KW-2449

카탈로그 번호S2158 배치:S215802

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기술 자료

화학식

C20H20N4O
분자량 332.4 CAS 번호 1000669-72-6
용해도 (25°C)* 시험관 내(In vitro) DMSO 67 mg/mL (201.56 mM)
Ethanol 67 mg/mL (201.56 mM)
Water Insoluble
생체 내(In Vivo) (개별적으로 순서대로 용매를 제품에 첨가하십시오.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension
0.5% methylcellulose

Selleck 연구소에서 검증했습니다. 이 제형에 대한 조정이 필요한 경우 맞춤형 테스트를 위해 당사 영업팀에 문의하십시오.

 10.000mg/ml (30.08mM) Taking the 1 mL working solution as an example, take 10 mg of this product, add it to 1 ml of 0.5% methylcellulose clear solution, and mix evenly to form a uniform suspension. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml은 약간 용해되거나 불용해됨을 의미합니다.
* Selleck은 모든 화합물의 용해도를 자체적으로 테스트하며, 실제 용해도는 게시된 값과 약간 다를 수 있습니다. 이는 정상적인 현상이며, 약간의 배치 간 변동으로 인해 발생합니다.
* 실온 배송 (안정성 테스트 결과 이 제품은 냉각 조치 없이 배송될 수 있음을 보여줍니다.)

원액 준비

생물학적 활성

설명 KW-2449는 IC50 6.6nM의 Flt3에 주로 작용하는 다중 표적 억제제로, FGFR1, Bcr-Abl 및 Aurora A에 대해 적당한 효능을 보이며, PDGFRβ, IGF-1R, EGFR에는 거의 영향을 미치지 않습니다. 1상.
표적
FLT3 (D835Y)
(Cell-free assay)		 Abl (T315I)
(Cell-free assay)		 FLT3
(Cell-free assay)		 Abl
(Cell-free assay)		 FGFR1
(Cell-free assay)		 더 보기
1 nM 4 nM 6.6 nM 14 nM 36 nM
시험관 내(In vitro) FLT3, ABL, ABL-T315I 및 Aurora kinase의 다중 키나아제 억제제인 KW-2449는 백혈병 환자 치료를 위해 연구 중입니다. 이 화합물은 FLT3 키나아제 억제를 통해 FLT3 변이가 있는 백혈병 세포에 강력한 성장 억제 효과를 나타내며, 이는 인산화된 FLT3/STAT5의 하향 조절, G1기 정지 및 세포자멸사를 유발합니다. 이 화학 물질의 경구 투여는 FLT3 변이 이종이식 모델에서 최소한의 골수 억제와 함께 용량 의존적이고 유의미한 종양 성장 억제를 보여줍니다. FLT3 야생형 인간 백혈병에서, 이는 인산화된 히스톤 H3의 감소, G2/M기 정지 및 세포자멸사를 유도합니다. 이마티닙 저항성 백혈병에서, 이 약물은 BCR/ABL 및 Aurora kinases의 동시 하향 조절을 통해 저항성 해제에 기여합니다. 이 화합물의 억제 활성은 α1-산성 당단백질과 같은 인간 혈장 단백질의 존재에 의해 영향을 받지 않습니다. 이는 여러 작용 메커니즘을 통해 다양한 유형의 백혈병에 대한 강력한 성장 억제 활성을 가집니다. 이 억제제는 유의미한 활성을 가지며 FLT3 변이 및 이마티닙 저항성 변이를 가진 백혈병 환자에서 임상 연구를 보증합니다. FLT3 및 STAT5의 인산화 수준은 이 화학 물질에 의해 용량 의존적으로 감소합니다. 또한, IM 저항성과 관련된 ABL-T315I를 4nM의 IC50으로 강력하게 억제합니다. 반면에, 이 화합물은 1 μM 농도에서도 PDGFRβ, IGF-1R, EGFR 및 다양한 세린/트레오닌 키나아제에 거의 영향을 미치지 않습니다. 이는 FLT3/ITD 발현 백혈병 세포뿐만 아니라 FLT3/KDM 활성화 및 야생형 FLT3 과발현 백혈병 세포에 대해서도 강력한 성장 억제 활성을 가집니다. 성장 억제 효과에 따라, 이 약물은 MOLM-13 세포에서 FLT3(P-FLT3) 및 그 하류 분자인 인산화 STAT5(P-STAT5)의 인산화를 용량 의존적으로 억제합니다. 또한, 세포 주기의 G1기 세포 비율을 증가시키고 S기 세포 비율을 상호적으로 감소시켜 세포자멸사 세포 집단의 증가를 초래합니다. 이 화합물은 구성적으로 활성인 WT-FLT3 키나아제를 탈인산화할 수 있지만, 백혈병 세포가 주로 FLT3 키나아제에 의존하지 않는다면 세포 증식을 억제하지 않습니다. 이는 빠르게 흡수되어 주요 대사물 M1으로 전환됩니다. 전임상 연구에 따르면 이 화학 물질은 모노아민 산화효소-B(MAO-B)와 알데히드 산화효소에 의해 주요 대사물 M1으로 전환됩니다. 이 약물은 FLT3/ITD 억제를 통해 세포독성을 매개합니다. 이는 FLT3의 직접적인 억제제이며 하류 표적인 STAT5의 억제를 유도합니다. 이 화합물은 HDACIs와 시너지적으로 작용하여 Ph+ CML 세포에서 시간- 및 농도-의존적으로 세포자멸사를 유도합니다. 이는 CML 세포에서 보리노스타트/SNDX275의 치사율을 시너지적으로 향상시킵니다. 이 억제제 요법은 추가적인 IM 저항성 Bcr/Abl+ 백혈병 세포에 대해 활성을 가집니다. 이는 노코다졸 처리된 K562 세포에서 Aurora B 활성의 지표인 히스톤 H3의 인산화를 중간 정도로 감소시킵니다.
생체 내(In Vivo) MOLM-13 종양 이종이식 모델에서, KW-2449를 14일 동안 경구 투여한 결과 용량 의존적인 강력하고 유의미한 항종양 효과를 보였습니다.
특징 임상 시험에서 FLT3 inhibitor로 연구되었으며, 다른 약물은 초기 개발 단계에 있습니다.

프로토콜 (참조)

키나아제 분석:[2]
  • FLT3 인산화

    백혈병 세포를 인산염 완충 식염수(PBS)로 세척한 후, 용해 완충액(20mM Tris pH 7.4, 100mM NaCl, 1% Igepal, 1mM EDTA, 2mM NaVO4, 그리고 Complete protease inhibitor KW-2449)에 세포를 재현탁하여 30분 동안 흔들면서 용해시켰습니다. 추출물은 1.6 × 104 g에서 원심분리하여 정제하고, 상층액의 단백질 함량(Bio-Rad)을 측정했습니다. 50μg의 분취량을 STAT5 분석을 위한 전체 세포 용해물로 사용하고, 나머지는 anti-FLT3를 이용한 면역침전법에 사용했습니다. anti-FLT3 항체를 추출물에 첨가하여 밤새 배양한 후, Protein A sepharose를 2시간 더 첨가했습니다. 전체 세포 용해물 및 면역침전물에 대한 별도의 SDS-PAGE(sodium dodecyl sulfate–polyacrylamide electrophoresis) 젤을 병렬로 실행했습니다. Immobilon 막으로 전이 후, 인산화된 FLT3를 검출하기 위해 항인산화티로신 항체(4G10)를 이용한 면역블로팅을 수행하거나, 전체 세포 용해물 젤의 경우, 인산화된 STAT5(잔기 Y694)에 대한 랫트 단일클론 항체를 사용한 다음 스트리핑하고 anti-FLT3 항체로 다시 프로빙하여 총 FLT3를 측정했습니다. 단백질은 화학발광을 이용하여 시각화하고, Kodak BioMax XAR 필름에 노출시킨 후, 현상하고 Bio-Rad GS800 덴시토미터로 스캔했습니다. FLT3 또는 STAT5의 인산화가 기준선의 50%로 억제되는 이 화합물의 농도(IC50)는 용량 반응 곡선의 선형 회귀 분석을 이용하여 결정했습니다. 순환하는 아세포에서 FLT3 및 STAT5의 직접적인 분석을 위해, 헤파린 처리된 튜브에 말초 혈액을 채취하고 즉시 얼음 위에서 냉각했습니다. 샘플은 4 °C에서 900 g로 10분 동안 원심분리했습니다. 혈장은 제거하고 –80 °C에서 냉동 보관했습니다. 버피 코트는 조심스럽게 얼음처럼 차가운 PBS로 옮겨 차가운 Ficoll-Hypaque 위에 층을 형성하고, 4 °C에서 600 g로 5분 동안 원심분리했습니다. 모든 후속 단계는 4 °C에서 수행했습니다. 단핵 세포를 수집하고 적혈구 용해 완충액(0.155 M NH4Cl, 0.01 M KHCO3, 0.1 mM EDTA)으로 한 번 빠르게 세척한 다음, PBS로 한 번 세척했습니다. 세포는 FLT3 및 STAT5 분석에 설명된 대로 용해했습니다.
세포 분석: [1]
  • 세포주

    MOLM-13 and RS4;11 cells

  • 농도

    33nM, 75nM, 0.1μM, 0.3μM and 0.15μM

  • 배양 시간

    24, 48, and 72 hours

  • 방법

    Cell viability is determined by the sodium 3′-[1-(phenylaminocarbonyl)-3, 4-tetrazolium]-bis (4-methoxy-6-nitro) benzene sulfonic acid hydrate assay after incubation with or without KW-2449 for 72 hours at 37 °C. The number of viable cells is determined using the Cell Proliferation Kit II. For cell-cycle analysis, MOLM-13 and RS4;11 cells are treated with this compound. After 24, 48, and 72 hours of incubation at 37 °C, DNA contents are analyzed. Cell cycle distribution of K562, TCC-Y, and TCC/Ysr is analyzed 24 hours after treatment with this chemical or imatinib.
동물 연구:[3]
  • 동물 모델

    CBySmn.CB17-Prkdsscid/J (BALB/C) mice are injected with BV173/E255K/Luc cl4 cells.

  • 용량

    32 mg/kg/day, 5 days/week

  • 투여

    Orally (p.o.) administered

참조

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19541823/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19029442/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21474579/

고객 제품 검증

<p>Western blot analysis of p-histone and histone. 0-10μM KW2449 was added.</p><div><div> </div></div><p> </p>

, , Dr. Zhang of Tianjin Medical University

Sellecks KW-2449 인용됨 12 출판물

Integrative analysis of drug response and clinical outcome in acute myeloid leukemia [ Cancer Cell, 2022, S1535-6108(22)00312-9] PubMed: 35868306
A community challenge for a pancancer drug mechanism of action inference from perturbational profile data [ Cell Rep Med, 2022, 3(1):100492] PubMed: 35106508
Phosphorylation of SHP2 at Tyr62 Enables Acquired Resistance to SHP2 Allosteric Inhibitors in FLT3-ITD-Driven AML [ Cancer Res, 2022, 82(11):2141-2155] PubMed: 35311954
KW-2449 and VPA exert therapeutic effects on human neurons and cerebral organoids derived from MECP2-null hESCs [ Stem Cell Res Ther, 2022, 13(1):534] PubMed: 36575558
Evaluation of CML TKI Induced Cardiovascular Toxicity and Development of Potential Rescue Strategies in a Zebrafish Model [ Front Pharmacol, 2021, 12:740529] PubMed: 34733159
Mechanisms of Oncogenesis in the Primary Liver Cell Cancer [ DTIC, 2021, 53] PubMed: None
The Global Phosphorylation Landscape of SARS-CoV-2 Infection [ Cell, 2020, 182(3):685-712.e19] PubMed: 32645325
Synergistic Anti Leukemia Effect of a Novel Hsp90 and a Pan Cyclin Dependent Kinase Inhibitors. [ Molecules, 2020, 8;25(9) pii: E2220] PubMed: 32397330
Small-Molecule and CRISPR Screening Converge to Reveal Receptor Tyrosine Kinase Dependencies in Pediatric Rhabdoid Tumors. [ Cell Rep, 2019, 28(9):2331-2344] PubMed: 31461650
Drug Target Commons: A Community Effort to Build a Consensus Knowledge Base for Drug-Target Interactions [Tang J Cell Chem Biol, 2018, 25(2):224-229] PubMed: 29276046

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