GSK461364

GSK461364는 여러 기원의 암 세포주 증식을 억제하며, 비분열성 인간 세포에서는 최소한의 독성을 나타냅니다. [1] WT p53의 RNA 침묵은 이 화합물의 항증식 활성을 증가시킵니다. 많은 암 치료법이 p53 WT 환자에게 더 효과적인 경향이 있으므로, p53 결핍 종양이 이 화학물질에 대해 더 높은 민감성을 보이는 것은 다른 화학 요법에 불응성인 종양뿐만 아니라 이러한 유전자형에 대한 초기 치료법을 제공할 기회를 잠재적으로 제공할 수 있습니다. 이 화합물은 티오펜 아미드로, 시험관 내에서 정제된 Plk1 효소를 K_i 2 nM로 억제하며 Plk2 및 Plk3에 비해 Plk1에 대해 100배 이상의 선택성을 가집니다. 이는 강력한 세포 증식 억제제로, 대부분의 테스트된 세포주에서 100 nM 미만의 50% 성장 억제(GI50)를 유발하며, 인간 비증식 세포에 대한 독성은 제한적입니다. Cell Cycle 진행 억제는 농도 의존적이며, 이 물질의 고농도에서는 G2기에서 초기 지연이 발생하고, 저농도에서는 M기에서 정지가 발생합니다. 현재, 이 물질은 인체 최초 투여 용량 증량 시험 단계에 있습니다. TP53 유전자 변이가 있는 세포주는 이 화합물에 더 민감한 경향을 보였으며, RNA 침묵을 통한 p53 반응 억제는 일부 p53 야생형(WT) 세포에서 민감도를 증가시킵니다. 또한, 이러한 더 민감한 세포주는 TP53 변이와 관련된 특성인 염색체 불안정성 수준도 증가했습니다. [2] 전임상 시험에서 이 화학물질은 여러 (>120개) 종양 세포주에 대해 항증식 활성을 보였으며, 이들 세포주의 83% 및 91% 이상에서 IC50 값이 각각 50 nM 및 100 nM 미만으로 강력하게 증식을 억제합니다. [3]

GSK461364에 의한 세포 배양 성장 억제는 세포 정지적이거나 세포 독성일 수 있지만, 적절한 용량 스케줄링 하에 이종이식 종양 모델에서 종양 퇴행을 유도합니다. 이 화합물은 인간 종양 이종이식 모델에서 명확한 항종양 활성을 보여줍니다. [1] 마우스 이종이식에서 용량 의존적인 유사분열 정지를 보여주며, 이는 종양 성장에 대한 효과와 상관 관계가 있습니다. [2] 이 화학물질의 복강 내 투여는 Colo205 이종이식을 포함한 다양한 이종이식 모델에서 종양 퇴행 또는 종양 성장 지연을 유발합니다. 이 물질을 사용하여 생체 내에서 Plk1을 억제하면 단극성 또는 붕괴된 유사분열 방추를 포함하는 비정상적인 유사분열 형태를 동반한 유사분열 정지가 발생합니다. [3]

• 효소 분석

  키나아제 반응은 Z-Lyte Assay 키트(Ser/Thr 펩타이드 16)를 사용하여 최종 분석 부피 10 μL로 수행됩니다. 간략하게, 반응물은 50 mM HEPES (pH 7.5), 10 mM MgCl₂, 1 mM EGTA, 1 mM DTT, 0.01% Brij 35, 0.01 mg/mL 카제인, 200 μM ATP, 200 μM Polo Box 펩타이드 (NH₂-MAGPMQS[pT]PLNGAKK-OH), 그리고 6 nM 재조합 Plk1 (H6-tev-PLK 1-603)을 포함합니다. Plk1은 0 내지 1 μM GSK461364와 함께 60분 동안 전배양됩니다. 그 다음, 2 μM 펩타이드 첨가에 의해 반응이 시작됩니다. 23 °C에서 15분 후, 반응은 정지되고 Z'-Lyte 프로토콜에 따라 처리되며 EnVision 플레이트 리더로 판독됩니다. 원시 형광 값은 기질 및 생성물 표준을 사용하여 형성된 생성물의 농도로 변환됩니다. 이 화합물의 억제 효능이 ATP 농도의 함수로 ATP 경쟁적 억제 모드와 일치하는 방식으로 변화하는 것이 관찰되므로, 이 화학물질의 K_i에 대한 상한선이 결정됩니다.

• 세포주

  Prostate(LNCap,PC3), Cervix(HeLa), Pancreas(ASPC1), Sarcoma(Saos-2)Ovary(OVCAR8), Stomach(NCI-N87), Melanoma(SKMEL3,A431, MALME3M), Colon(Colo205,SW620,HCT116), Breast(SKBR3,MDA-MB-453,MCF7), Lung(NCI-H82,MV522,NCI-H522), etc.

• 농도

  10 nM

• 배양 시간

  72 hours

• 방법

  Cancer cell lines are seeded into 384-well microtiter plates. After seeding, the cells are incubated at 37 °C in 5% CO₂ for 24 hours. GSK461364 is added to each cell line at 10 nM with a nontreated control. A zero-time (T = 0) value is read for each cell line. After 72 hours, the medium containing this compound or DMSO control is aspirated from all of the remaining cells and the cell nuclei are stained with 4′,6-diamidino-2-phenylindole and the fluorescent intensity measured using an InCell1000 High Content Analyzer. The percent intensity of the 4′,6-diamidino-2-phenylindole stain at 72 hours, relative to intensity at time zero, is calculated for each concentration of this chemical in each of the triplicate wells.

• 동물 모델

  Nude mice bearing Colo205 (colorectal) xenograft tumors

• 용량

  25, 50, and 100 mg/kg

• 투여

  Administered via i.p.(every 2 days or every 4 days)