NSC 74859 (S3I-201)

NSC 74859 (S3I-201)는 Stat3·Stat3 복합체 형성 및 Stat3 DNA 결합 및 전사 활성을 억제하여 지속적으로 활성화된 Stat3를 포함하는 종양 세포에서 성장을 억제하고 세포자멸사를 유도합니다. 또한, 사이클린 D1, Bcl-xL 및 서비빈을 암호화하는 Stat3 조절 유전자의 발현도 억제합니다. [1] 이 화합물은 유방암 세포주 MDA-MB-435, MDA-MB-453 및 MDA-MB-231을 100 μM의 IC50으로 억제합니다. 또한, TGF-β 신호 전달이 손상된 세포는 S3I-201에 대해 4배 더 민감합니다. [2] 최근 연구에 따르면 STAT3 신호 전달 경로를 통해 HepG2 및 Huh-7 세포에서 항증식 효과를 증강시킵니다. [3]

NSC 74859 (S3I-201) (5 mg/kg, 2일 또는 3일마다 정맥 주사)는 구성적으로 활성 Stat3를 보유한 인간 유방암 이종이식편이 있는 마우스 모델에서 항종양 효능을 보여줍니다. [1] 이 화합물 치료는 STAT3 인산화를 억제함으로써 DMSO 처리된 마우스와 비교하여 생체 발광 신호 및 양성 피부 이종이식편 수를 기반으로 수두-대상포진 바이러스 (VZV) 복제를 감소시킵니다. [4]

• 시험관 내 Stat3 DNA 결합 분석 및 EMSA 분석

  간단히, 스트렙타비딘 코팅된 96웰 마이크로 플레이트의 각 웰에 100 mL의 바이오티닐-e-Ac-EPQpYEEIEL-OH (50 mM Tris/150 mM NaCl, pH 7.5)를 첨가하고 4 °C에서 밤새 흔들면서 배양합니다. 그런 다음 플레이트는 PBS/Tween 20으로 헹구고 BSA-T-PBS (0.2% BSA/0.1% Tween 20/PBS) 200 mL로 두 번 헹굽니다. 그런 다음 Lck-SH2-GST 융합 단백질 (BSA-T-PBS에 6.4 ng/ml) 50 mL를 NSC 74859 (S3I-201) 50 mL의 존재 및 부재 하에 96웰 플레이트의 각 웰에 첨가하고 (최종 농도 30 및 100 mM), 플레이트를 실온에서 4시간 동안 흔듭니다. 용액을 제거한 후, 각 웰을 BSA-T-PBS (200 mL)로 4회 헹구고, 폴리클로날 토끼 항-GST 항체 (BSA-T-PBS에 100 ng/mL) 100 mL를 각 웰에 첨가하고 4 °C에서 밤새 배양합니다. BSA-T-PBS로 세척한 후, 200 ng/mL BSA-T-PBS 서양고추냉이 퍼옥시다아제 접합 마우스 항-토끼 항체 100 mL를 각 웰에 첨가하고 실온에서 45분 동안 배양합니다. BSA-T-PBS로 4회 세척하고 PBS-T로 3회 세척한 후, 퍼옥시다아제 기질 100 mL를 각 웰에 첨가하고 5-15분 동안 배양합니다. 퍼옥시다아제 반응은 1 M 황산 용액 100 mL를 첨가하여 중지하고, ELISA 플레이트 리더로 450 nm에서 흡광도를 읽습니다.

• 세포주

  MDA-MB-435, MDA-MB-453 and MDA-MB-231 cells lines

• 농도

  ~ 250 μM

• 배양 시간

  72 hours

• 방법

  The MTT assay is based on the conversion of the yellow tetrazolium salt MTT to purple formazan crystals by metabolically active cells. The MTT assay provides a quantitative determination of viable cells. Cells are seeded in 96-well microplates in complete culture medium in the absence or presence of increasing serial dosages of NSC 74859 (S3I-201) as indicated. At 72 hours after culture, the number of viable cells is measured by adding 100 μL/well of 2 mg/mL MTT solution. After 2 hours, the medium is removed. The absorbance is read at 590 nm with an enzyme-linked immunosorbent assay reader. Each treatment point is performed in 10 wells or sextuplicate.

• 동물 모델

  Human breast cancer MDA-MB-231 cells are injected s.c. into the left flank of athymic nu/nu mice.

• 용량

  ≤5 mg/kg

• 투여

  Administered via i.v.