Ralimetinib (LY2228820) dimesylate

LY2228820은 RAW 264.7 세포에서 p38α 및 phosphoMAPKAPK-2 (pMK2) 수준을 각각 7 nM 및 34.3 nM의 IC50 값으로 억제합니다. 또한, LY2228820은 마우스 복막 대식세포에서 지질다당류(LPS) 유도 TNFα 형성을 5.2 nM의 IC50로 억제합니다. [1] INA6, RPMI-8226, U266 및 RPMI-Dox40을 포함한 다발성 골수종(MM) 세포에서 LY2228820 (200 nM–800 nM)은 HSP27 (p38MAPK의 하위 표적)의 인산화를 억제하여 p38MAPK 신호 전달을 유의하게 차단하며, HSP27의 발현 수준에는 영향을 미치지 않습니다. LY2228820 (200 nM–400 nM)은 세포독성 및 세포자멸사를 강화하지만, LY2228820 단독으로는 MM.1S 세포의 성장을 억제하지 않습니다. LY2228820 (200 nM–800 nM)은 또한 장기 BM 기질 세포 (LT-BMSC), BM 단핵 세포 (BMMNC), 말초 혈액 (PB) CD138⁺, CD138⁻ 또는 PB CD14⁺ 세포에서 IL-6 및 MIP-1α의 분비를 억제합니다. LY2228820 (400 nM–800 nM)은 또한 CD14⁺ 세포로부터의 파골세포형성을 차단합니다. [2]

LPS 유도 마우스에서 LY2228820은 1 mg/kg 미만의 역치 최소 50% 유효 용량 (TMED₅₀)으로 TNFα 형성을 효과적으로 억제합니다. 콜라겐 유도 관절염 (CIA) 랫트 모델에서 LY2228820은 발 부종, 골 침식 및 연골 파괴에 강력한 효과를 나타내며, 역치 최소 50% 유효 용량 (TMED₅₀)은 1.5 mg/kg입니다. [1]

• p38α 억제

  p38α 억제는 ATP[γ-³³P] 및 EGFR 21-mer 펩타이드를 기질로 사용하는 표준 필터 결합 프로토콜에서 재조합 인간 p38α를 사용하여 결정됩니다. 마우스 복막 대식세포에서 TNFα의 기능적 억제는 LY2228820 존재 하에 LPS 자극을 사용하여 결정됩니다. 세포에서 p38α 활성을 보다 직접적으로 평가하기 위해 RAW 264.7 세포를 LY2228820으로 처리한 후 아니소마이신으로 자극합니다. p38α 활성 수준은 p38α에 의해 특이적으로 인산화되는 잔기와 반응하는 phosphoMAPKAPK-2 (pMK2) (Thr 334) 항체를 사용하여 검출됩니다.

• 세포주

  MM cells, including INA6, RPMI-8226, U266, and RPMI-Dox40

• 농도

  200 nM–800 nM

• 배양 시간

  48 hours

• 방법

  MTT assays and APO 2.7 staining are performed to assess cellular proliferation and induction of apoptosis, respectively. Viability is expressed as percent viable cells. Apoptosis in cells is evaluated by APO 2.7 staining. For detection of mitochondrial membrane protein 7A6 expressed in apoptotic cells, cells are incubated with APO 2.7 reagent for 20 min. Expression of APO 2.7 is determined using an EPICS XL flow cytometer.

• 동물 모델

  Lipopolysaccharide (LPS)-induced Balb/c mice

• 용량

  0–20 mg/kg

• 투여

  Oral bid dosing for 14 days