Ispinesib (SB-715992)

Ispinesib (SB-715992)은 KSP의 강력하고 알로스테릭하며 가역적이고 특이적인 억제제로, KSP의 미세소관 결합 특성을 변화시키고 KSP-ADP 복합체가 미세소관에서 방출되는 것을 변경하지 않으면서 ADP 방출을 억제하여 KSP의 움직임을 방해합니다. [1] 이 화합물은 Colo205, Colo201, HT-29, M5076, Madison-109 및 MX-1을 포함한 다양한 종양 세포주에서 1.2 nM에서 9.5 nM의 IC50 값으로 강력한 세포독성 활성을 보입니다. [2] PC-3 전립선암 세포에서 (15 nM 및 30 nM) 세포 증식을 차단하고 EGFR, p27, p15 및 IL-11과 같은 세포자멸사, 세포 증식, 세포 주기 및 세포 신호 전달을 조절하는 유전자의 발현 수준을 조절하여 세포자멸사를 유도합니다. [3] 53개의 유방암 세포주 패널에서 Ispinesib (7.4 nM–600 nM)은 광범위한 억제 활성을 나타냅니다. BT-474 및 MDA-MB-468 세포에서 (150 nM) 세포자멸사를 유도하며, 이는 세포자멸사 세포의 높은 비율, 낮은 항세포자멸사 Bcl-X_L 수준, 그리고 높은 세포자멸사 유발 Bax 및 Bid 수준으로 나타납니다. [4]

Ispinesib (SB-715992) (4.5 mg/kg–15 mg/kg)은 마우스 이종이식 모델에서 Colo205, Colo201, HT-29에 대해 억제 효과를 보였으나, MX-1 세포에는 효과가 없었습니다. 이 화합물 (6 mg/kg–10 mg/kg)은 또한 Madison 109 폐암, M5076 육종, L1210 및 P388 백혈병을 포함한 마우스 고형암을 억제합니다. [2] MCF-7, HCC1954, MDA-MB-468 및 KPL4 유방암 세포의 마우스 이종이식 모델에서 (8 mg/kg–10 mg/kg) 종양 성장을 억제합니다. [4]

• 인간 KSP ATPase 활성 및 Ispinesib에 의한 억제의 정상 상태 운동 분석

  Kinesin 특이성 분석은 ADP 생성과 NADH 산화를 연결하는 피루브산 키나제-젖산 탈수소효소 검출 시스템을 사용하여 수행됩니다. 흡광도 변화는 340 nm에서 모니터링됩니다. KSP의 나노몰 농도를 사용하는 정상 상태 연구는 ADP 생성을 Amplex Red의 형광 레조루핀 산화에 연결하는 피루브산 키나제, 피루브산 산화효소 및 서양 고추냉이 과산화효소(HRP) 결합 검출 시스템을 활용하는 민감한 형광 기반 분석을 사용하여 수행됩니다. 레조루핀 생성은 형광(λ_여기 = 520 nm 및 λ_방출 = 580 nm)으로 모니터링됩니다. 미세소관이 관련된 실험을 위해 PEM25 완충액 [25 mM Pipes-K⁺ (pH 6.8), 2 mM MgCl₂, 1 mM EGTA]에서 정상 상태 생화학 실험이 수행됩니다. 정상 상태 억제를 위한 IC50은 PEM25 완충액에서 500 µM ATP, 5 µM 미세소관 및 1 nM KSP에서 결정됩니다. Ispinesib (SB-715992)의 K_{i app} (겉보기 억제제 해리 상수) 값은 Morrison 방정식을 사용하여 효소 농도에 대한 명시적 보정과 함께 용량-반응 곡선에서 추출됩니다. 정상 상태 조건에서 억제제 양식(예: 경쟁적, 비경쟁적, 비경쟁적 또는 혼합)은 기질 농도의 함수로서 초기 속도에 대한 농도 효과를 측정하여 결정됩니다. 데이터는 GraFit의 방정식을 사용하여 다양한 억제 모드에 대한 속도 방정식에 맞게 조정됩니다.

• 세포주

  Breast cancer cells, including MCF-7, HCC1954, MDA-MB-468, and KPL4

• 농도

  0.085 nM–33 µM

• 배양 시간

  72 hours

• 방법

  After plating cells in log phase of growth in 96-well plates and treating them with Ispinesib (SB-715992) for 72 hours, cell growth is measured using CellTiter-Glo, and luminescence is detected using BioTek FLx800. Data are analyzed and the IC50 value, defined as the drug concentration that results in 50% growth inhibition relative to control, is calculated.

• 동물 모델

  Nude (nu/nu) mice models of MCF7, KPL4, and HCC1954 cells; severe combined immunodeficient (SCID) mice model of MDA-MB-468 cells;

• 용량

  10 mg/kg for nude mice or 8 mg/kg for SCID mice

• 투여

  Intraperitoneal injection on a q4d× schedule (3 doses, every 4 day