Lexibulin (CYT997)

카탈로그 번호S2195 배치:S219502

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기술 자료

화학식

C24H30N6O2
분자량 434.53 CAS 번호 917111-44-5
용해도 (25°C)* 시험관 내(In vitro) DMSO 86 mg/mL (197.91 mM)
Ethanol 86 mg/mL (197.91 mM)
Water Insoluble
생체 내(In Vivo) (개별적으로 순서대로 용매를 제품에 첨가하십시오.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
5%DMSO 40%PEG300 5%Tween80 50%ddH2O

Selleck 연구소에서 검증했습니다. 이 제형에 대한 조정이 필요한 경우 맞춤형 테스트를 위해 당사 영업팀에 문의하십시오.

 4.3mg/ml (9.90mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 86 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution
5% DMSO 95% Corn oil

Selleck 연구소에서 검증했습니다. 이 제형에 대한 조정이 필요한 경우 맞춤형 테스트를 위해 당사 영업팀에 문의하십시오.

 0.61mg/ml (1.40mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 12.2 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
* <1 mg/ml은 약간 용해되거나 불용해됨을 의미합니다.
* Selleck은 모든 화합물의 용해도를 자체적으로 테스트하며, 실제 용해도는 게시된 값과 약간 다를 수 있습니다. 이는 정상적인 현상이며, 약간의 배치 간 변동으로 인해 발생합니다.
* 실온 배송 (안정성 테스트 결과 이 제품은 냉각 조치 없이 배송될 수 있음을 보여줍니다.)

원액 준비

생물학적 활성

설명 Lexibulin (CYT997, SRI-32007)은 암세포주에서 10-100 nM의 IC50을 갖는 강력한 microtubule 중합 억제제입니다. 이 화합물은 2상 연구 중입니다.
표적
Microtubules (cancer cell lines)
10 nM-100 nM
시험관 내(In vitro) A549 세포에 Lexibulin (CYT997) (1 μM)을 24시간 처리하면 기존 미세소관 네트워크의 파괴와 일부 세포의 세포질 내 플라크에서 튜불린 축적을 포함한 미세소관의 빠른 재구성을 유도하여 접착력 손실 및 세포 둥글림을 포함한 상당한 세포 형태 변화를 초래합니다. 이는 HepG2의 경우 9 nM에서 KHOS/NP의 경우 101 nM까지의 IC50 범위를 갖는 16가지 암세포에 대해 강력한 세포독성 활성을 나타냅니다. 특히, 이 화합물은 다제내성 메커니즘 Pgp (MDR+)를 가진 것으로 알려진 HCT15 세포에 대해 52 nM의 IC50으로 강력한 활성을 보입니다. 미세소관 중합 억제를 통해 세포 주기를 G2-M 경계에서 차단하고 인산화된 Bcl-2의 증가와 사이클린 B1의 발현 증가, 카스파제-3 활성화 및 폴리(ADP-리보스) 폴리머라제 생성을 유도합니다. 이 화합물 처리는 1시간 노출 시 약 80 nM의 IC50으로 HUVEC 단층의 투과성을 빠르고 가역적으로 증가시킵니다. 세포 튜불린의 파괴와 일치하게, 이는 인간 골수종 세포주(HMCL)와 원발성 MM 세포 모두의 증식을 강력하게 억제하고, 세포 주기 정지를 유도하며, 가장 중요하게는 세포 사멸을 유도합니다.
생체 내(In Vivo) 랫트에 Lexibulin (CYT997)을 경구 투여(2.5시간)했을 때의 반감기는 정맥 투여(1.5시간)했을 때보다 약간 길며, 절대 경구 생체이용률은 50%에서 70%입니다. 이 화합물의 경구 투여는 마우스 PC3 이종이식편의 종양 성장을 파클리탁셀보다 더 강력하게 용량 의존적으로 억제합니다. 또한 파클리탁셀 치료에 다소 불응성인 마우스 유방암 4T1 세포를 이용한 동소성 동계 모델에서도 효과적입니다. CYT997 단일 용량(7.5 mg/kg, i.p.)은 6시간 후 간 전이에서 종양 혈류를 100 mg/kg으로 투여한 양성 대조군 CA4P와 유사한 정도로 유의하게 감소시킵니다. 이 화합물(15 mg/kg/일)로 치료하면 공격적인 전신성 골수종의 마우스 모델에서 생존율이 유의하게 연장됩니다.

프로토콜 (참조)

키나아제 분석:[1]
  • 튜불린 중합을 위한 탁도 측정 분석

    Lexibulin (CYT997)이 microtubule 중합에 미치는 영향은 소 신경 튜불린을 이용한 일반적인 탁도 측정 분석법을 사용하여 결정되며, 여기서 microtubule 조립은 340 nm에서의 흡광도 증가를 통해 모니터링됩니다. 이 화합물의 농도를 증가시키면서 튜불린/GTP/글리세롤 100 μL에 첨가합니다. microtubule 조립의 탁도 측정 분석은 소 microtubule 단백질을 37 °C에서 항온 제어 분광광도계의 큐벳에 배양하여 PEM 버퍼 [80 nM PIPES (pH 6.9), 2 mM MgCl2, 0.5 mM EGTA, 및 5% 글리세롤]에서 시간 경과에 따른 340 nm 흡광도 변화를 측정하여 수행됩니다.
세포 분석:[1]
  • 세포주

    DU145, A549, Ramos, KHOS/NP, A375, HCT-15, HT1376, BT-20, A431, PA-1, U937, HepG2, TF-1, Baf3/TelJAK2, PC3, and K562

  • 농도

    Dissolved in DMSO, final concentrations ~1 μM

  • 배양 시간

    ~72 hours

  • 방법

    Cells are exposed to various concentrations of Lexibulin (CYT997) for ~72 hours. Cell proliferation is assessed with either the Alamar blue or MTT assays. For MTT assays, 5 mg/mL of MTT is added to all wells, plates are incubated for 6 hours at 37 °C, and then lysis buffer is added (10% SDS in 0.01 N HCl) and absorbance is measured at 620 nm in a BMG Technologies Lumistar or Polarstar plate reader. For Alamar blue assays, Alamar blue (10 μL/well) is added to each well and the plates are incubated at 37 °C for 4 hours. The fluorescence is then measured using a fluorescence plate reader with an excitation filter at 544 nm and an emission filter at 590 nm. For cell cycle analysis, cells are fixed and permeabilized with 70% ethanol in PBS and incubated at 4 °C overnight. RNase-treated samples (10 μg RNase/mL for 20 minutes at 37 °C) are stained with propidium iodide (5 μg/mL) at 4 °C for a minimum of 10 minutes. Cell cycle variables are determined by fluorescence-activated cell sorting (FACS) analysis using a Beckman-Coulter Quanta SC MPL system and analyzed using CXP Software. For apoptosis analysis, cells are detached and collected. Annexin staining is done using the Vybrant Apoptosis Assay Kit. Cells are stored on ice and analyzed on a Beckman Coulter Quanta MPL within 1 hour of preparation. Annexin V–positive cells are determined using two-channel analysis.
동물 연구:[1]
  • 동물 모델

    Male nude mice inoculated s.c. with PC3 cells, and female BALB/c mice inoculated with 4T1 cells

  • 용량

    ~30 mg/kg/day

  • 투여

    Oral gavage thrice a day

참조

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19887548/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19907921/

고객 제품 검증

<p>CYT997 inhibits cellular proliferation in acute myeloid leukemia (AML) cell lines. Cell viability was measured by a 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay in 96-well plates in the presence of increasing concentrations of CYT997 for 24 h.The results represent the mean ?SD of four replicates.</p>

데이터 출처 [ Exp Ther Med , 2013 , 6(2), 299-304 ]

<p>CYT997 induces apoptosis in acute myeloid leukemia (AML) cell lines. HL-60 cells were treated with CYT997 (0, 50, 100, and 200 nM) for 24 h, resuspended in propidium iodide (PI)-containing hypotonic buffer, and then the percentage of apoptotic cells was analyzed by flow cytometry.</p>

데이터 출처 [ Exp Ther Med , 2013 , 6(2), 299-304 ]

<p>Activation of caspases by CYT997. (A) Immunoblotting analysis for caspase-9, -8 and -3 and poly ADP-ribose polymerase (PARP), was performed in lysates of HL-60 cells treated with CYT997 (0, 50, 100 or 200 nM) for 24 h. (B) Annexin V-propidium iodide (PI) staining was performed to quantify phospha- tidylserine externalization in HL-60 cells treated with CYT997 (200 nM) or untreated for 24 h, in the presence or absence of the caspase-8 inhibitor. * P<0.05.</p>

데이터 출처 [ Exp Ther Med , 2013 , 6(2), 299-304 ]

<p>Effects of CYT997 on the cell cycle. HL-60 cells were treated with CT997 (0, 50, 100 or 200 nM) for 24 h. The cell cycle was analyzed using propidium iodide (PI) staining followed by flow cytometry analysis.</p>

데이터 출처 [ Exp Ther Med , 2013 , 6(2), 299-304 ]

Sellecks Lexibulin (CYT997) 인용됨 8 출판물

A modular master regulator landscape controls cancer transcriptional identity [ Cell, 2021, 184(2):334-351.e20] PubMed: 33434495
HBV Core Promoter Inhibition by Tubulin Polymerization Inhibitor (SRI-32007) [ Adv Virol, 2020, 2020:8844061] PubMed: 33110426
CYT997(Lexibulin) induces apoptosis and autophagy through the activation of mutually reinforced ER stress and ROS in osteosarcoma [ J Exp Clin Cancer Res, 2019, 38(1):44] PubMed: 30704503
Intracellular reduction in ATP levels contributes to CYT997-induced suppression of metastasis of head and neck squamous carcinoma. [ J Cell Mol Med, 2019, 23(2):1174-1182] PubMed: 30450674
Survival of midbrain dopamine neurons depends on the Bcl2 factor Mcl1 [ Cell Death Discov, 2018, 4:107] PubMed: 30479840
Augmentation of the anticancer activity of CYT997 in human prostate cancer by inhibiting Src activity. [ J Hematol Oncol, 2017, 10(1):118] PubMed: 28606127
Structures of a diverse set of colchicine binding site inhibitors in complex with tubulin provide a rationale for drug discovery. [ FEBS J, 2016, 283(1):102-11] PubMed: 26462166
The microtubule depolymerizing agent CYT997 effectively kills acute myeloid leukemia cells via activation of caspases and inhibition of PI3K/Akt/mTOR pathway proteins. [XIAOHUI CHEN, et al. Exp Ther Med, 2013, 6(2):299-304] PubMed: 24137178

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