Pelitinib (EKB-569)

카탈로그 번호S1392 배치:S139201

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기술 자료

화학식

C24H23ClFN5O2
분자량 467.92 CAS 번호 257933-82-7
용해도 (25°C)* 시험관 내(In vitro) DMSO 13 mg/mL (27.78 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
생체 내(In Vivo) (개별적으로 순서대로 용매를 제품에 첨가하십시오.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml은 약간 용해되거나 불용해됨을 의미합니다.
* Selleck은 모든 화합물의 용해도를 자체적으로 테스트하며, 실제 용해도는 게시된 값과 약간 다를 수 있습니다. 이는 정상적인 현상이며, 약간의 배치 간 변동으로 인해 발생합니다.
* 실온 배송 (안정성 테스트 결과 이 제품은 냉각 조치 없이 배송될 수 있음을 보여줍니다.)

원액 준비

생물학적 활성

설명 Pelitinib (EKB-569)은 IC50이 38.5 nM인 강력한 비가역적 EGFR 억제제입니다. 이 화합물은 또한 Src, MEK/ERK 및 ErbB2를 각각 282 nM, 800 nM, 1255 nM의 IC50으로 약하게 억제합니다. 임상 2상.
표적
EGFR Src MEK/ERK ErbB2 Raf
38.5 nM 282 nM 800 nM 1.255 μM 3.353 μM
시험관 내(In vitro) Pelitinib (EKB-569)은 밀접하게 관련된 c-erbB-2뿐만 아니라 Src, Cdk4, c-Met, Raf 및 MEK/ERK와 같은 다른 키나아제에 비해 EGFR에 대해 훨씬 더 높은 억제 활성을 나타내며, Src의 경우 282 nM에서 Cdk4의 경우 >20 μM에 이르는 IC50을 보입니다. 일관되게, 이 화합물 처리는 A431 세포에서 EGFR의 자가인산화를 유의하게 억제하지만 c-Met은 억제하지 않습니다. 이는 정상 인간 각질형성세포(NHEK)뿐만 아니라 A431 및 MDA-468 종양 세포의 증식을 각각 61 nM, 125 nM, 260 nM의 IC50으로 강력하게 억제하며, MCF-7 세포에 대해서는 3.6 μM의 IC50으로 거의 활성을 나타내지 않습니다. 이 화학물질은 A431 및 NHEK 세포에서 EGF 유도 EGFR 인산화를 20-80 nM의 IC50으로 억제하며, STAT3 인산화도 30-70 nM의 IC50으로 억제합니다. 75-500 nM 농도에서 AKT 및 ERK1/2의 활성화를 특이적으로 억제하며, NF-κB 경로는 영향을 미치지 않습니다. NHEK 세포에서 이 화합물은 TGF-α 매개 EGFR 활성화를 56 nM의 IC50으로 강력하게 억제하며, STAT3 및 ERK1/2의 활성화도 각각 60 nM 및 62 nM의 IC50으로 억제합니다.
생체 내(In Vivo) Pelitinib (EKB-569) 10 mg/kg 단일 경구 투여는 EGFR이 과발현된 A431 이종이식편에서 EGFR 인산화를 1시간 이내에 90%, 24시간 후에는 50% 이상 강력하게 억제합니다. 이 화합물을 20 mg/kg/일로 투여하면 APCMin/+ 마우스에서 종양 발생을 87% 억제하며, 이는 EKI-785 (40 mg/kg/일)를 2배 용량으로 사용한 효과와 동일하며, 더 큰 생체 내 효능과 일치합니다. 이 화학물질은 생체 내 기도 상피 세포에서 EGFR 신호 전달을 선택적으로 억제합니다. 바이러스 감염으로 유도되며 지연되지만 영구적인 배상 세포 이형성증으로 전환되는 기도 상피 재형성 마우스 모델에서 이 화합물 20 mg/kg/일 치료는 섬모 세포 증가 및 클라라 세포 감소를 완전히 차단하고 배상 세포 이형성증을 유의하게 억제함으로써 상피 재형성의 세 가지 측면을 모두 교정합니다.
특징 EKI-785의 개선된 버전.

프로토콜 (참조)

키나아제 분석:

[1]
  • 세포 내 EGFR의 자가인산화

    세포 배양 실험의 경우, A431 세포는 Pelitinib (EKB-569)의 다양한 농도로 2.75시간 동안 처리된 후, 100 ng/mL EGF와 0.25시간 동안 공동 배양됩니다. 세포는 차가운 인산염 완충 식염수(PBS)로 두 번 세척한 후, 용해 완충액(10 mM Tris, pH 7.5, 5 mM 에틸렌다이아민테트라아세트산 (EDTA), 150 mM NaCl, 1% Triton X-100, 1% 데옥시콜산나트륨, 0.1% SDS, 1 mM PMSF, 10 mg/mL 펩스타틴 A, 10 mg/mL 류펩틴, 20 KIU/mL 아프로티닌, 2 mM 오르토바나듐산나트륨, 100 mM 불화나트륨)에 20분 동안 얼음 위에서 처리한 다음, 면역침전 및 SDS-PAGE-면역블로팅을 수행합니다. 면역침전을 위해, 배양된 세포는 차가운 용해 완충액에 넣고 즉시 폴리트론으로 여러 번 짧게 파쇄하여 얼음 위에서 균질화합니다. 균질액은 먼저 2500 rpm(20분, 4 °C)으로 원심분리한 다음, 마이크로원심분리기에서 14,000 rpm(10분, 4 °C)으로 다시 원심분리합니다. 상층액(1000 μg 단백질)은 15 mL의 EGFR 다클론 항체와 함께 4 °C에서 2시간 동안 배양됩니다. 2시간 후, 50 μL의 단백질 G 플러스/단백질 A 아가로스 비드를 첨가하고 4 °C에서 2시간 동안 일정한 회전으로 배양합니다. 용해 완충액으로 세척한 후, 비드는 라엠리 샘플 완충액에서 2분 동안 끓입니다. 단백질은 SDS-PAGE로 분리한 후, 이모빌론 막으로 옮기고 하이드록실페록시다제(HRP)와 접합된 항-포스포티로신 항체로 밤새 프로브합니다. 막은 ECL 시약을 사용하여 현상합니다. 총 EGFR 단백질은 막을 벗겨내고 수용체 특이 항체로 재프로빙하여 결정됩니다. 밴드 정량은 Molecular Dynamics 레이저 투과 스캐너를 이용한 ImageQuant 소프트웨어를 사용하여 덴시토메트리로 수행됩니다.
세포 분석:

[2]
  • 세포주

    NHEK, A431, MCF-7, and MDA-468

  • 농도

    Dissolved in DMSO, final concentrations ~10 μM

  • 배양 시간

    5 days

  • 방법

    Cells are seeded in 96-well dishes, and after 2 hours, Pelitinib (EKB-569) is added and incubated for 5 days. After incubation, the medium is removed from each well and fresh medium (150 μL) + 1 mg/mL MTT solution (50 μL) is added. After incubation for 2 hours at 37 °C, the medium is replaced with 150 μL DMSO, and absorbance at 540 nm in each well is determined. The IC50 is calculated by linear regression of the data.
동물 연구:

[1]
  • 동물 모델

    Athymic nu/nu female mice bearing subcutaneous A431 tumors, or APCMin/+ male mice, a murine model of human familial adenomatous polyposis (FAP)

  • 용량

    10, or 20 mg/kg/day

  • 투여

    Oral gavage

참조

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/10973323/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14749472/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16453019/

고객 제품 검증

HBMEC were preincubated with the indicated concentrations of either ErB1/2/4 inhibitor (Pelitinib; EKB-569), and cells were then infected for 4 h with the unencapsulated strain, MC58 siaD. The numbers of adherent (black bars) and invasive (gray bars) bacteria were determined in a gentamicin protection assay. The graphs show the percentages of adhesion and invasion of inhibitor-treated cells, relative to control cells (means 盨D of three independent experiments performed in duplicate). *, P < 0.05.

데이터 출처 [ Infect Immun , 2014 , 82(3), 1243-55 ]

<p>IGF-1 and IL-1β mediated induction of Bcl-2 expression involves EGFR.   (A)  Bcl-2 mRNA levels in AALEBs treated with IGF-1 or IL-1β in the presence or absence of two EGFR tyrosine kinase inhibitors, EKB-569 (1 μM) or PD153035 (1 μM). </p>

데이터 출처 [ J Immunol , 2012 , 188, 4581-4589 ]

Immunofluorescence Assay. PDCD4, GRA3, and overlapping are represented in red, green, and yellow, respectively. Group I TKIs sunitinib and AZD9291 show similar results to that of the negative control with PDCD4 and GRA3 well localized inside the nuclei. Mild disruption of PDCD4 in the nuclei is observed with Group II TKIs gefitinib, erlotinib, and AG1478. Group III TKIs neratinib, afatinib, and pelitinib show comparable changes to that of pyrimethamine 5 μM, with complete disruption of PDCD4 and GRA3, without any localization. The assays were repeated 3 times, and each experiment was performed in triplicate. A representative result is shown (x1,000).

데이터 출처 [ , , Korean J Parasitol, 2017, 55(5):491-503 ]

Sellecks Pelitinib (EKB-569) 인용됨 11 출판물

Integrative analysis of drug response and clinical outcome in acute myeloid leukemia [ Cancer Cell, 2022, S1535-6108(22)00312-9] PubMed: 35868306
EGFR Inhibition Potentiates FGFR Inhibitor Therapy and Overcomes Resistance in FGFR2 Fusion-Positive Cholangiocarcinoma [ Cancer Discov, 2022, 12(5):1378-1395] PubMed: 35420673
The multi-kinase inhibitor afatinib serves as a novel candidate for the treatment of human uveal melanoma [ Cell Oncol (Dordr), 2022, 45(4):601-619] PubMed: 35781872
Biomarker LEPRE1 induces pelitinib-specific drug responsiveness by regulating ABCG2 expression and tumor transition states in human leukemia and lung cancer [ Sci Rep, 2022, 12(1):2928] PubMed: 35190588
A Genome-Scale CRISPR Screen Identifies the ERBB and mTOR Signalling Networks as Key Determinants of Response to PI3K Inhibition in Pancreatic Cancer [ Mol Cancer Ther, 2020, 5;molcanther.1131.2019] PubMed: 32371585
Mapping phospho-catalytic dependencies of therapy-resistant tumours reveals actionable vulnerabilities. [ Nat Cell Biol, 2019, 21(6):778-790] PubMed: 31160710
Suppressors for Human Epidermal Growth Factor Receptor 2/4 (HER2/4): A New Family of Anti-Toxoplasmic Agents in ARPE-19 Cells [Kim YH Korean J Parasitol, 2017, 55(5):491-503] PubMed: 29103264
Sensitivity of Melanoma Cells to EGFR and FGFR Activation but Not Inhibition is Influenced by Oncogenic BRAF and NRAS Mutations. [Garay T, et al. Pathol Oncol Res, 2015, 10.1007/s12253-015-9916-9] PubMed: 25749811
Selective inhibition of human solute carrier transporters by multikinase inhibitors [Johnston RA, et al. Drug Metab Dispos, 2014, 42(11):1851-7] PubMed: 25165131
Role of epidermal growth factor receptor signaling in the interaction of Neisseria meningitidis with endothelial cells [Slanina H et al. Infect Immun, 2014, 82(3):1243-55] PubMed: 24379285

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