A-769662

A-769662는 부분적으로 정제된 쥐 간 AMPK를 EC50 0.8 μM으로 자극합니다. 이 화합물은 다양한 조직과 종에서 정제된 AMPK를 용량 반응 방식으로 활성화하며, 관찰된 EC50 값에 미미한 변화가 있습니다. 쥐 심장, 쥐 근육 또는 인간 배아 신장 세포(HEK)에서 부분적으로 정제된 AMPK 추출물을 사용하여 이 화학 물질에 대해 결정된 EC50 값은 각각 2.2 mM, 1.9 mM 또는 1.1 mM입니다. 쥐의 일차 간세포를 이 화합물로 4시간 처리하면 ACC 인산화가 용량 의존적으로 증가하며, 이는 3.2 μM의 IC50으로 지방산 합성 억제와 관련이 있습니다. 또한 마우스 간세포에서 지방산 합성을 3.6 μM의 IC50으로 억제합니다 [1] 이 화합물은 AMP의 효과와 유사하게 AMPK를 알로스테릭하게 활성화하고 Thr-172의 AMPK 탈인산화를 억제하여 활성화합니다. [2] 이 화합물은 AMPK-독립적인 메커니즘으로 프로테아솜 기능을 억제합니다. 이 화학 물질은 정제된 26S 프로테아솜의 시험관 내 활동에는 영향을 미치지만, 정제된 20S 프로테아솜의 시험관 내 활동에는 영향을 미치지 않습니다. MEF 세포에 독성 효과를 나타냅니다. [3] 최근 연구에 따르면 이 화합물은 세포 증식 및 DNA 합성을 억제했습니다. [4]

정상 Sprague Dawley 쥐에게 A-769662를 단기적으로 처리하면 간 말로닐 CoA 수치와 호흡 교환율(VCO2/VO2)이 감소하여 전신 지방산 산화율이 증가함을 나타냅니다. ob/ob 마우스를 이 화합물 30 mg/kg b.i.d.로 처리하면 PEPCK, G6Pase 및 FAS의 간 발현이 감소하고, 혈장 포도당이 40% 감소하며, 체중 증가가 감소하고 혈장 및 간 트리글리세리드 수치가 유의하게 감소합니다. [1]

• 96웰 AMPK 분석

  AMPK 활성은 이전에 설명된 프로토콜(Anderson et al., 2004)에 따라 SAMS 펩타이드 기질(표준 분석에서는 20 μM, 가산성 분석에서는 100 μM)의 인산화를 모니터링하여 측정합니다. A-769662 유도 AMPK 활성화가 가역적으로 발생하는지 확인하기 위해 AMP 또는 이 화합물을 쥐 간 AMPK와 표준 분석 농도의 20배로 10분 동안 사전 배양한 후 희석하고 AMPK 활성을 측정합니다.

  [1]

• 세포주

  MEF cells

• 농도

  300 μM

• 배양 시간

  24 hours

• 방법

  Cell viability of MEF cells treated or not with A-769662 is performed as follows: cells are harvested by trypsinization and incubated with 0.5 mg/mL RNase and 50 μg/mL propidium iodine at room temperature in the dark; cell viability is analyzed by flow cytometry using a FACScanto flow cytometer, using an excitation laser at 488 nm and a propidium iodine fluorescence detection at 600 nm. To determine the proportion of cells in each phase of the cell cycle, cells are harvested by trypsinization, collected by centrifugation, washed in PBS and fixed overnight in 80% ethanol at -20 °C. Subsequently, these fixed cells are centrifuged to remove the fixative and incubated for 20 minutes in the dark at room temperature in PBS containing 0.5 mg/mL RNase and 50 μg/mL propidium iodine. Flow cytometry analysis is performed as above. The proportion of cells in G1, S, and G2 is determined using the MODFIT program. Cell culture pictures are taken at the indicated times using a camera coupled to an inverted microscope with a 20 × objective.

• 동물 모델

  Sprague Dawley rats

• 용량

  30 mg/kg

• 투여

  Administered via i.p.