Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml은 약간 용해되거나 불용해됨을 의미합니다. * Selleck은 모든 화합물의 용해도를 자체적으로 테스트하며, 실제 용해도는 게시된 값과 약간 다를 수 있습니다. 이는 정상적인 현상이며, 약간의 배치 간 변동으로 인해 발생합니다. * 실온 배송 (안정성 테스트 결과 이 제품은 냉각 조치 없이 배송될 수 있음을 보여줍니다.)
원액 준비
생물학적 활성
설명
Apremilast (CC-10004)는 IC50이 각각 74 nM 및 77 nM인 강력하고 경구 활성 PDE4 및 TNF-α 억제제입니다.
표적
PDE4
TNF-α
74 nM
77 nM
시험관 내(In vitro)
Apremilast는 다른 PDE 계열의 cAMP 또는 cGMP 가수분해 효소와 비교하여 PDE4 억제에 더 강력합니다. 이 화합물은 다양한 세포 유형에서 광범위한 항염증 활성 패턴을 나타내며, TNF-α, IL-12 및 IL-23 생성뿐만 아니라 NK 세포 및 각질형성세포 반응을 억제합니다. zymosan으로 유도된 PMN의 IL-8 생성을 94 nM의 IC50으로 억제하는 것으로 밝혀졌습니다. 이 화학물질은 fMLF로 유도된 PMN CD18 및 CD11b 발현을 각각 390 nM 및 74 nM의 IC50으로 억제하고, fMLF로 유도된 PMN의 HUVEC에 대한 부착을 150 nM의 IC50으로 억제합니다. 이는 세포내 ATP 수준으로 측정한 각질형성세포의 생존력에는 영향을 미치지 않으면서 각질형성세포 TNF-α 생성을 억제합니다. .
생체 내(In Vivo)
Apremilast는 인간 마이크로솜 존재하에 안정합니다(t1/2 > 60분). 인간 혈장에서 90%가 단백질에 결합합니다. 암컷 쥐에 이 화합물을 경구 및 정맥 투여한 결과, 낮은 청소율, 적당한 분포량 및 64%의 경구 생체이용률을 가진 우수한 약동학을 보였습니다. 쥐의 LPS 유도 TNF-α 억제 모델에서 이 화합물의 생체 내 TNF-α 억제 능력을 조사한 결과, ED50은 0.03 mg/kg로 결정되었습니다. 쥐의 또 다른 LPS 유도 호중구증 모델에서 이 화합물은 0.3 mg/kg에서 0.9 mg/kg 범위의 ED50을 나타냈습니다.
세포(1×109)를 PBS로 세척하고 차가운 균질화 완충액(20 mM Tris-HCl, pH 7.1, 3 mM 2-메르캅토에탄올, 1 mM MgCl2, 0.1 mM EGTA, 1 μM PMSF, 1 μg/mL 류펩틴)에 용해시킵니다. Dounce 균질화기에서 균질화한 후 상층액을 원심분리하여 수집하고 균질화 완충액으로 평형화된 Sephacryl S-200 컬럼에 로딩합니다. PDE는 균질화 완충액으로 용출되고 롤리프람 민감성 분획은 합쳐져 분취액으로 보관됩니다. 효소 활성은 50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 5 mM MgCl2 및 1 μM cAMP(이 중 1%는 3H cAMP)에서 다양한 농도의 억제제 존재 하에 분석됩니다. 사용된 추출물의 양은 반응이 선형 범위 내에 있고 전체 기질의 15% 미만을 소비하도록 미리 결정됩니다. 반응은 30 °C에서 30분 동안 수행되고 2분 동안 끓여서 중단됩니다. 그런 다음 샘플을 냉각하고 뱀독(1mg/mL)으로 30 °C에서 15분 동안 처리합니다. 사용되지 않은 기질은 200 μL AG1-X8 수지와 함께 15분 동안 배양하여 제거합니다. 그런 다음 샘플을 3000 rpm으로 5분 동안 원심분리하고 수성상 50 μL를 채취하여 계수합니다. 각 데이터 포인트는 활성이 대조군의 백분율로 표현되도록 이중으로 수행됩니다. IC50은 세 가지 독립적인 실험에서 도출된 용량 반응 곡선에서 결정됩니다.
For proliferation studies, human neonatal foreskin epidermal keratinocytes (HEKn cells) are plated at 3000 cells per well in 96-well flat bottom tissue culture plates for 2 days. HEKn cells are treated with apremilast or 0.1% DMSO as the vehicle control for 1 h before ultraviolet B (UVB) irradiation with 50 mJ/cm2 in a UV Stratalinker 2400, calibrated with 312 nm UVB bulbs. Media and this compound are replaced, and cells are incubated for 18 h. Lysates are transferred to plates and shaken for 2 min before chemiluminescence is read on a TopCount NXT Luminescence Counter.
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Targeting PDE4 as a promising therapeutic strategy in chronic ulcerative colitis through modulating mucosal homeostasis
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