SKI-606 (Bosutinib)

Bosutinib은 비-Src 계열 키나아제에 비해 Src에 선택적이며 IC50이 1.2 nM이고, Src 의존성 세포 증식을 IC50 100 nM로 강력하게 억제합니다. [1] 이 화합물은 Bcr-Abl 양성 백혈병 세포주 KU812, K562 및 MEG-01의 증식을 유의하게 억제하지만 Molt-4, HL-60, Ramos 및 기타 백혈병 세포주는 억제하지 않으며, 각각 5 nM, 20 nM 및 20 nM의 IC50을 가지며 STI-571보다 강력합니다. STI-571과 유사하게, Abl-MLV 형질전환 섬유아세포에 대해 IC50 90 nM의 항증식 활성을 나타냅니다. 이 화학물질은 CML 세포에서 Bcr-Abl 및 STAT5의 티로신 인산화와 섬유아세포에서 발현되는 v-Abl을 각각 ~50 nM, 10-25 nM 및 200 nM 농도에서 제거하여 Lyn/Hck 인산화의 Bcr-Abl 하류 신호 억제를 유도합니다. [2] 유방암 세포의 증식 및 생존을 억제할 수는 없지만, IC50 ~250 nM로 유방암 세포의 운동성 및 침습을 유의하게 감소시키며, 이는 세포 간 접착 및 β-카테닌의 막 국소화 증가와 관련이 있습니다. [3]

Bosutinib (60 mg/kg/day)은 누드 마우스에서 Src-형질전환 섬유아세포 이종이식편 및 HT29 이종이식편에 대해 각각 18% 및 30%의 T/C로 활성을 나타냅니다. [1] 이 화합물의 5일 경구 투여는 용량 의존적으로 마우스의 K562 종양 성장을 유의하게 억제했으며, 100 mg/kg 용량에서 큰 종양이 근절되고 150 mg/kg에서는 명백한 독성 없이 종양이 사라졌습니다. [2] 누드 마우스에서 50 mg/kg 1일 2회 용량으로 Colo205 이종이식편에 대해 비활성이었기 때문에, Colo205 이종이식편에 대해서는 75 mg/kg 1일 2회 용량의 이 화학물질 투여가 필요하며, HT29 이종이식편에 대한 유의한 용량 의존적 능력과 달리 이 화합물의 용량 증가는 추가적인 이점이 없습니다. [4]

• Src 및 Abl 키나아제 분석

  Src 키나아제 활성은 ELISA 형식으로 측정됩니다. Src(3 단위/반응), 반응 버퍼(50 mM Tris-HCl pH 7.5, 10 mM MgCl₂, 0.1 mM EGTA, 0.5 mM Na₃VO₄) 및 cdc2 기질 펩타이드를 다양한 농도의 Bosutinib에 첨가하고 30°C에서 10분 동안 배양합니다. 반응은 ATP를 최종 농도 100 μM로 첨가하여 시작하고, 30°C에서 1시간 동안 배양한 후 EDTA 첨가로 중단합니다. 후속 단계는 제조업체의 지침을 따릅니다. Abl 키나아제 분석은 DELFIA 고체상 유로퓸 기반 검출 분석 형식으로 수행됩니다. 비오틴화된 펩타이드(2 μM)는 스트렙타비딘 코팅 미세적정 플레이트에 1 mg/mL 오발부민이 포함된 PBS에서 1.5시간 동안 결합됩니다. 플레이트는 PBS/0.1% Tween 80으로 1시간 동안 세척한 후 PBS로 세척합니다. 키나아제 반응은 30°C에서 1시간 동안 배양됩니다. Abl 키나아제(10 단위)는 50 mM Tris-HCl(pH 7.5), 10 mM MgCl₂, 80 μM EGTA, 100 μM ATP, 0.5 mM Na₃VO₄, 1% DMSO, 1 mM HEPES(pH 7.0), 200 μg/mL 오발부민 및 다양한 농도의 이 화합물과 혼합됩니다. 반응은 최종 농도 50 mM EDTA로 중단됩니다. 반응은 Eu 표지된 포스포티로신 항체 및 DELFIA 강화 용액으로 모니터링됩니다.

• 세포주

  Abl-MLV, Rat 2, KU812, K562, and MEG-01 cells

• 농도

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~1 μM

• 배양 시간

  72 hours

• 방법

  Cells are exposed to various concentrations of Bosutinib for 72 hours. Anchorage-independent proliferation of Abl-MLV-transformed fibroblasts is measured in 96-well ultra-low binding plates treated with Sigmacote to block residual cell attachment. Cell proliferation is measured with MTS or Cell-Glo. For the determination of cell cycle or cell death, cells are prepared for FACS analysis in the CycleTest Plus DNA reagent kit and analyzed on a fluorescence-activated cell sorter flow cytometer.

• 동물 모델

  Nude female mice injected with K562 cells

• 용량

  ~150 mg/kg/day

• 투여

  Oral gavage