VX-809 (Lumacaftor)

카탈로그 번호S1565 배치:S156503

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기술 자료

화학식

C24H18F2N2O5
분자량 452.41 CAS 번호 936727-05-8
용해도 (25°C)* 시험관 내(In vitro) DMSO 90 mg/mL (198.93 mM)
Ethanol 14 mg/mL (30.94 mM)
Water Insoluble
생체 내(In Vivo) (개별적으로 순서대로 용매를 제품에 첨가하십시오.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml은 약간 용해되거나 불용해됨을 의미합니다.
* Selleck은 모든 화합물의 용해도를 자체적으로 테스트하며, 실제 용해도는 게시된 값과 약간 다를 수 있습니다. 이는 정상적인 현상이며, 약간의 배치 간 변동으로 인해 발생합니다.
* 실온 배송 (안정성 테스트 결과 이 제품은 냉각 조치 없이 배송될 수 있음을 보여줍니다.)

원액 준비

생물학적 활성

설명 Lumacaftor (VX-809, VRT 826809)는 낭포성 섬유증에 흔한 CFTR 돌연변이를 교정하기 위해 돌연변이 CFTR (F508del-CFTR) 성숙을 증가시키며, Fisher 쥐 갑상선 세포에서 EC50은 0.1 μM입니다. 3단계.
표적
F508del-CFTR
(Fisher rat thyroid cells)
0.1 μM(EC50)
시험관 내(In vitro)

Lumacaftor (VX-809)는 ER 수준에서 작용하여 F508del-CFTR의 일부가 적절하게 접힌 형태를 취하고, ER을 벗어나 세포 표면으로 이동하여 정상적인 기능을 할 수 있도록 합니다. F508del-CFTR을 발현하는 Fischer 쥐 갑상선(FRT) 세포에서 이 화합물 처리는 F508del-CFTR 성숙을 EC50 0.1 μM에서 7.1배 유의하게 개선하고, F508del-CFTR 매개 염화물 수송을 EC50 0.5 μM에서 약 5배 향상시키는 반면, VRT-768은 각각 7.9 μM 및 16 μM의 더 높은 EC50 값을 가집니다. F508del-CFTR을 발현하는 HEK-293 세포에서, 이 물질(3 μM)은 F508del-CFTR의 ER 탈출을 6배 증가시켜 CFTR의 34%에 해당하는 수준에 도달합니다. F508del-CFTR 돌연변이를 가진 원발성 인간 기관지 상피(HBE) 세포에서 이 물질은 CFTR 성숙을 증가시키고 염화물 분비를 각각 EC50 350 nM 및 81 nM에서 향상시켜 Corr-4a 및 VRT-325보다 더 효과적입니다. 이 물질로 교정된 F508del-CFTR은 정상 CFTR의 0.40과 유사한 0.39의 단일 채널 개방 확률을 나타냅니다. VX-770과는 달리, 급성 투여가 F508del-CFTR 기능에 영향을 미치지 않으므로 CFTR 강화제가 아닙니다. VRT-325 및 Corr-4a와 달리, hERG 또는 P-gp의 정상 또는 돌연변이 형태의 처리뿐만 아니라 α1-antitrypsin Z 돌연변이 (E342K-α1-AT) 또는 N370S-β-glucosidase를 포함한 다른 질병 유발 오정렬 단백질의 처리를 개선하지 않아 CFTR에 특이적임을 시사합니다. VRT-325 또는 Corr-4a와 함께 사용하면 배양된 F508del-HBE에서 CFTR 매개 염화물 수송에 대한 부가적인 효과를 가집니다.

생체 내(In Vivo)

Lumacaftor (VX-809; VRT 826809)는 CFTR 단백질의 접힘 및 수송을 교정하는 CFTR 조절제입니다.
특징 다른 CFTR 결함 약물에 비해 더 높은 특이성과 효능.

프로토콜 (참조)

키나아제 분석:

[1]
  • F508del-CFTR 성숙

    F508del-CFTR을 안정적으로 발현하는 FRT 세포를 Lumacaftor (VX-809)의 농도를 증가시켜 48시간 동안 처리합니다. 배양 후, 세포를 얼음처럼 차가운 D-PBS 용액(칼슘 및 마그네슘 없음)에 수확하고 4°C에서 1,000 × g로 펠릿화합니다. 세포 펠릿은 1% Nonidet P-40, 0.5% 데옥시콜산나트륨, 200mM NaCl, 10mM Tris, pH 7.8 및 1mM EDTA에 단백질 분해효소 억제제 혼합물(1:250)을 첨가하여 얼음 위에서 30분 동안 용해합니다. 용해물은 4°C에서 10,000 × g로 10분 동안 원심분리하여 핵과 불용성 물질을 펠릿화합니다. 약 12μg의 총 단백질을 5% β-메르캅토에탄올이 포함된 Laemmli 완충액에서 37°C에서 5분 동안 가열하고 3% ~ 8% Tris-아세테이트 겔에 로딩합니다. 겔은 니트로셀룰로스 막으로 옮겨지고 단일클론 CFTR 항체 또는 폴리클론 GAPDH를 사용하여 Western blotting을 처리합니다. 블롯은 향상된 화학발광으로 현상합니다. C 밴드와 GAPDH의 상대적 양의 정량화는 스캔된 필름의 NIH ImageJ 분석을 사용하여 수행됩니다.
세포 분석:

[1]
  • 세포주

    FRT (CFTR or F508del-CFTR), HEK-293 (CFTT or F508del-CFTR) , and HBE cells

  • 농도

    Dissolved in DMSO, final concentrations ~0.1 mM

  • 배양 시간

    24 or 48 hours

  • 방법

    Cells are exposed to various concentrations of Lumacaftor (VX-809) for 24 or 48 hours. Ussing chamber techniques are used to record the transepithelial current (IT) resulting from CFTR-mediated chloride transport. The single-channel activity of CFTR is measured by using excised inside-out membrane patch recordings. Immunoblot techniques using the monoclonal CFTR antibody are used to measure CFTR maturation in FRT, HEK-293, or HBE cells expressing CFTR or F508del-CFTR.
동물 연구:

[1]
  • 동물 모델

    Male Sprague– Dawley rats

  • 용량

    1 mg/kg

  • 투여

    p.o.

참조

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21976485/

고객 제품 검증

<p>△F508CFTR diffusion is increased by different correction mechanisms. A, example trajectories from MDCK cell lines for wtCFTR (black) and △F508CFTR rescued by VX-809 treatment in the absence (red) and presence (blue ) of mCh-CFTR-C. B, summary graph for wtCFTR, r△F508CFTR and CFTR△PDZ diffusion in VX-809-treated and control MDCK cell lines. C, example trajectories for MDCK cells transiently expressing 3FLAG-tagged wtCFTR(black), △F508CFTR rescued by VX-809 (red), CFTR△PDZ ( blue ), and △F508CFTR△PDZ rescued by VX-809 (green). D, summary graph for CFTR dif- fusion in VX-809-treated MDCK transiently transfected with 3FLAG-tagged CFTR constructs. E, example trajectories from MDCK cell lines stably expressing wtCFTR ( left ) and △F508CFTR ( right ) treated with thapsigargin ( black)or CoPo-22 (red) or transiently expressing GFP-GRASP55 (blue ). F, graphs for △F508CFTR ( top ) and wtCFTR (bottom) diffusion in MDCK cell lines treated with thapsigargin or CoPo-22 or transiently expressing GFP-GRASP55. For reference, median and interquartile values for wtCFTR diffusive range are shown by dashed lines(bar 1, top ). G, GFP-GRASP55 is Golgi-localized by immunocytochemical analysis (scale bar, 10 μm). Scale bar in A (500 nm) refers to all trajectories. In panels Band D, statistically significant differences in populations are shown (*, p<0.001). SPT data for MDCK cell lines was derived from 140 –788 trajectories and for transiently transfected MDCK cells from 131–298 trajectories.</p>

데이터 출처 [ J Biol Chem , 2012 , 287, 43630-8 ]

<p> </p><p>VX809 inceases the expression of DF508 CFTR in oocytes.  Oocytes injected with DF508 CFTR and b-adrenergic receptor RNAs were incubated at 17oC for 3 days with and without 5 μM VX809.  The conductance at the reversal potential (gCl at Vm = Erev) was assayed using two-electrode-voltage clamp. Oocytes were placed in experimental chambers and perfused with standard Frog Ringer's at room temperature where the conductance was monitored as a function of time. The conductance was near zero before stimulation using a cocktail containing 10 μM isoproterenol and 1 μM 3-isobutyl-1-methylxanthine (hatched bar).  At steady state, conductance of oocytes treated with 5 μM VX809 ("x" symbols in panel A and white bar in panel B) was significantly larger than that of untreated oocytes ("+" symbols in panel A and black bar in panel B).  Towards the end of the experiments, oocytes were exposed to 10 μM CFTR-172 to verify that the conductance was due to CFTR chloride channels. </p>

, , Xuehong Liu of Oregon Health & Science University

<p> </p><p>Figure 7. Using chamber experiments demonstrating that TGF- β1 inhibits functional rescue of △ F508-CFTR in CF-HBE cells. Representative recordings ( A&B) demonstrating that VX-809 and CF-106951 partially rescued the CFTRinh -172 sensitive I sc compared to vehicle control (Vehicle). VX-809 (10 μM), CF-106951 (10 μM) or vehicle control (DMSO) was added to the basolateral medium for 24 h. The final concentration of DMSO was ,0.1%. Experiments were repeated at least 3 times in CF-HBE cells from 3 different donors. In subsequent experiments, corrector VX-809 ( C&D) or CF-106951 ( E&F ) was used for 24 h to rescue the CFTRinh-172 sensitive Isc. Subsequently, TGF- β1 (15 ng/ml) or vehicle control (CTRL) was added with fresh VX-809 or CF-106951 to the basolateral medium for 24 h. Monolayers were bathed in Ringer’s solution in the presence of amiloride (10 μM). TGF-β1 decreased the CFTRinh-172 sensitive Isc rescued by either VX-809 or CF-106951.</p>

,

RAF1 and CAMKK1 single siRNA validation in flow cytometry. RAF1 and CAMKK1 single Dharmacon ON-TARGETplus siRNAs with or without VX-809 treatment. Measured surface CFTR fluorescence with a BD Accuri flow cytometer with Intellicyt HTFC. The grayed out region represents VX-809s average surface fluorescence. VX-809 + siRNA significance is shown from VX-809 negative control. Data are shown as mean ± SEM (3−4 replicates). One-way ANOVA with multiple comparison for significant changes from VX-809 neg. ctrl (0 nM) (red P-values). ***P ≤ 0.001; **P ≤ 0.01; *P ≤ 0.05.

데이터 출처 [ , , Mol Pharm, 2018, 15(3):759-767 ]

Sellecks VX-809 (Lumacaftor) 인용됨 240 출판물

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In silico, in vitro and ex vivo characterization of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator pathogenic variants localized in the fourth intracellular loop and their rescue by modulators [ Br J Pharmacol, 2025, 10.1111/bph.70176] PubMed: 40831301
Global functional genomics reveals GRK5 as a cystic fibrosis therapeutic target synergistic with current modulators [ iScience, 2025, 28(3):111942] PubMed: 40040803
Human Induced Lung Organoids: A Promising Tool for Cystic Fibrosis Drug Screening [ Int J Mol Sci, 2025, 26(2)437] PubMed: 39859153
Nasal cells as a bronchial cell surrogate for pre-clinical assessment of drug response in cystic fibrosis [ Front Pharmacol, 2025, 16:1651122] PubMed: 40978488
Inhibitors of the ubiquitin‑proteasome system rescue cellular levels and ion transport function of pathogenic pendrin (SLC26A4) protein variants [ Int J Mol Med, 2025, 55(5)69] PubMed: 40052591
The Inhibition of the Membrane-Bound Transcription Factor Site-1 Protease (MBTP1) Alleviates the p.Phe508del-Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR) Defects in Cystic Fibrosis Cells [ Cells, 2024, 13(2)185] PubMed: 38247876
Comprehensive Assessment of CFTR Modulators' Therapeutic Efficiency for N1303K Variant [ Int J Mol Sci, 2024, 25(5)2770] PubMed: 38474016
Estimation of Chloride Channel Residual Function and Assessment of Targeted Drugs Efficiency in the Presence of a Complex Allele [L467F;F508del] in the CFTR Gene [ Int J Mol Sci, 2024, 25(19)10424] PubMed: 39408749
The F508del-CFTR trafficking correctors elexacaftor and tezacaftor are CFTR-independent Ca2+-mobilizing agonists normalizing abnormal Ca2+ levels in human airway epithelial cells [ Respir Res, 2024, 25(1):436] PubMed: 39702307

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