GSK690693

GSK690693은 다른 계열의 대부분의 키나아제에 비해 Akt 동형에 대해 매우 선택적입니다. 그러나 이 화합물은 PKA, PrkX 및 PKC 동형효소를 포함한 AGC 키나아제 계열의 구성원에 대해 선택성이 낮으며, 각각 24 nM, 5 nM 및 2-21 nM의 IC50을 가집니다. 또한 CAMK 계열의 AMPK 및 DAPK3를 각각 50 nM 및 81 nM의 IC50으로 강력하게 억제하며, STE 계열의 PAK4, 5 및 6을 각각 10 nM, 52 nM 및 6 nM의 IC50으로 강력하게 억제합니다. 이 화학물질은 43 nM에서 150 nM 범위의 IC50으로 종양 세포에서 GSK3β의 인산화를 억제합니다. 이 치료는 전사 인자 FOXO3A의 핵 축적을 용량 의존적으로 증가시킵니다. 이 화합물은 T47D, ZR-75-1, BT474, HCC1954, MDA-MB-453 및 LNCaP 세포의 증식을 각각 72 nM, 79 nM, 86 nM, 119 nM, 975 nM 및 147 nM의 IC50으로 강력하게 억제합니다. 이 치료는 LNCaP 및 BT474 세포 모두에서 >100 nM 농도에서 세포자멸사를 유도합니다. [1] 세포 생존에서 AKT의 역할과 일치하게, 이는 민감한 ALL 세포주에서 세포자멸사를 유도합니다. [2]

단일 GSK690693 투여는 인간 유방암 (BT474) 이종이식편에서 용량 및 시간 의존적으로 GSK3β 인산화를 억제합니다. 유사하게, 이 화합물은 Akt 기질인 PRAS40 및 FKHR/FKHRL1의 인산화를 감소시킵니다. 또한 혈당이 급격히 증가하여 약물 투여 후 8~10시간 후에 기저선으로 돌아옵니다. 이 화학물질의 투여는 생체 내에서 인산화된 Akt 기질의 감소를 유도하고, 인간 SKOV-3 난소암, LNCaP 전립선암, BT474 및 HCC-1954 유방암 이종이식편의 성장을 강력하게 억제하며, 30 mg/kg/일 용량에서 최대 58%에서 75%의 억제 효과를 보입니다. [1] 이 화합물은 관련된 Akt 활성화 메커니즘에 관계없이 효능을 나타냅니다. 막 결합된 구성적 활성 형태의 Akt를 발현하는 Lck-MyrAkt2 마우스에서 종양 진행을 지연시키는 데 가장 효과적입니다. [3]

• 시험관 내 키나아제 분석

  His 태그된 전체 길이 Akt1, 2 또는 3은 바큘로바이러스에서 발현 및 정제됩니다. 활성화는 Thr308을 인산화하기 위해 정제된 PDK1과 Ser473을 인산화하기 위해 정제된 MK2로 수행됩니다. Akt의 시간 의존적 억제를 보다 정확하게 측정하기 위해, 활성화된 Akt 효소는 GSK690693과 다양한 농도로 실온에서 30분 동안 배양한 후 기질 첨가로 반응을 시작합니다. 최종 반응액은 5 nM에서 15 nM Akt1, 2 및 3 효소; 2 μM ATP; 0.15 μCi/μL[γ-³³P]ATP; 1 μM 펩타이드 (Biotin-aminohexanoicacid-ARKR-ERAYSFGHHA-amide); 10 mM MgCl₂; 25 mM MOPS (pH 7.5); 1 mM DTT; 1 mM CHAPS; 및 50 mM KCl을 포함합니다. 반응은 실온에서 45분 동안 배양한 후, EDTA를 함유한 PBS에 Leadseeker 비드로 종료합니다 (최종 농도, 2 mg/mL 비드 및 75 mM EDTA). 플레이트를 밀봉한 다음, 비드를 최소 5시간 동안 침전시킨 후, Viewlux Imager를 사용하여 생성물 형성을 정량화합니다.

• 세포주

  T47D, ZR-75-1, BT474, HCC1954, MDA-MB-453, LNCaP, etc.

• 농도

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~30 μM

• 배양 시간

  72 hours

• 방법

  Cells are plated at densities that allow untreated cells to grow logarithmically during the course of a 3-day assay. Briefly, cells are plated in 96- or 384-well plates and incubated overnight. Cells are then treated with this compound (ranging from 30 μM-1.5 nM) and incubated for 72 hours. Cell proliferation is measured using the CellTiter Glo reagent. Data are analyzed using the XLFit curve-fitting tool for Microsoft Excel. IC50 values are obtained by fitting data to Eq, 2.

• 동물 모델

  Female CD1 Swiss Nude mice injected with LNCaP, SKOV-3, or PANC1 cells, and C.B-17 SCID mice with HCC1954, MDA-MB-453, or BT474 cells

• 용량

  ~30 mg/kg/day

• 투여

  Administered via i.p.