Zosuquidar 3HCl

LY335979는 CEM/VLB₁₀₀ 혈장막에서 Pgp의 [³H]아지도핀 광친화성 표지를 차단하여 Pgp의 평형 결합을 경쟁적으로 억제합니다. [1] LY335979 단독으로 약물 민감성 및 MDR 세포주에 대해 6 μM-16 μM 범위의 IC50을 갖는 세포독성을 나타내며 0.1 및 0.5 μM 농도에서 종양 용해제에 대한 MDR 세포주 P388/ADR, MCF7/ADR, 2780AD 또는 UCLA-P3.003VLB의 내성을 완전히 역전시키는 능력을 생성합니다. [1] LY335979는 K562/HHT40, K562/HHT90, K562/DOX 및 HL60/DNR을 포함한 P-gp 발현 백혈병 세포주에서 약물 민감도를 유의하게 회복시키고 활성 P-gp를 가진 원발성 AML 모세포에서 안트라사이클린 및 오조가마이신 (Mylotarg)의 세포독성을 향상시킵니다. [2] 최근 논문은 LY335979가 ABCB1 형질도입 세포에서 (Z)-엔독시펜의 정단향 수송을 완전히 억제한다는 것을 나타냅니다. [3]

• ATPase 분석

  P-Glycoprotein ATPase 활성은 ATP로부터 무기인산염의 유리로 측정됩니다. 분석은 37 °C에서 90분 동안 96웰 플레이트에서 측정됩니다. 막 (8 μg-10 μg 단백질)은 5 mM 아지드화나트륨, 1 mM 우아바인, 1 mM EGTA, 3 mM ATP, 5 mM 포스포에놀피루브산염과 3.6 units/mL 피루브산 키나제로 구성된 ATP 재생 시스템을 포함하는 100 μL의 완충액 A 총 부피에 1 mM 바나데이트나트륨의 존재 및 부재하에 배양됩니다. Pgp-ATPase 활성은 총 ATPase 활성 중 바나데이트 민감성 부분으로 정의됩니다. 플레이트는 검출 용액 첨가 후 3분 후에 판독됩니다. 흡광도는 마이크로플레이트 리더에 의해 690 nm에서 측정됩니다. 인산염 표준 곡선은 형성된 인산염의 μmol을 계산하는 데 사용됩니다. 샘플은 삼중으로 측정됩니다.

• 세포주

  CEM/VLB₁₀₀, P388/ADR, MCF7/ADR, 2780AD, and UCLA-P3.OO3VLB cells

• 농도

  0.05 μM to 5 μM

• 배양 시간

  72 hours

• 방법

  Cell viability is determined using a modified the MTT dye reduction method. Cells are harvested during logarithmic growth phase, and seeded in 96-well plates. The cells are then cultured for 72 hours in the presence of oncolytics with or without modulators. MCF-7 and MCF-7/ADR cells are incubated 24 hours before the addition of the drug with and without the LY335979. LY335979 is prepared as 2 mM DMSO stocks and added to wells to give final concentrations ranging from 0.05 to 5 μM. After 72 hours, 20 μL of freshly prepared MTT(5 mg/mL in Dulbecco's PBS) is added to each well and incubated for 4 hours in a 37 °C incubator containing 5% CO₂. Cells are pelleted in a Sorvall RT6000B centrifuge, 70 μL of medium is carefully removed from each well, and 100 μL of 2-propanol/0.04 N HC1 is added. Cells are resuspended 5-10 times with a Multipipettor or until no particulate matter is visible. Plates are immediately read on a Titertek Multiskan MCC/340 microplate reader Flow Laboratories with a test wavelength of 570 nm and a reference wavelength of 630 nm. Controls are measured in quadruplicate and modulators are measured in duplicate. Cytotoxicity analyses are also performed using the CeliTiter 96 AQueous assay kit.

• 동물 모델

  P388 or P388/ADR cells are implanted by i.p. injection into female BDF₁ mice.

• 용량

  ≤30 mg/kg

• 투여

  Administered via i.p. and i.v.