Chelerythrine Chloride (NSC 646662)

Chelerythrine Chloride (NSC 646662)는 PKC의 촉매 도메인과 상호작용하며, 인산 수용체(히스톤 IIIS)에 대한 경쟁적 억제제로 Ki 값은 0.7 μM이고 ATP에 대한 비경쟁적 억제제입니다. L-1210 세포에 대해 0.53 μM의 IC50으로 강력한 세포독성 효과를 보입니다. 이 화합물은 PKA, TPK 및 Ca/CM-PK의 어떠한 활성도 변경하지 않으며, PKC 활성에 대한 억제 효과는 GS, MLC, MBP 및 피브리노겐을 포함한 다양한 기질 중에서 변하지 않습니다. [1] 이는 SQ-20B 세포의 조세포 추출물에서 PKC 활성을 용량 의존적으로 억제합니다. Chelerythrine은 MTT 분석에 의해 SCC35, JSQ3, SQ20B 및 SCC61 세포에서 용량 의존적으로 세포 생존력을 감소시킵니다. [2] 5 μM에서 HUVEC에서 VEGF 유도 ICAM-1, VCAM-1 및 E-셀렉틴 발현을 억제합니다. 또한 같은 농도에서 HUVEC에서 VEGF 유도 NF-κB 활성을 억제하며, HUVEC에서 기저 및 VEGF 유도 백혈구 부착성을 모두 억제합니다. [3] 6 mM-30 mM 농도에서 심장근세포에서 빠르게 핵응축, 수축 및 이후 세포 사멸을 유도합니다. Chelerythrine(30 μM) 유도 근세포 사멸은 신생 쥐 심실 근세포의 1차 배양에서 핵 파편화 및 caspase-3 및 -9 활성화와 함께 발생합니다. 10 μM에서 미토콘드리아에서 시토크롬 c 방출을 유발하며, 이는 ROS가 심장근세포에서 첼레리트린 유도 시토크롬 c 방출을 매개함을 시사합니다. [4] 이는 재조합 GST-BcLXL 융합 단백질로부터 형광 표지된 BH3 도메인 펩타이드를 IC50 1.5 μM으로 대체합니다. 2.5 μM 및 5 μM에서 16시간 동안 인간 신경모세포종 SH-SY5Y 세포에서 JC-1 녹색 형광 증가로 나타나는 미토콘드리아 전위의 실질적인 감소를 유도합니다. 5 μM에서 SH-SY5Y 세포에서 아폽토시스를 나타내는 sub-G1 DNA의 출현을 유도합니다. 10 μM에서 SH-SY5Y 세포에서 미토콘드리아 전위 변화, 미토콘드리아에서 CytC 방출을 유도합니다. [5]

Chelerythrine Chloride (NSC 646662) (5 mg/kg i.p.)는 SQ-20B 이종이식편을 가진 쥐에서 종양 성장 지연을 유발합니다. [2] 이 화합물 (5 mg/kg) 치료는 성체 쥐의 심근에서 TUNEL 양성 핵과 절단된 형태의 caspase-3 및 -9를 유의하게 증가시킵니다. [4]

• 단백질 키나아제 C 분석

  정제된 단백질 키나아제 C는 쥐 뇌에서 준비됩니다. 간단히 말해, 배양 혼합물 (200 μL)은 20 mM Tris/HCl 완충액 (pH 7.5), 10 mM MgCl₂, 200 μg/mL 히스톤, 0.3% Triton X100에 700 μM 포스파티딜세린과 180 μM 1,2-디올레인으로 만들어진 미셀, 0.2 mM CaCl₂, 100 μM ATP, [γ-³²P ]-ATP (10⁵ dpm), 테스트할 Chelerythrine Chloride (NSC 646662) (디메틸설폭사이드에 용해됨) 및 효소 (0.5 μg 단백질)를 포함합니다. 30℃에서 3분간 배양한 후, 3 mL의 20% 트라이클로로아세트산 첨가로 반응을 중단합니다. 산성 침전물은 Whatman GFE 필터에 수집하고 얼음처럼 차가운 20% 트라이클로로아세트산으로 광범위하게 세척합니다. 필터의 방사능은 액체 섬광 계수기를 사용하여 측정됩니다. 단백질 키나아제 C 활성은 미셀과 CaCl₂가 없는 상태에서 분석하여 비특이적 활성에 대해 보정됩니다.

• 세포주

  L-1210 cells

• 농도

  ~10 μM

• 배양 시간

  2 days

• 방법

  The lymphocytic mouse leukemia L1210 cells are plated sparsely at 1×10⁴ cells per well in 24-well cluster plates in RPMI 1640 medium containing 10% foetal calf serum, 4 mM glutamine, 100 U/mL penicillin, 100 pg/mL streptomycin sulphate and Chelerythrine Chloride (NSC 646662) to be tested (solubilized in dimethylsulphoxyde ). After a 2 day incubation period at 37 ℃ in a humidified atmosphere (5% CO₂ in air), growth is monitored by counting cell numbers in a coulter-counter. IC50 values are calculated on the basis of the linear regression lines established for this compound.

• 동물 모델

  mice bearing SQ-20B xenografts

• 용량

  5 mg/kg

• 투여

  Intraperitoneal injection