Cyclopamine (11-Deoxojervine)

카탈로그 번호S1146 배치:S114610

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기술 자료

화학식

C27H41NO2
분자량 411.62 CAS 번호 4449-51-8
용해도 (25°C)* 시험관 내(In vitro) Ethanol 2 mg/mL (4.85 mM)
DMSO Insoluble
Water Insoluble
* <1 mg/ml은 약간 용해되거나 불용해됨을 의미합니다.
* Selleck은 모든 화합물의 용해도를 자체적으로 테스트하며, 실제 용해도는 게시된 값과 약간 다를 수 있습니다. 이는 정상적인 현상이며, 약간의 배치 간 변동으로 인해 발생합니다.
* 실온 배송 (안정성 테스트 결과 이 제품은 냉각 조치 없이 배송될 수 있음을 보여줍니다.)

원액 준비

생물학적 활성

설명 Cyclopamine (11-deoxojervine)은 TM3Hh12 세포에서 IC50 46 nM을 나타내는 Smoothened (Smo)의 특이적 Hedgehog (Hh) 신호 경로 길항제입니다.
표적
Smoothened
(TM3Hh12 cells)
46 nM
시험관 내(In vitro) Cyclopamine은 IC50 46 nM로 Hedgehog 신호 경로를 억제하고, [3H]Hh-Ag 결합 분석에서 CHO-K1 세포에 발현된 인간 Smo 수용체의 활성을 IC50 280 nM로 차단합니다. 이 화합물은 Patched (PTCH) mRNA를 발현하는 장 유래 종양 세포주에서 Hedgehog 경로 활성을 용량 의존적으로 유의하게 억제하고, 3 μM 농도에서 이들 종양 세포주의 성장 억제를 75-95% 유도하지만, PTCH mRNA 발현이 없는 대장 종양 세포에는 효과가 없어, 이 화학적 치료의 효과가 일반적인 세포 독성보다는 Hedgehog 경로와 관련이 있음을 시사합니다. Smo와의 직접적인 상호작용을 통해 Hedgehog 신호 전달을 차단함으로써, (10 μM) SMOhigh Cyclopamine 반응성 세포주인 L3.6sl 및 Panc 05.04의 증식을 75-80% 억제하고, BxPC3-SMOlow 세포주에는 영향을 미치지 않으면서 세포자멸사를 2.5-3.5배 증가시킵니다. 이 치료는 E3LZ10.7 세포주에서 Snail mRNA를 유의하게 감소시키고 E-cadherin 전사체를 증가시킵니다. 세포 성장 억제와는 독립적으로, Hedgehog 의존성 L3.6pl 세포의 침습성 표현형을 유의하게 억제하여 이동하는 세포 수를 500배 이상 감소시키지만, Hedgehog 비의존성 세포주인 Panc-1에는 영향을 미치지 않습니다.
생체 내(In Vivo) Cyclopamine을 50 mg/kg/일 용량으로 22일 동안 투여하면 생쥐의 HUCCT1 이종이식이 명백한 부작용 없이 제거됩니다. 이 화합물 치료는 1.2 mg 용량으로 7일 동안 Panc 05.04- 및 L3.6sl-유래 종양에서 각각 종양 세포의 유의한 세포자멸사를 유도하고 종양 질량을 50-60% 감소시키지만, BxPC3-SMOlow 종양에서는 그렇지 않습니다. [3] 이 화학 물질 단독 투여는 E3LZ10.7 및 L3.6pl 이종이식편에서 종양 전이를 심오하게 억제하며, 젬시타빈과 병용 시 전이를 완전히 없앱니다.

프로토콜 (참조)

키나아제 분석:[1]
  • Hedgehog 세포 분석

    이 분석은 Hh 신호 경로의 최종 단계, 즉 루시페라제를 판독값(Gli-Luc 분석)으로 사용하여 Gli의 전사 조절을 측정합니다. Cyclopamine은 DMSO에 연속 희석하여 분석용으로 준비한 다음 빈 분석 플레이트에 첨가합니다. TM3Hh12 세포(Hh 반응성 리포터 유전자 구성물 pTA-8xGli-Luc를 포함하는 TM3 세포)는 5% FBS 및 15mM Hepes pH 7.3을 포함하는 F12 Ham's/DMEM(1:1)에 재현탁된 후 분석 플레이트에 첨가되어 37°C, 5% CO2에서 약 30분 동안 이 화합물과 함께 배양됩니다. 1nM Hh-Ag 1.5가 분석 플레이트에 첨가된 후 37°C, 5% CO2에서 배양됩니다. 48시간 후, Bright-Glo 또는 MTS 시약이 분석 플레이트에 첨가되고 492nm에서의 발광 또는 흡광도가 결정됩니다. 로지스틱 곡선의 변곡점으로 정의되는 IC50 값은 R 통계 소프트웨어 패키지를 사용하여 Gli-구동 루시페라제 발광 또는 MTS 분석의 흡광도 신호 대 log10(화학 물질 농도)의 비선형 회귀를 통해 결정됩니다.
세포 분석:[2]
  • 세포주

    SEG1, OE33, KYAE, KYSE180, SNU1, AGS, SNU16, NCI-N-87, HUCCT1, PANC1, PL5, PL6, BXPC3, HS766T, KYSE150, GBD1, DLD1, and HCT116

  • 농도

    Dissolved in DMSO, final concentration 3 μM

  • 배양 시간

    4 days

  • 방법

    Cells are exposed to Cyclopamine in 96-well plates. Cell viability is measured by MTS (soluble tetrazolium salt) assay. Viable cell mass is determined by optical density measurements at 490 nm (OD490) at 2 and 4 days using the CellTiter96 colorimetric assay. Relative growth is calculated as OD (day 4)﹣OD (day 2)/OD (day 2).
동물 연구:[2]
  • 동물 모델

    Athymic (nude) mice inoculated subcutaneously with HUCCT1 cells

  • 용량

    50 mg/kg/day

  • 투여

    Subcutaneous injection

참조

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19091559/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14520411/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14520413/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17332349/

고객 제품 검증

<p>(A)[3H]thymidine incorporation assay of B16F10 melanoma cells treated with DMSO or cyclopamine after incubation with SA-CM from WT and Cav1KO dermal fibroblasts. Representative phase-contrast images of B16F10 cells treated with SA-CM from WT and Cav1KO fibroblasts with cyclopamine are shown on the right. Similar experiments (B) were done with A-375 cells incubated with SA-CM from hTBJ1-shCtrl and hTBJ1-shCAV1 cells.</p>

데이터 출처 [ Cancer Res , 2012 , 72, 2262-74 ]

<p>(A) The effects of cyclopamine (10 μM) in pancreatic cancer cell invasion. The number of migrated cells was quantified by counting the number of cells from 10 random fields at 200 magnification. (B) The effects of cyclopamine on the expression of EMT-related molecules E-cadherin and vimentin, and Hh pathway-related proteins SMO and Gli-1 were analyzed by Western blotting following treatment of MiaPaCa-2 and Panc-1 with SDF-1 for 48 h in the presence or absence of the SMO inhibitor cyclopamine. Normal culture was used as a negative control. (C) The EMT-related molecules Ecadherin and vimentin mRNA levels, and Hh pathway-related genes at mRNA level were analyzed by real-time RT-PCR following treatment of MiaPaCa-2 and Panc-1 with SDF-1 for 48 h in the presence or absence of the SMO inhibitor Cyclopamine. Normal culture was used as a negative control.</p>

데이터 출처 [ Cancer Lett , 2012 , 322, 169-176 ]

<p>(A) Exogenous Shh peptide (500 ng/mL) for 72 hours promoted expansion of CD34+ cells and CD34- cells, cyclopamine (10 μM) for 72 hours induced apoptosis of CD34+ cells and CD34- cells, as measured by 3-(3,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazoliumbromide (MTT) assay, n =4, bars, standard deviation. *Statistically significant compared with CD34+ cells. (B) Exogenous Shh peptide (500 ng/mL) promoted cell expansion after 48 hours and cyclopamine (10 μM) induced cell apoptosis within 24 hours measured by MTT assay (n=6).</p>

데이터 출처 [ Exp Hematol , 2012 , 40, 418-27 ]

<p>For MTT assays, cells (2,000 ~ 5,000 cells/well) were subcultured into 96-well plates according to their growth properties. Cell proliferation was assayed at 72 hr after treatment of Cyclopamine by adding 20 μl of 5 mg/ml 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) solution per 100 μl of growth medium. After incubating for 3-4 h at 37°C, the media were removed and 150 µl/well of MTT solvent (either absolute DMSO or isopropanol containing 4 mM HCl and 0.1% Nonidet-40) was added to dissolve the formazan. The absorbance of each well was measured by ELx808 (BioTek, Winooski, VT) or Wallac Victor2 (Perkin-Elmer Life Sciences, Boston, MA) Microplate Reader. Viable cells are presented as percent of control, vehicle-treated cells.</p><div><div> </div></div><p> </p>

, , Dr. Yong-Weon Yi from Georgetown University Medical Center

Sellecks Cyclopamine (11-Deoxojervine) 인용됨 148 출판물

The O-glycosyltransferase C1GALT1 promotes EWSR1::FLI1 expression and is a therapeutic target for Ewing sarcoma [ Nat Commun, 2025, 16(1):1267] PubMed: 39894896
PlexinD1 is a driver and a therapeutic target in advanced prostate cancer [ EMBO Mol Med, 2025, 17(2):336-364] PubMed: 39748059
PPARG contributes to urothelial integrity in the murine ureter by activating the expression of Shh and superficial cell-specific genes [ Development, 2025, 152(8)dev204324] PubMed: 40167323
Interplay of SHH, WNT and BMP4 signaling regulates the development of the lamina propria in the murine ureter [ Development, 2025, 152(3)DEV204214] PubMed: 39817691
Hedgehog inhibitors exert anti-proliferation effects and synergistically interact with trastuzumab in HER2-positive gastric cancer models [ Acta Oncol, 2025, 64:715-728] PubMed: 40426308
Inhibition of PI3K and Hedgehog Signaling Pathway Inhibits Hypoxia-Induced Vasculogenic Mimicry Formation in Ovarian Cancer Stem Cells [ Balk Med J, 2025, 42(5):440-451] PubMed: 40888349
SHH Pathway Inhibition and Astrocyte Co-culture Induce Distinct Responses in Glioblastoma and Cancer Stem Cells [ Res Sq, 2025, rs.3.rs-7214243] PubMed: 40894044
Proximity based proteomics reveals Git1 as a regulator of Smoothened signaling [ bioRxiv, 2025, 2025.01.06.631593] PubMed: 39829937
Foxo3-mediated physiological cell competition ensures robust tissue patterning throughout vertebrate development [ Nat Commun, 2024, 15(1):10662] PubMed: 39690179
Phosphorylation of human glioma-associated oncogene 1 on Ser937 regulates Sonic Hedgehog signaling in medulloblastoma [ Nat Commun, 2024, 15(1):987] PubMed: 38307877

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