Tandutinib (MLN518)

Tandutinib (MLN518)은 EGFR, FGFR, KDR, InsR, Src, Abl, PKC, PKA 및 MAPK에 대해 거의 활성이 없습니다. IL-3 비의존성 세포 성장 및 FLT3-ITD 자가인산화를 10-100 nM의 IC50로 억제합니다. 이 화합물은 또한 FLT3-ITD 돌연변이를 포함하는 인간 백혈병 Ba/F3 세포의 증식을 10-30 nM의 IC50 값으로 억제하며, FLT3-ITD 양성 Molm-13 및 Molm-14 세포를 10 nM의 IC50로 억제합니다. FLT3-ITD 양성 Molm-14 세포에서 (FLT3-ITD 음성 THP-1 세포에서는 아님) Tandutinib 치료는 특정 FLT3 억제로 인해 24시간 및 96시간에 각각 51% 및 78%의 상당한 세포자멸사를 유도합니다. [1] 이는 정상 인간 전구 세포의 콜로니 형성에 영향을 미치지 않으면서 ITD 음성 AML 환자에 비해 FLT3 ITD 양성 환자의 아세포 콜로니 성장을 우선적으로 억제합니다. [2]

Tandutinib (MLN518) 60 mg/kg bid 경구 투여는 W51 FLT3-ITD 돌연변이를 발현하는 Ba/F3 세포를 이식한 쥐의 생존율을 유의하게 증가시키고, 쥐 골수 이식 모델에서 사망률을 유의하게 감소시킵니다. [1] 180 mg/kg을 하루 두 번 이 화합물로 치료하면 정상 조혈에 대한 경미한 독성이 있지만, 쥐의 FLT3 ITD 양성 백혈병 치료에 효과적인 용량입니다. [2]

• 세포 기반 수용체 자가인산화 분석

  PDGFR 계열 키나제 자가인산화 분석은 야생형 PDGFRβ, 키메라 단백질 PDGFRβ/c-Kit, PDGFRβ/Flt3(PDGFRβ의 세포외 및 막관통 도메인과 c-Kit의 세포질 도메인 및 Flt-3 포함)를 발현하는 CHO 세포를 사용하는 세포 기반 효소 결합 면역 흡착 분석(ELISA)입니다. 세포는 표준 조직 배양 조건에서 96웰 마이크로타이터 플레이트에 컨플루언스까지 배양한 다음 16시간 동안 혈청 기아 상태를 유지합니다. 간단히 말해, 휴지기 세포는 37°C에서 Tandutinib (MLN518) 농도를 증가시키면서 30분 동안 배양한 다음 8 nM PDGF-BB를 10분 동안 첨가합니다. 세포는 100 mM Tris, pH 7.5, 750 mM NaCl, 0.5% Triton X-100, 10 mM 피로인산나트륨, 50 mM NaF, 10 μg/mL 류펩틴, 1 mM 페닐메틸설포닐 플루오라이드, 1 mM 바나데이트 나트륨에 용해시키고, 용해물은 15,000g에서 5분 동안 원심분리하여 정제합니다. 정제된 용해물은 이전에 500 ng/웰의 1B5B11 항-PDGFRβ mAb로 코팅된 두 번째 마이크로타이터 플레이트로 옮겨서 실온에서 2시간 동안 배양합니다. 결합 완충액(0.3% 젤라틴, 25 mM HEPES, pH 7.5, 100 mM NaCl, 0.01% Tween 20)으로 세 번 세척한 후, 250 ng/mL의 토끼 다클론 항-포스포티로신 항체를 첨가하고 플레이트를 37°C에서 60분 동안 배양합니다. 이어서, 각 웰을 결합 완충액으로 세 번 세척하고 1 μg/mL의 서양 고추냉이 과산화효소 접합 항-토끼 항체와 함께 37°C에서 60분 동안 배양합니다. 웰은 2,2를 첨가하기 전에 세척합니다.

• 세포주

  Ba/F3, Molm-13, Molm-14, HL60, AML193, KG-1, KG-1a, THP-1, and RS4;11

• 농도

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~30 μM

• 배양 시간

  ~7 days

• 방법

  Cells are exposed to increasing concentrations of Tandutinib (MLN518) (0.004-30 μM). They are grown for 3-7 days in tissue culture, and viable cells, determined by Trypan blue dye exclusion, are counted. At daily intervals, cells are harvested, washed, and resuspended in 100 uL binding buffer containing 10 mM HEPES (pH 7.4), 140 mM NaCl, and 2.5 mM CaCl₂. Annexin V-FITC (100 ng) and propidium iodide (250 ng) are added to the cell suspension followed by incubation at room temperature for 15 minutes. Flow cytometry is performed immediately after staining on a FACSort flow cytometer with excitation at 488 nm. Fluorescence of annexin V-FITC and DNA propidium iodide staining are measured at 515 nm and 585 nm, respectively.

• 동물 모델

  Female athymic nude (nu/nu) mice injected with Ba/F3 cells expressing W51 FLT3-ITD mutant

• 용량

  40-120 mg/kg/day

• 투여

  Orally by gavage