SB203580 (Adezmapimod)

Adezmapimod (SB203580)는 IL-2 유도된 원시 인간 T 세포, 쥐 CT6 T 세포 또는 BAF F7 B 세포의 증식을 IC50 3-5 μm로 억제합니다. 또한 IL-2 유도된 p70S6 키나제 활성화를 억제하지만, 필요한 농도는 IC50이 10 μm 이상으로 약간 더 높습니다. 이 화합물은 3-10 μm 범위의 IC50으로 PDK1의 활성을 용량 의존적으로 억제합니다. [1] 이는 MAPKAPK2의 p38-MAPK 자극을 약 0.07 μM의 IC50으로 억제하는 반면, 총 SAPK/JNK 활성은 3-10 μM의 IC50으로 억제됩니다. 고농도에서는 ERK 경로를 활성화하여 NF-κB 전사 활성을 증가시킵니다. [2] 또한 인간 간세포암종(HCC) 세포에서 자가포식을 유도합니다. [3]

Adezmapimod (SB203580)는 생체 내 모델에서 돼지 심근을 허혈성 손상으로부터 보호합니다. [4]또한 전신 홍반성 루푸스(SLE) MRL/lpr 쥐 모델에서 질병을 예방하고 치료하는 데 효과적입니다. [5]

• 세포 수용체 키나제 인산화 분석

  양 항-PKBα 4 μg을 25 μL의 단백질 G-세파로스에 밤새 (또는 1.5시간) 고정시키고 완충액 A (50 mm Tris, pH 7.5, 1 mm EDTA, 1 mm EGTA, 0.5 mm Na₃VO₄, 0.1% β-메르캅토에탄올, 1% Triton X-100, 50 mm 불화나트륨, 5 mm 피로인산나트륨, 0.1 mm 페닐메틸설포닐 플루오라이드, 1 μg/mL 펩스타틴, 류펩틴, 및 1 μm 미세시스틴)로 세척합니다. 고정된 항-PKB는 0.5 mL의 용해물 (5 × 10⁶ 세포에서 얻음)과 1.5시간 동안 배양하고 0.5 m NaCl이 보충된 0.5 mL의 완충액 A에서 세 번, 0.5 mL의 완충액 B (50 mm Tris-HCl, pH 7.5, 0.03% (w/v) Brij-35, 0.1 mm EGTA, 및 0.1% β-메르캅토에탄올)에서 두 번, 그리고 100 μl의 분석 희석 완충액으로 두 번 세척합니다. 5배 분석 희석 완충액은 100 mm MOPS, pH 7.2, 125 mm β-글리세로포스페이트, 25 mm EGTA, 5 mm 정바나듐산나트륨, 5 mm DTT입니다. PKB 효소 면역 복합체에 10 μL의 분석 희석 완충액, 40 μm 단백질 키나제 A 억제제 펩타이드, 100 μm PKB 특이적 기질 펩타이드, 및 10 μCi의 [γ-³²P]ATP를 추가하며, 모두 분석 희석 완충액으로 만듭니다. 반응은 실온에서 20분 동안 흔들면서 배양한 다음, 샘플을 짧게 원심분리하고 40 μL의 반응액을 다른 튜브로 옮겨 20 μL의 40% 트리클로로아세트산을 추가하여 반응을 중지시킵니다. 이를 혼합하고 실온에서 5분 동안 배양한 다음, 40 μL를 P81 포스포셀룰로스 종이로 옮겨 30초 동안 결합시킵니다. P81 조각은 0.75% 인산으로 세 번, 그리고 실온에서 아세톤으로 세척합니다. 그런 다음 섬광 계측을 통해 γ-³²P 통합을 측정합니다.

• 세포주

  CT6 cell , BA/F3 F7 cell

• 농도

  0–30 μM

• 배양 시간

  1 hour

• 방법

  CT6 cell and BA/F3 F7 cell are rested by washing three times in RPMI and culturing overnight in RPMI, 5% fetal calf serum in the absence of growth factor, antibiotics, or β-mercaptoethanol supplements. 2–5 × 10⁶ rested CT6 cells are resuspended in 2 mL of RPMI, 5% fetal calf serum and preincubated with Adezmapimod (SB203580) or vehicle control as indicated in figure legends. Cells are then stimulated with 20 ng/ml recombinant human IL-2 for 5 minutes at 37  °C and pelleted in a minifuge for 30 seconds, medium is aspirated, and the pellet is lysed in the appropriate buffer. BA/F3 cells stably expressing deletion mutants of IL-2 receptor β chain are maintained in glutamine containing RPMI further supplemented with 5% fetal calf serum and 0.2 μg/mL G418. The cells are then washed extensively, rested overnight, and washed again before activating with IL-2; such cell preparations are >90% T cells. Cellular proliferation assays are performed by measurement of [³H]thymidine incorporation.

• 동물 모델

  Systemic lupus erythematosus (SLE) are established in female MRL/lpr mice and female C57BL/6 mice

• 용량

  0.1 M/day

• 투여

  Orally administered