSO (the final concentration of DMSO is 0.5%)

  • 배양 시간

    72 hours

  • 방법

    Daclatasvir (BMS-790052) is added to 96-well plates containing HCV replicon cells seeded approximately 12 hours before in 200 µL media. The cell plates are tested for replication activity and cytotoxicity after 72 hours of incubation. Cytotoxicity is measured with CellTiter-Blue, after which the media and dye are removed, plates are inverted and the remaining liquid is blotted with paper towels. Replication activity of the HCV genotype 1a cell lines is quantified using Renilla luciferase. 1× Renilla luciferase lysis buffer (30 µL) is added to each well and plates are incubated with gentle shaking for 15 min. Renilla luciferase substrate (40 µL) is then added and the signals are detected using a Top Count luminometer set for light emission quantification. One hundred per cent activity is calculated for each cell line for the DMSO-only wells; percentage activity is calculated for each concentration of the inhibitor by dividing the average value for wells containing this compound by the average value for wells containing DMSO.

참조

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20410884/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21513964/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22203595/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15793110/

고객 제품 검증

<p>The toxicity of BMS-790052 (BMS) and Telaprevir (TPV) was measured by seeding 96-well plates to 70% confluence and exposing the cells to up to 50 μM of compound for 72 hours. MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] was added to each well at a final concentration of 500 μg/ml 4 h before dissolving crystals in 100 μl of DMSO and measuring at 550 nm UV wavelengths. The 50% cytotoxic concentration (CC50) was then calculation using the OD550 value and the following formula: log CC50=log concentration of HPP-[(HPP-50)/(HPP-LPP)×log d HPP: highest protective percentage closest to 50% LPP: Lowest protective percentage closest to 50% d: dilution factor</p>

, 2011 , Dr. Julie Sheldon,Dr Esteban Domingo and Dr Celia Perales

<p>Huh7.5 cells were infected with JFH-1 (2a) strain. Once the cells reached 80% infectivity they were treated with pMconcentration of BMS790052 for two different time points. Cells were collected in SDS sample loading buffer and probed for NS5A and GAPDH. After 16hrs hyperphosphorylated NS5A disappeared with increasing concentration of the drug. 40hrs of treatment resulted complete disappearance of NS5A. GAPDH is internal control.</p><div><div> </div></div><p> </p>

, 2011 , Dr. Anita Nag of Florida State University

<p>80% infected HCV JFH-1 cells were treated with several concentrations of BMS790052 in pMrange. Cells were fixed after 16hrs and NS5A was probed.Cells treated with BMS790052 shows NS5A present in clusters compared to an even cytoplasmic distribution in untreated cells.</p>

, 2011 , Dr. Anita Nag of Florida State University

Sensitivity of PR63cc to the combinatory treatment with asunaprevir and daclatasvir. Huh7.5.1 cells infected with PR63cc or JFH1 at an MOI of 0.05 for 3 days were treated with either asunaprevir, daclatasvir or in combination for another 3 days. 40 nM asunaprevir and 0.05 nM daclatasvir, approximately the EC50 concentration of the each inhibitor for JFH1, were used. The antiviral efficiency of each compound was evaluated by quantifying the intracellular HCV RNA by RT-qPCR. Data were expressed as the percentage of mock treatment control. The error bars were calculated from two independent experiments. ns, P > 0.05. *, P < 0.05.

데이터 출처 [ , , Antiviral Res, 2017, 139:18-24 ]

Sellecks Daclatasvir (BMS-790052) 인용됨 58 출판물

Rapid hepatitis C virus replication machinery removal after antiviral treatment with DAA monitored by multimodal imaging [ Structure, 2025, S0969-2126(25)00193-5] PubMed: 40553718
Hepatitis C virus-induced differential transcriptional traits in host cells after persistent infection elimination by direct-acting antivirals in cell culture [ J Med Virol, 2024, 96(7):e29787] PubMed: 38988177
Antiviral drugs prolong survival in murine recessive dystrophic epidermolysis bullosa [ EMBO Mol Med, 2024, 16(4):870-884] PubMed: 38462666
Patient-derived rhabdomyosarcoma cells recapitulate the genetic and transcriptomic landscapes of primary tumors [ iScience, 2024, 27(10):110862] PubMed: 39319271
Unraveling the dynamics of hepatitis C virus adaptive mutations and their impact on antiviral responses in primary human hepatocytes [ J Virol, 2024, e0192123.] PubMed: 38319104
Mechanisms of Action of the Host-Targeting Agent Cyclosporin A and Direct-Acting Antiviral Agents against Hepatitis C Virus [ Viruses, 2023, 15(4)981] PubMed: 37112961
Hepatitis C virus cell culture adaptive mutations enhance cell culture propagation by multiple mechanisms but boost antiviral responses in primary human hepatocytes [ bioRxiv, 2023, 2023.11.22.568224] PubMed: 38045248
Combination of antiviral drugs inhibits SARS-CoV-2 polymerase and exonuclease and demonstrates COVID-19 therapeutic potential in viral cell culture [ Commun Biol, 2022, 5(1):154] PubMed: 35194144
Going Viral: An Investigation into the Chameleonic Behaviour of Antiviral Compounds [ Chemistry, 2022, e202202798.] PubMed: 36286339
Correlation of hepatitis C virus-mediated endoplasmic reticulum stress with autophagic flux impairment and hepatocarcinogenesis [ Med Mol Morphol, 2021, 10.1007/s00795-020-00271-5] PubMed: 33386512

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