RAF265 (CHIR-265)

카탈로그 번호S2161 배치:S216103

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기술 자료

화학식

C24H16F6N6O
분자량 518.41 CAS 번호 927880-90-8
용해도 (25°C)* 시험관 내(In vitro) DMSO 100 mg/mL (192.89 mM)
Ethanol 100 mg/mL (192.89 mM)
Water Insoluble
생체 내(In Vivo) (개별적으로 순서대로 용매를 제품에 첨가하십시오.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml은 약간 용해되거나 불용해됨을 의미합니다.
* Selleck은 모든 화합물의 용해도를 자체적으로 테스트하며, 실제 용해도는 게시된 값과 약간 다를 수 있습니다. 이는 정상적인 현상이며, 약간의 배치 간 변동으로 인해 발생합니다.
* 실온 배송 (안정성 테스트 결과 이 제품은 냉각 조치 없이 배송될 수 있음을 보여줍니다.)

원액 준비

생물학적 활성

설명 RAF265 (CHIR-265)는 C-Raf/B-Raf/B-Raf V600E의 강력하고 선택적인 억제제로 IC50이 3-60 nM이며, 세포 없는 분석에서 VEGFR2 인산화에 대한 강력한 억제력을 EC50 30 nM로 나타냅니다. 이 화합물은 세포 주기 정지 및 세포자멸사를 유도합니다. 2상.
표적
VEGFR2
(Cell-free assay)		 B-Raf
(Cell-free assay)
30 nM(EC50) 3 nM-60 nM
시험관 내(In vitro) RAF265 (CHIR-265)는 C-Raf, 야생형 B-Raf 및 돌연변이 (V600E) B-Raf를 억제합니다. 이 화합물은 세포에서 Raf의 하위 기질인 MEK 및 ERK의 인산화를 효과적으로 차단하고, PTEN 돌연변이 상태와 무관하게 B-Raf 돌연변이를 가진 흑색종 및 대장암 세포주를 사멸시킵니다. 돌연변이 B-Raf 흑색종 세포주에서 이 물질에 의한 Raf 키나제 억제는 세포 주기 정지를 유발하고 세포자멸사를 유도하여 이들 세포에서 Raf RNAi의 효과를 모방합니다. 또한 VEGFR2의 인산화와 VEGF-자극된 hMVEC의 증식을 강력하게 억제합니다. HT29 및 MDAMB231 세포에서 이 화학 물질은 각각 IC20이 1~3 μM, IC50이 5~10 μM인 억제 활성을 보입니다. 모든 테스트된 세포주에서 클론 형성 생존율이 크게 감소하여 이 화합물이 클론 형성 생존에 지배적인 영향을 미친다는 것을 의미합니다. HCT116 세포에 이 물질을 RAD001과 함께 추가하면 AKT, S6 단백질 및 4EBP1 인산화가 중간 정도로 감소할 수 있습니다. 이는 Bcl-2 단백질 수준을 현저히 감소시키고 CM 및 NCI-H727 세포에서 강력한 억제 작용을 하지만, BON1 및 GOT1 세포의 TRAIL 민감도에는 영향을 미치지 않습니다. 단백질 키나제 D3 (PRKD3)는 녹다운 시 A2058 흑색종 세포에서 이 화합물에 의한 세포 사멸을 향상시킬 수 있으며, 이는 MAPK 신호 전달의 재활성화를 방지하고 PARP 분열을 유도하며 카스파제 활성을 증가시키고 세포 주기 진행을 방해하며 집락 형성을 억제합니다.
생체 내(In Vivo) RAF265 (CHIR-265)는 HCT116 이종이식에서 12 mg/kg 용량으로 71%에서 72%의 TVI%(종양 부피 억제율)를 보입니다. 이 화합물과 RAD001의 병용은 T10(초기 종양 부피의 10배에 해당하는 상대적 종양 부피에 도달하는 시간) 및 종양 성장 지연 증가와 함께 향상된 항종양 활성을 보여줍니다. RAD001과 이 화학 물질의 병용은 HCT116 및 MDAMB231 이종이식에서 카스파제-3 활성화를 유의하게 향상시키지만 A549 이종이식에서는 그렇지 않습니다. 이 화합물은 A375M 이종이식에서 100 mg/kg 경구 투여 시 FDG(2-deoxy-2-[18F]fluoro-d-glucose) 축적을 억제하고 종양 부피를 감소시킵니다.

프로토콜 (참조)

키나아제 분석:[1]
  • 분석 프로토콜

    Raf와 Mek는 분석 완충액(50 mM Tris, pH 7.5, 15 mM MgCl2. 0.1 mM EDTA 및 1 mM DTT)에 최종 농도의 2배로 혼합하고 폴리프로필렌 분석 플레이트의 각 웰에 15 μL씩 분주합니다. 배경 수준은 Raf 없이 Mek와 DMSO를 포함하는 웰에서 결정됩니다. Raf/Mek를 포함하는 웰에 100% DMSO에 희석된 이 화합물 10 × 용액 3 μL를 첨가합니다. raf 키나제 활성 반응은 분석 완충액에 희석된 2.5 × 33P-ATP 12 μL를 각 웰에 첨가하여 시작됩니다. 45-60분 후, 70 μL의 정지 시약(30 mM EDTA)을 첨가하여 반응을 정지시킵니다. 여과 플레이트는 70% 에탄올로 5분 동안 미리 적신 다음, 세척 완충액으로 여과하여 헹굽니다. 반응 웰에서 얻은 샘플(90 μL)은 여과 플레이트로 옮겨집니다. 여과 플레이트는 Millipore 여과 장치를 사용하여 세척 완충액으로 6회 세척됩니다. 플레이트는 건조되고 각 웰에 100 μL의 섬광액이 첨가됩니다. CPM은 Wallac Microbeta 1450 판독기를 사용하여 결정됩니다.
세포 분석:[2]
  • 세포주

    Human A549 and H460 lung, HT29 and HCT 116 colon, and MDAMB231 breast cancer cell lines

  • 농도

    0.1 - 10 μM

  • 배양 시간

    48 hours

  • 방법

    The MTT assay and Bliss additivism model are used to assess the effect of RAF265 (CHIR-265) on cell viability. In each well of a 96-well plate, 1 × 104 cells are grown in 200 μL of medium. After 24 hours, this compound is added to achieve a final concentration of 0.1 to 10 μM. After 48 hours of treatment, 20 μL of 5 mg/mL MTT solution in PBS is added to each well. After 4 hours, supernatant is removed and formazan crystals are discarded in 200 μL of DMSO. Absorbance is then measured at 595 nm using an absorbance plate reader. Data are expressed as the percentage of viable cells.
동물 연구:[2]
  • 동물 모델

    A549, H460, HCT116, or MDAMB231 cells are injected s.c. into the flank region of 6-wk-old female athymic mice.

  • 용량

    12 mg/kg

  • 투여

    Orally administered daily

참조

  • http://www.aacrmeetingabstracts.org/cgi/content/meeting_abstract/2008/1_Annual_Meeting/4876
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20124452/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21317202/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21527556/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21390189/

고객 제품 검증

<p>Immunoblots showing levels of phospho-MEK (p-MEK), total MEK (t-MEK), phospho-ERK1/2 (p-ERK1/2) and total ERK1/2 (t-ERK1/2) in A375 cells transduced with a retrovirus expressing BRAFV600E, BRAFV600E/L505H, BRAFV600E/F516G or BRAFV600E/T529N and treated with increasing doses of RAF265. α-tubulin (TUBA) was monitored as a loading control.</p>

데이터 출처 [ Pigment Cell Melanoma Res , 2014 , 27(1), 124-33 ]

Raf265 inhibited the kinase activity of B-Raf but not of Raf-1 in Pkd2cKO cholangiocytes. Cells were treated for 30 min with different concentrations of Raf265. B-Raf and Raf-1 were immunoprecipated as described in the methods section and a kinase assay in vitro was performed using MEK as a substrate. The kinase activity of Raf was assessed by immunoblot analysis and quantified as optical density of pMEK with respect to untreated cells. In WT cholangiocytes (A) Raf265 inhibited both B-Raf and Raf-1 kinase activity. In Pkd2cKO cholangiocytes (B), Raf265 inhibited only B-Raf while a biphasic effect was found in Raf-1 with a significant increase at doses from 0.001 to 1 uM and a significant inhibition at 10 uM. Blots are representative of four different experiments. (*p<0.05 vs controls; **p<0.001 vs controls).

데이터 출처 [ Hepatology , 2012 , 56(6), 2363-74 ]

LS513 cells were treated with increasing concentrations of selumetinib or selumetinib combined with different concentration of RAF265 for 48 hr. Lysates were subjected to western blot analyses, and membranes were probed with the indicated antibodies. Vinculin was included as a loading control.

데이터 출처 [ , , Cell Rep, 2014, 8(5):1475-83 ]

Wild-type fetal liver-derived cells were differentiated for 2 days in culture. Kinase inhibitors (A-674563 and RAF265; concentrations are listed in Materials and Methods) were added during the final 14 h of culture.

데이터 출처 [ , , Mol Cell Biol, 2016, 37(1) ]

Sellecks RAF265 (CHIR-265) 인용됨 24 출판물

A structure-based modelling approach identifies effective drug combinations for RAS-mutant acute myeloid leukemia [ bioRxiv, 2025, 2025.04.29.651188] PubMed: 40654850
Integrative analysis of drug response and clinical outcome in acute myeloid leukemia [ Cancer Cell, 2022, S1535-6108(22)00312-9] PubMed: 35868306
Comprehensive drug response profiling and pan-omic analysis identified therapeutic candidates and prognostic biomarkers for Asian cholangiocarcinoma [ iScience, 2022, 25(10):105182] PubMed: 36248745
Identification of New Vulnerabilities in Conjunctival Melanoma Using Image-Based High Content Drug Screening [ Cancers (Basel), 2022, 14(6)1575] PubMed: 35326726
B-Raf inhibitor vemurafenib counteracts sulfur mustard-induced epidermal impairment through MAPK/ERK signaling [ Drug Chem Toxicol, 2022, 1-10] PubMed: 34986718
RAF1 amplification drives a subset of bladder tumors and confers sensitivity to MAPK-directed therapeutics [ J Clin Invest, 2021, e147849] PubMed: 34554931
SHOC2 phosphatase-dependent RAF dimerization mediates resistance to MEK inhibition in RAS-mutant cancers. [ Nat Commun, 2019, 10(1):2532] PubMed: 31182717
RAF kinases are stabilized and required for dendritic cell differentiation and function. [ Cell Death Differ, 2019, 10.1038/s41418-019-0416-4] PubMed: 31541179
Genetic Heterogeneity of BRAF Fusion Kinases in Melanoma Affects Drug Responses. [ Cell Rep, 2019, 29(3):573-588] PubMed: 31618628
Mitochondrial metabolic reprograming via BRAF inhibition ameliorates senescence. [ Exp Gerontol, 2019, 126:110691] PubMed: 31421186

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