(R)-(-)-Gossypol (AT-101) acetic acid

카탈로그 번호S2812 배치:S281202

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기술 자료

화학식

C30H30O8.C2H4O2
분자량 578.61 CAS 번호 866541-93-7
용해도 (25°C)* 시험관 내(In vitro) DMSO 100 mg/mL (172.82 mM)
Ethanol 100 mg/mL (172.82 mM)
Water Insoluble
생체 내(In Vivo) (개별적으로 순서대로 용매를 제품에 첨가하십시오.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
2%DMSO 30%PEG300 2%Tween80 66%ddH2O

Selleck 연구소에서 검증했습니다. 이 제형에 대한 조정이 필요한 경우 맞춤형 테스트를 위해 당사 영업팀에 문의하십시오.

 4.000mg/ml (6.91mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 20 μL of 200 mg/ml clarified DMSO stock solution to 300 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 20 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 660 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml은 약간 용해되거나 불용해됨을 의미합니다.
* Selleck은 모든 화합물의 용해도를 자체적으로 테스트하며, 실제 용해도는 게시된 값과 약간 다를 수 있습니다. 이는 정상적인 현상이며, 약간의 배치 간 변동으로 인해 발생합니다.
* 실온 배송 (안정성 테스트 결과 이 제품은 냉각 조치 없이 배송될 수 있음을 보여줍니다.)

원액 준비

생물학적 활성

설명 (R)-(-)-고시폴(AT-101) 아세트산은 고시폴 아세트산의 R-(-) 거울상 이성질체로, 세포가 없는 분석에서 Bcl-2, Bcl-xL 및 Mcl-1과 0.32 μM, 0.48 μM 및 0.18 μM의 Ki로 결합하며; BIR3 도메인과 BID를 억제하지 않습니다. AT-101은 동시에 apoptosis와 세포 보호성 Autophagy 유형을 유발합니다. 2상.
표적
Mcl-1
(Cell-free assay)		 Bcl-2
(Cell-free assay)		 Bcl-xL
(Cell-free assay)
0.18 μM(Ki) 0.32 μM(Ki) 0.48 μM(Ki)
시험관 내(In vitro) AT-101은 1.2 μM에서 7.4 μM 범위의 IC50을 가진 다양한 림프증식성 악성 종양 패널을 억제합니다. AT-101 (10 μM)은 미만성 거대 B세포 및 외투세포 림프종 세포주에서 농도 및 시간 의존적으로 Δψm을 파괴합니다. 카르필조밉(6 nM 또는 10 nM)과 병용한 AT-101 (1 μM 또는 2 μM)은 HBL-2 및 그란타 세포주에서 apoptosis를 유도합니다. AT-101 (20 μM 24시간)은 부유 배양 및 기질 공동 배양 모두에서 CLL 림프구의 중간 72% apoptosis 및 Mcl-1의 하향 조절을 유발합니다. 기질 세포는 검출 불가능한 수준의 항 apoptosis 단백질을 발현하지만, 활성화된 ERK 및 AKT 단백질은 높은 수준으로 발현하며 AT-101과 함께 apoptosis는 낮거나 없습니다. AT-101은 Jurkat T 및 U937 세포에서 각각 1.9 mM 및 2.4 mM의 ED50 값으로 시간 및 용량 의존적으로 apoptosis를 유도합니다. 방사선(32 Gy)과 병용한 AT-101 (10 μM)은 방사선 단독보다 더 많은 apoptosis를 유도하며 단일 제제 치료로 인한 효과의 합을 초과합니다. AT-101은 용량 및 시간 의존적으로 SAPK/JNK를 활성화합니다. AT-101 (10 µM)은 VCaP 세포에서 caspase-9, -3, -7의 활성화를 통해 apoptosis를 유도합니다. AT-101 (10 µM)은 VCaP 세포에서 Bcl-2 및 Mcl-1 발현을 감소시킵니다. AT-101 (< 20 μM)은 골수 미세 환경에서 기질 세포가 제공하는 자극적인 성장 효과에도 불구하고 다발성 골수종 세포의 성장을 억제할 수 있습니다. AT-101 (10 μM)은 카스파제 3, 카스파제 9 및 PARP의 활성화를 통해 다발성 골수종 세포에서 apoptosis를 유도합니다. AT-101 (10 μM)은 Bax/Bcl-2 비율 및 미토콘드리아 막 전위의 파괴를 통해 다발성 골수종 세포에서 apoptosis를 촉진합니다.
생체 내(In Vivo) AT-101은 RL-DLBCL 이종이식편을 가진 SCID 베이지 마우스에서 35 mg/kg 그룹의 경우 0.49 μM, 200 mg/kg 그룹의 경우 0.39 μM의 평균 농도로 혈장에서 여전히 검출됩니다. AT-101의 최고 혈장 농도는 두 용량 수준 모두에서 약물 투여 30분 후에 관찰되었으며, 200 mg/kg 그룹은 35 mg/kg 그룹보다 거의 4배 높은 혈장 평균 농도(각각 7.88 μM 및 27.78 μM)를 SCID 베이지 마우스에서 보였습니다. AT-101 (25 mg/kg ~ 100 mg/kg, 경구 투여)은 SCID 베이지 마우스에서 전처리 체중의 10% 이상에 해당하는 체중 감소 및 사망의 조기 발병을 무기한으로 유발합니다. AT-101 (35 mg/kg, 10일 동안 매일 경구 투여)과 복강내 사이클로포스파미드(Cy) 및 복강내 리툭시맙(R)은 다른 치료 그룹에 비해 유의미한 종양 부피 제어를 보였습니다. 온전한 마우스에서 단일 제제로서 AT-101 (15 mg/kg, p.o., 주 5일)은 2주에서 6주에 걸쳐 미처리 종양에 비해 VCaP 종양 성장의 발달을 유의미하게 감소시킵니다. 수술적 거세와 병용한 AT-101은 마우스에서 거세 단독 또는 AT-101 단독 그룹에 비해 안드로겐 비의존성 VCaP 종양 성장의 발병을 지연시킵니다.

프로토콜 (참조)

키나아제 분석:[1]
  • 형광 편광 기반 결합 분석

    경쟁적 결합 실험을 위해 Bcl-2 단백질(40 nM)과 FAM-Bid 펩타이드(2.5 nM)를 분석 완충액(100 mM 인산칼륨, pH 7.5; 100 μg/mL 소 감마 글로불린; 0.02% 아지드화나트륨)에 미리 배양합니다. Dynex 96-웰, 검은색, 둥근 바닥 플레이트에 있는 Bcl-2/FAM-Bid 용액에 DMSO에 있는 AT101 용액 5 μL를 첨가하여 최종 부피가 125 μL가 되도록 합니다. 각 실험에 대해 Bcl-2 및 Flu-Bid 펩타이드(0% 억제에 해당)를 포함하는 대조군과 FAM-Bid만 포함하는 다른 대조군을 각 분석 플레이트에 포함합니다. 4시간 배양 후, 울트라 플레이트 리더를 사용하여 485 nm 여기 파장 및 530 nm 방출 파장에서 밀리편광 단위(mP)로 편광 값을 측정했습니다. 결합된 펩타이드의 50%가 치환되는 억제제 농도인 IC50은 GraphPad Prizm 4 소프트웨어를 사용하여 수행된 비선형 최소 제곱 분석 및 곡선 피팅을 사용하여 플롯에서 결정됩니다. 비표지 Bid BH3 펩타이드는 양성 대조군으로 사용됩니다. Bcl-xL 단백질의 PF는 FAM-Bim 대신 6-카르복시플루오레세인 석신이미딜 에스테르(FAM-Bak)로 표지된 Bak BH3 펩타이드를 사용하여 신호를 최대화합니다. FAM-Bak는 Bcl-xL 단백질에 대해 6 nM의 Kd를 갖는 것으로 결정되었습니다. Bcl-xL에 대한 경쟁적 결합 분석은 다음 예외를 제외하고 Bcl-2에 대한 분석과 동일합니다. 50 mM Tris-Bis, pH 7.4 및 0.01% 소 감마 글로불린으로 구성된 다음 분석 완충액에 30 nM의 Bcl-xL 단백질과 2.5 nM의 FAM-Bak 펩타이드. Mcl-1 단백질의 PF는 FAM-Bid 펩타이드와 인간 Mcl-1 단백질을 사용합니다. FAM-Bid 펩타이드는 인간 Mcl-1 단백질에 1.71 nM의 Kd로 결합하는 것으로 결정되었습니다. Mcl-1에 대한 경쟁적 결합 분석은 다음 예외를 제외하고 Bcl-2에 대한 분석과 동일한 방식으로 수행됩니다. 25 mM Tris, pH 8.0; 150 mM NaCl 및 0.05% 플루로닉 산으로 구성된 다음 분석 완충액에 5 nM Mcl-1 및 1 nM Flu-Bid 펩타이드.
세포 분석:[2]
  • 세포주

    RL, H9, SKI, HBL-2, Granta and JJN-3 cell lines

  • 농도

    ~10 μM

  • 배양 시간

    72 hours

  • 방법

    Cells are counted and resuspended at an approximate concentration of 3×105 cells/well in a 24-well plate. AT-101 is diluted in DMSO that is maintained at a final concentration of less than 0.5%. Concentrations of AT-101 from 1 nM to 10 μM are used in most experiments. Following incubation at 37 ℃ in a 5% CO2 humidified incubator, 100 μL from each well is transferred to a 96-well opaque-walled plate; cell-Titer-Glo Reagent is added in a 1:1 ratio. Contents are mixed for 2 minutes on an orbital shaker to induce cell lysis. The plates are allowed to incubate at room temperature for 10 minutes before recording luminescence with a Synergy HT Multi-Detection Microplate Reader. In the schedule dependency experiments, serial dilutions of each drug are prepared in ratios relative to their IC50. Cells are preincubated with AT-101 for up to 72 hours, while 4-HC is added for a 24-hour period, being added at time 0, 24 hours, and 48 hours from the start of incubation. Each experiment is performed in triplicate and repeated at least twice.
동물 연구:[2]
  • 동물 모델

    SCID beige mice bearing RL-DLBCL xenograft

  • 용량

    100 mg/kg

  • 투여

    Oral gavage

참조

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17034116/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18292288/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18836097/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19852810/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18084610/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18346839/

고객 제품 검증

<p>(B and C) assessment of antimigration capacity in each group by transwell migration assay. Abbreviations: CDDP, cisplatin; DMSO, dimethyl sulfoxide.</p>

, , Drug Des Devel Ther, 2014, 8:2517-29.

The cellular autophagy induced by the concentration of AT101 (5 μM) and APE1 siRNA was examined by confocal microscopy with the application of Cyto-IDr autophagy detection kit.

데이터 출처 [ , , Oncotarget, 2016, 7(23):34430-41 ]

Effect of AT-101 (AT) on MM cell lines survival. The survival of human (MM-B1, H-Meso-1, and MM-F1) and mouse (#40a) MM cell lines were assessed by the SRB assay after 24, 48, and 72 h of treatment with DMSO or AT-101. The percentage of surviving cells treated with the compound was calculated by normalizing the OD value to that of the control cultures (DMSO). The results are expressed as the means ± SD of three independent experiments performed in triplicate (xp ≤ 0.05, ∗p ≤ 0.01, #p ≤ 0.001 compared with the cultures treated with DMSO).

데이터 출처 [ , , Front Pharmacol, 2018, 9:1269 ]

AT-101 enhances the antimigration ability of CDDP in A549 cells exposed to A549 cell-conditioned medium. Notes: (A) The cell migration assay was conducted using Transwell® plates. A549 cells were treated with the control vehicle, 5 μM CDDP, 5 μM AT-101, or 5 μM AT-101 plus 5 μM CDDP and the supernatants were collected as the tumor conditioned medium. A549 cells were suspended in serum-free Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium. A549 cells were seeded to the upper chambers, and the lower chambers were filled with RPMI 1640 medium containing 10% fetal bovine serum or tumor conditioned medium. After incubation for 18 hours at 37°C, cells were fixed, stained, and analyzed under inverted light microscopy (40× magnification). The number of migrated cells was counted using an inverted microscope. (B) Bar graph showing the migrating cell numbers of different treatment groups. Data are presented as the mean ± standard deviation of at least three independent experiments. **P<0.01 by one-way analysis of variance. Abbreviation: CDDP, cisplatin.

데이터 출처 [ , , Drug Des Devel Ther, 2015, 9:2887-910 ]

Sellecks (R)-(-)-Gossypol (AT-101) acetic acid 인용됨 20 출판물

Follicle stimulating hormone controls granulosa cell glutamine synthesis to regulate ovulation [ Protein Cell, 2024, pwad065] PubMed: 38167949
Pharmacological Targeting of Bcl-2 Induces Caspase 3-Mediated Cleavage of HDAC6 and Regulates the Autophagy Process in Colorectal Cancer [ Int J Mol Sci, 2023, 24(7)6662] PubMed: 37047634
Exploiting ulnerabilities induced b recurrent mutations in chondrosarcoma and giant cell tumour of bone: therapeutic targeting of the altered epigenome and be [ Leiden University The Netherlands, 2023, ] PubMed: None
Integrative analysis of drug response and clinical outcome in acute myeloid leukemia [ Cancer Cell, 2022, S1535-6108(22)00312-9] PubMed: 35868306
Lactate Dehydrogenase B Is Required for Pancreatic Cancer Cell Immortalization Through Activation of Telomerase Activity [ Front Oncol, 2022, 12:821620] PubMed: 35669414
Gossypol Acetic Acid Attenuates Cardiac Ischemia/Reperfusion Injury in Rats via an Antiferroptotic Mechanism [ Biomolecules, 2021, 11(11)1667] PubMed: 34827665
AT101 [(-)-Gossypol] Selectively Inhibits MCL1 and Sensitizes Carcinoma to BH3 Mimetics by Inducing and Stabilizing NOXA [ Cancers (Basel), 2020, 12(8):E2298] PubMed: 32824203
Using CETSA assay and a mathematical model to reveal dual Bcl-2/Mcl-1 inhibition and on-target mechanism for ABT-199 and S1. [ Eur J Pharm Sci, 2020, 142:105105] PubMed: 31669390
Comparison of putative BH3 mimetics AT-101, HA14-1, sabutoclax and TW-37 with ABT-737 in platelets. [ Platelets, 2020, 10.1080/09537104.2020.1724276] PubMed: 32079453
Effect of Exosomal APE1 on Sensitivity of NSCLC A549 Cells to Cisplatin [ Cancer Research on Prevention and Treatment, 2020, (7): 492-497] PubMed: None

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