PLX-4720

카탈로그 번호S1152 배치:S115205

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기술 자료

화학식

C17H14ClF2N3O3S
분자량 413.83 CAS 번호 918505-84-7
용해도 (25°C)* 시험관 내(In vitro) DMSO 82 mg/mL (198.14 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
생체 내(In Vivo) (개별적으로 순서대로 용매를 제품에 첨가하십시오.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml은 약간 용해되거나 불용해됨을 의미합니다.
* Selleck은 모든 화합물의 용해도를 자체적으로 테스트하며, 실제 용해도는 게시된 값과 약간 다를 수 있습니다. 이는 정상적인 현상이며, 약간의 배치 간 변동으로 인해 발생합니다.
* 실온 배송 (안정성 테스트 결과 이 제품은 냉각 조치 없이 배송될 수 있음을 보여줍니다.)

원액 준비

생물학적 활성

설명 PLX4720은 B-RafV600E의 강력하고 선택적인 억제제로, 세포 없는 분석에서 IC50 13 nM이며, c-Raf-1(Y340D 및 Y341D 돌연변이)과 동등하게 강력하고, 야생형 B-Raf보다 B-RafV600E에 대해 10배 선택성을 갖습니다.
표적
C-Raf-1 (Y340D/Y341D)
(Cell-free assay)		 B-Raf (V600E)
(Cell-free assay)		 BRK
(Cell-free assay)		 B-Raf
(Cell-free assay)
6.7 nM 13 nM 130 nM 160 nM
시험관 내(In vitro) PLX-4720은 야생형 B-Raf에 대해 10배 이상의 선택성을 보이며, Frk, Src, Fak, FGFR, Aurora A와 같은 다른 키나아제에 대해서는 100배 이상의 선택성을 보이며 IC50은 1.3-3.4 μM입니다. 이 화합물은 B-RafV600E를 발현하는 세포주에서 ERK 인산화를 IC50 14-46 nM로 유의하게 억제하지만, 야생형 B-Raf를 가진 세포에서는 그렇지 않습니다. COLO205, A375, WM2664, COLO829와 같은 B-RafV600E 종양유전자를 발현하는 종양 세포주의 성장을 각각 GI50 0.31 μM, 0.50 μM, 1.5 μM, 1.7 μM으로 유의하게 억제합니다. 또한, 1 μM의 이 화학적 처리는 B-RafV600E 양성 1205Lu 세포에서만 세포 주기 정지 및 세포 사멸을 유도하며, B-Raf 야생형 C8161 세포에서는 유도하지 않습니다. 이 화합물 처리(10 μM)는 PTEN- 세포주(4배)와 비교하여 PTEN+ 세포에서 BIM 발현을 14배 이상 유의하게 유도하여, PTEN- 세포가 이 화학적 유도 세포 사멸에 저항하는 이유를 설명합니다.
생체 내(In Vivo) PLX-4720을 20 mg/kg/day 경구 투여하면 B-RafV600E 의존성 COLO205 종양 이종이식편에서 유의미한 종양 성장 지연 및 퇴행을 유도하며, 1 g/kg 용량에서도 쥐에게 명백한 부작용은 없습니다. 이 화합물을 100 mg/kg씩 하루 두 번 투여하면 B-RafV600E를 발현하는 1205Lu 이종이식편을 거의 완전히 제거하는 반면, 야생형 B-Raf를 발현하는 C8161 이종이식편에 대해서는 활성이 없습니다. 이 화합물의 항종양 효과는 V600E 돌연변이를 가진 세포에서 MAPK 경로의 차단과 관련이 있습니다. 30 mg/kg/day의 이 화학적 처리는 8505c 이종이식편의 종양 성장을 90% 이상 유의하게 억제하고 원격 폐 전이를 극적으로 감소시킵니다.

프로토콜 (참조)

키나아제 분석:[1]
  • 시험관 내 Raf 키나아제 활성

    야생형 Raf 및 돌연변이의 시험관 내 키나아제 활성은 Perkin-Elmer의 AlphaScreen 기술을 사용하여 바이오틴화된 MEK 단백질의 인산화를 측정하여 결정됩니다. 각 효소(0.1 ng)에 대해 20 mM Hepes (pH 7.0), 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, 0.01% Tween-20, 100 nM 바이오틴-MEK 단백질, 다양한 ATP 농도 및 증가하는 PLX-4720 농도에서 실온에서 20 μL 반응이 수행됩니다. 반응은 2, 5, 8, 10, 20 및 30분 후에 20 mM Hepes (pH 7.0), 200 mM NaCl, 80 mM EDTA 및 0.3% BSA를 포함하는 5 μL 용액으로 중단됩니다. 중단 용액에는 또한 phospho-MEK 항체, 스트렙타비딘 코팅된 도너 비드 및 AlphaScreen Protein A Detection Kit의 프로테인 A 억셉터 비드가 포함됩니다. 항체와 비드는 실온에서 어둠 속에서 30분 동안 중단 용액에서 사전 배양됩니다. 항체의 최종 희석은 1/2,000이며, 각 비드의 최종 농도는 10 μg/mL입니다. 분석 플레이트는 실온에서 1시간 동안 배양된 후 PerkinElmer AlphaQuest 리더에서 판독됩니다.
세포 분석:[1]
  • 세포주

    COLO205, A375, WM2664, COLO829, HT716, SW620, H460, Calu-6, HCT116, SK-MEL2, SK-MEL3, Lovo, H1299, 1205Lu, and C8161 cells

  • 농도

    Dissolved in DMSO, final concentrations ~1 mM

  • 배양 시간

    24, 48, and 72 hours

  • 방법

    Cells are treated with various concentrations PLX-4720 for 24, 48, and 72 hours. Cell proliferation is measured by using the CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay or MTT assay. For cell cycle analysis, supernatant and cells are collected, pelleted, and fixed with 70% ethanol. Before staining with propidium iodide (10 μg/mL), cells are incubated for 1 hour at 37 °C in 0.5 mg/mL RNase I to rid samples of residual RNA contamination. Samples are then analyzed by using the EPICS XL apparatus. For the assessment of apoptosis, media and cells are harvested and pelleted before staining with annexin-FITC and propidium iodide. Samples are subsequently analyzed by using the EPICS XL apparatus.
동물 연구:[1]
  • 동물 모델

    Female athymic mice (NCr nu/nu) implanted s.c. with COLO205 cells, and SCID mice with 1205Lu or C8161 cells

  • 용량

    5, 20, or 100 mg/kg

  • 투여

    Oral gavage once or twice daily

참조

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18287029/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21317224/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20498063/

고객 제품 검증

Combinatorial knockdown of NF1 and C-RAF abrogates NF1-mediated resistance to B-RAF inhibition at the level of ERK phosphorylation. A375 cells were infected with NF1 shRNA and treated with either DMSO or PLX4720 for 16 h. Cell lysates were analyzed for the indicated proteins.

데이터 출처 [ Cancer Discov , 2013 , 3, 350-62 ]

(D)Melanoma cell lines were treated with 0.5 uM Pi-103 and/or 2 uM PLX4720 for 4 h. Samples were analyzed by Western blotting for the indicated proteins. β-Actin served as a loading control. (E) Melanoma cell lines were treated with a dilution series of Pi-103 either alone or in combination with the BRAFV600E inhibitor PLX4720 at a concentration of 3 uM (D10) or 1 uM (453A0) for 3 d. Total cell numbers were determined with a cell titer blue assay. The Y-axis represents the percentage of living cells.

데이터 출처 [ Genes Dev , 2012 , 26, 1055-69 ]

<p>RAF inhibitors induce dimer formation between KSR and RAF, and activate KSR by CRAF. (A) GDC0879 but not PLX4720 induces BRAF/CRAF dimers. Cells overexpressing myc-CRAF and BRAF were treated with drug for 1 h and CRAF immunoprecipitates were immunoblotted for BRAF and CRAF (epitope tagged with myc). (B) GDC0879 but not PLX4720 enhances KSR/BRAF complexes. KSR immunoprecipitates were prepared from cells overexpressing FLAG-KSR and BRAF after treatment with the indicated drug for 1 h and immunoblotted using antibodies to BRAF. (C) Both GDC0879 and PLX4720 induce KSR/CRAF complexes.KSR immunoprecipitates were prepared from cells overexpressing FLAG-KSR and myc-CRAF after treatment with the indicated drug for 1 h and immunoblotted for CRAF using myc antibodies. (D and E) Requirement of KSR for drug-induced ERK activation. Lysates fromwild-type and KSR deficient fibroblasts, transfected with RASV12, were treated with the indicated doses of either GDC-0879 (D) or PLX4720 (E) for 1 h. Lysates were immunoblotted for phospho-ERK1 and 2, ERK2, and RASV12. (F) KSR and CRAF cooperate to activate MEK. Cells expressing the indicated constructs were treated with a 50 μM PLX4720 for 2 h before cell lysates were prepared and analyzed for pMEK by immunoblotting. CRAF(TM) refers to the T421M gatekeeper mutant that cannot bind to the drug(4). (G) KSR in vitro kinase reactions. Cells were cotransfected with WT or ATP binding deficient KSR and CRAF and immunoprecipitates prepared after cells were treated with an activating dose of PLX (10 μM) for 1 h. KSR immunoprecipitates were prepared, pretreated with 50 uM PLX4720 to inhibit coprecipitating RAF activity, and then tested for kinase activity using purified MEK. MEK phosphorylation was detected using a pMEK specific antibody.</p>

데이터 출처 [ Proc Natl Acad Sci USA , 2011 , 108, 6067-6072 ]

<p>PTEN predicts for PLX4720-induced apoptosis. A, basal PTEN and phospho-AKT(pAKT; S473, T308) expression in PTENt (WM164, 451Lu, SK-mel-28, WM983A, WM35, WM51) and PTEN (WM239A, WM266-4, WM793, M233, WM9, 1205Lu) melanoma cell lines. B, MTT assay of PTENt (gray)-expressing versus PTEN (black) cell lines. C, PTENt cells are more sensitive than PTEN cells to PLX4720-mediated apoptosis. Cells treated for 48 hours with 3 or 10 μmol/L PLX4720 before being stained for TMRM and Annexin-V. Apoptosis was measured by flow cytometry. Data shows mean SE mean of 3 independent experiments.*, PTENt cohort significantly different from PTEN cohort(P < 0.05).</p>

데이터 출처 [ Cancer Res , 2011 , 71, 2750-2760 ]

Sellecks PLX-4720 인용됨 206 출판물

Elevated NR2F1 underlies the persistence of invasive disease after treatment of BRAF-mutant melanoma [ J Clin Invest, 2025, 135(18)e178446] PubMed: 40955663
Elevated Transglutaminase-2 in SOX10-Deficient Melanoma Promotes Tumor Onset and Decreases Intratumoral CD4+ T Cells [ Cancer Res, 2025, 10.1158/0008-5472.CAN-24-3267] PubMed: 40742313
PTRF Confers Melanoma-Acquired Drug Resistance Through the Upregulation of EGFR [ Cell Prolif, 2025, e70086.] PubMed: 40745979
A functional comparison of two transplantable syngeneic mouse models of melanoma: B16F0 and YUMM1.7 [ Biol Open, 2025, 14(9)bio062175] PubMed: 40878826
Noncanonical role of Golgi-associated macrophage TAZ in chronic inflammation and tumorigenesis [ Sci Adv, 2025, 11(4):eadq2395] PubMed: 39841821
The ribotoxic stress response drives UV-mediated cell death [ Cell, 2024, 187(14):3652-3670.e40] PubMed: 38843833
Tracking the EMT-like phenotype switching during targeted therapy in melanoma by analyzing extracellular vesicle phenotypes [ Biosens Bioelectron, 2024, 10.1016/j.bios.2023.115819] PubMed: 37952322
Mcl-1 mediates intrinsic resistance to RAF inhibitors in mutant BRAF papillary thyroid carcinoma [ Cell Death Discov, 2024, 10(1):175] PubMed: 38622136
The ERK5 pathway in BRAFV600E melanoma cells plays a role in development of acquired resistance to dabrafenib but not vemurafenib [ FEBS Lett, 2024, 10.1002/1873-3468.14960] PubMed: 38977937
Executioner caspases restrict mitochondrial RNA-driven Type I IFN induction during chemotherapy-induced apoptosis [ Nat Commun, 2023, 14(1):1399] PubMed: 36918588

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