AT7519 HCl

카탈로그 번호S7808 배치:S780801

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기술 자료

화학식

C16H18Cl3N5O2
분자량 418.71 CAS 번호 902135-91-5
용해도 (25°C)* 시험관 내(In vitro) DMSO 52 mg/mL (124.19 mM)
Water 43 mg/mL (102.69 mM)
Ethanol 28 mg/mL (66.87 mM)
생체 내(In Vivo) (개별적으로 순서대로 용매를 제품에 첨가하십시오.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
Saline

Selleck 연구소에서 검증했습니다. 이 제형에 대한 조정이 필요한 경우 맞춤형 테스트를 위해 당사 영업팀에 문의하십시오.

 30.000mg/ml (71.65mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 30 mg of this product to 1 ml of physiological saline (0.9% NaCL solution), mix evenly to make it clear, The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml은 약간 용해되거나 불용해됨을 의미합니다.
* Selleck은 모든 화합물의 용해도를 자체적으로 테스트하며, 실제 용해도는 게시된 값과 약간 다를 수 있습니다. 이는 정상적인 현상이며, 약간의 배치 간 변동으로 인해 발생합니다.
* 실온 배송 (안정성 테스트 결과 이 제품은 냉각 조치 없이 배송될 수 있음을 보여줍니다.)

원액 준비

생물학적 활성

설명 AT7519 HCl은 세포 자유 분석에서 10-210 nM의 IC50을 갖는 CDK1, 2, 4, 6 및 9에 대한 다중 CDK 억제제입니다. CDK3에는 덜 강력하고 CDK7에는 거의 활성이 없습니다. 2상.
표적
CDK9/CyclinT
(Cell-free assay)		 CDK5/p35
(Cell-free assay)		 CDK2/CyclinA
(Cell-free assay)		 GSK-3β
(Cell-free assay)		 CDK4/CyclinD1
(Cell-free assay)		 더 보기
<10 nM 13 nM 47 nM 89 nM 100 nM
시험관 내(In vitro) AT7519는 CDK1에 대해 38 nM의 Ki 값을 갖는 ATP 경쟁적 CDK 억제제입니다. AT7519는 GSK3β (IC50 = 89 nM)를 제외한 모든 비-CDK 키나아제에 대해 비활성입니다. AT7519는 MCF-7의 40 nM에서 SW620의 940 nM에 이르는 IC50 값을 가진 다양한 인간 종양 세포주에서 강력한 항증식 활성을 보이며, 이는 CDK1 및 CDK2 억제와 일치합니다. AT7519는 48시간에 0.5~2 μM 범위의 IC50 값을 가진 다발성 골수종(MM) 세포주에서 용량 의존적 세포 독성을 유도하며, 가장 민감한 세포주는 MM.1S (0.5 μM) 및 U266 (0.5 μM)이고 가장 내성적인 세포주는 MM.1R (>2 μM)입니다. AT7519는 말초 혈액 단핵 세포(PBMNC)에서 세포 독성을 유도하지 않습니다. AT7519는 IL6 및 IGF-1에 의해 부여되는 증식 이점과 골수 기질 세포(BMSCs)의 보호 효과를 부분적으로 극복합니다. AT7519는 세린 2 및 세린 5 부위에서 RNA pol II CTD의 빠른 탈인산화를 유도하고 전사 억제를 초래하여 AT7519 유도 MM 세포의 세포 독성에 부분적으로 기여합니다. AT7519는 GSK-3β 인산화를 하향 조절하여 GSK-3β 활성화를 유도하며, 이는 또한 전사 억제와 무관하게 AT7519 유도 세포 사멸에 기여합니다.
생체 내(In Vivo) AT7519 (9.1 mg/kg)를 하루 두 번 투여하면 HCT116 및 HT29 대장암 이종이식 모델에서 초기 및 진행성 s.c. 종양 모두의 퇴행을 유발합니다. AT7519 치료 (15 mg/kg)는 인간 MM 이종이식 마우스 모델에서 종양 성장을 억제하고 마우스의 중앙 전체 생존 기간을 연장하며, 이는 증가된 카스파제 3 활성화와 관련이 있습니다.

프로토콜 (참조)

키나아제 분석:[1]
  • 시험관 내 키나아제 분석

    CDK1, CDK2 및 GSK3-β에 대한 키나아제 분석은 모두 방사성 필터 결합 형식으로 수행됩니다. CDK5에 대한 분석은 DELFIA 형식이며, CDK 4 및 6에 대한 분석은 ELISA 형식입니다. CDK1 및 2의 경우, 해당 CDK와 0.12 μg/mL 히스톤 H1은 20 mM MOPS, pH 7.2, 25 mM β-글리세로인산염, 5 mM EDTA, 15 mM MgCl2, 1 mM 오르토바나듐산나트륨, 1 mM DTT, 0.1 mg/mL BSA, 45 μM ATP (0.78 Ci/mmol) 및 다양한 농도의 AT7519와 함께 각각 2시간 또는 4시간 동안 배양됩니다. GSK3-β의 경우, 해당 효소와 5 μM 글리코겐 합성효소 펩타이드 2와 함께 10 mM MOPS pH 7.0, 0.1 mg/mL BSA, 0.001% Brij-35, 0.5% 글리세롤, 0.2 mM EDTA, 10 mM MgCl2, 0.01% β-메르캅토에탄올, 15 μM ATP (2.31 Ci/mmol) 및 다양한 농도의 AT7519가 3시간 동안 배양됩니다. 분석 반응은 과량의 오르토인산을 첨가하여 중단하고 Millipore MAPH 필터 플레이트를 사용하여 여과합니다. 플레이트를 세척한 후, 섬광제를 첨가하고 Packard TopCount에서 섬광 계수법으로 방사능을 측정합니다. CDK5의 경우, CDK5/p35와 1 μM의 비오틴화된 히스톤 H1 펩타이드(Biotin-PKTPKKAKKL)는 25 mM Tris-HCl, pH 7.5, 2.5 mM MgCl2, 0.025% Brij-35, 0.1 mg/mL BSA, 1 mM DTT, 15 μM ATP 및 다양한 농도의 AT7519와 함께 30분 동안 배양됩니다. 분석 반응은 EDTA를 사용하여 중단하고 Neutravidin 코팅 플레이트로 옮겨지며, 인산화된 펩타이드는 토끼 인산화-cdk1 기질 다클론 항체와 DELFIA 유로퓸 표지 항-토끼 IgG 이차 항체를 사용하여 λex=335nm, λem=620nm에서 시간 분해 형광을 통해 정량됩니다. CDK 4 및 6 분석의 경우, 플레이트는 GST-pRb769-921로 코팅되고 Superblock으로 차단됩니다. CDK4 또는 6은 15 mM MgCl2, 50 mM HEPES, pH 7.4, 1 mM DTT, 1 mM EGTA, pH 8.0, 0.02% Triton X-100, 2.5% DMSO 및 다양한 농도의 AT7519와 함께 배양됩니다. 반응은 ATP 첨가로 시작됩니다. 30분 후, 반응은 0.5 M EDTA pH 8.0 첨가로 중단됩니다. 플레이트를 세척한 후, 1시간 동안 Superblock에 희석된 1차 항체(anti-p-Rb Serine 780)와 함께 배양하고, 이어서 1시간 동안 2차 항체(알칼리 인산가수분해효소 연결 항-토끼)와 함께 배양합니다. 플레이트는 Attophos 시스템을 사용하여 개발되고, 형광은 Spectramax Gemini 플레이트 리더에서 여기 450 nm 및 방출 580 nm에서 판독됩니다. 모든 경우에, IC50 값은 GraphPad Prism 소프트웨어를 사용하여 반복 곡선에서 계산됩니다.
세포 분석:[2]
  • 세포주

    MM.1S, MM.1R, RPMI8226, U266, RPMI8266, RPMI-Dox40, OPM1 cells, primary MM cells and PBMNCs

  • 농도

    Dissolved in DMSO at a concentration of 10 mM, final concentrations 0.25-4 μM

  • 배양 시간

    24 or 48 hours

  • 방법

    Cells are incubated with different concentrations of AT7519 for 24 or 48 hours at 37°C. Cell viability is assessed by measuring 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5 diphenyl tetrasodium bromide (MTT) dye absorbance. DNA synthesis is measured by tritiated thymidine uptake (3H-TdR). Apoptosis is assessed by using Annexin V/PI staining. The percentage of cells undergoing apoptosis is defined as the sum of early apoptosis (Annexin V-positive cells) and late apoptosis (Annexin V-positive and PI-positive cells
동물 연구:[2]
  • 동물 모델

    Male SCID mice inoculated subcutaneously with MM.1S cells

  • 용량

    15 mg/kg/day

  • 투여

    Dosed i.p.

참조

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19174555/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20101221/

고객 제품 검증

(c) Effect of AT7519 treatment on RNA pol II occupancy at the PRCC gene. MM1.S cells were treated with either DMSO vehicle (blue) or 2 μM AT7519 (brown) for 6 h, followed by RNA pol II ChIP-seq analysis. Twenty-fold magnifications of the rpm/bp scale of these gene tracks are shown in the right panel to show the difference in reads for elongating RNA pol II. TR, RNA pol II traveling ratio.(d) Genome-wide binding average RNA pol II (ChIP-seq) on active promoters and gene bodies following treatment of MM1.S cells with DMSO vehicle (blue) or 2 μM of AT7519 (brown) for 6 h. Magnification of the rpm/bp scale at gene bodies is shown in the inset. The inset includes RNA polymerase II traveling ratio distributions (TR, mean) derived from MM1.S cells treated with DMSO (blue) or 2 μM AT7519 (red).(e) Chemical structures of the pan-CDK inhibitor AT7519 and its biotinylated counterpart bio-AT7519.(f) In vitro kinase assays with recombinant cyclin T-CDK9 complex in the presence of increasing concentrations of AT7519 or bio-AT7519. The derived IC50 values for each compound are shown.(g) Effect of AT7519 and bio-AT7519 on MM1.S cell proliferation. Cells were treated with varying concentrations of drug for 72 h as indicated. The derived EC50 values for each compound are shown.

데이터 출처 [ , , Nat Biotechnol, 2014, 32(1): 92-96. ]

(C) Western blot analyses following treatment with the indicated doses of cyclin-dependent kinase (CDK) inhibitors for apoptosis markers, poly(ADP-ribose) polymerase 1 (PARP-1), caspase 3, cleaved form of caspase 3 and β-actin.

데이터 출처 [ , , Int J Oncol, 2018, 53(2):703-712 ]

Sellecks AT7519 HCl 인용됨 12 출판물

Interleukin-15 enhanced the survival of human γδT cells by regulating the expression of Mcl-1 in neuroblastoma [ Cell Death Discov, 2022, 8(1):139] PubMed: 35351861
O-GlcNAc transferase maintains metabolic homeostasis in response to CDK9 inhibition [ Glycobiology, 2022, cwac038] PubMed: 35708495
Cdk2 suppresses IL-23 expression and the onset of severe acute pancreatitis [ Immun Inflamm Dis, 2022, 10(6):e631] PubMed: 35634959
High-content image-based analysis and proteomic profiling identifies Tau phosphorylation inhibitors in a human iPSC-derived glutamatergic neuronal model of tauopathy [ Sci Rep, 2021, 11(1):17029] PubMed: 34426604
The cyclin-dependent kinase inhibitor AT7519 augments cisplatin's efficacy in ovarian cancer via multiple oncogenic signaling pathways [ Fundam Clin Pharmacol, 2021, 10.1111/fcp.12709] PubMed: 34212421
Development of a miRNA-controlled dual-sensing system and its application for targeting miR-21 signaling in tumorigenesis [ Exp Mol Med, 2020, 10.1038/s12276-020-00537-z] PubMed: 33311703
Inhibition of Cyclin-dependent Kinase (CDK) Decreased Survival of NB4 Leukemic Cells: Proposing a p53-Independent Sensitivity of Leukemic Cells to Multi-CDKs Inhibitor AT7519 [ Iran J Pharm Res, 2020, 19(3):144-155] PubMed: 33680018
Fibroblast growth factor receptor influences primary cilium length through an interaction with intestinal cell kinase [ Proc Natl Acad Sci U S A, 2019, 116(10):4316-4325] PubMed: 30782830
CDK Blockade Using AT7519 Suppresses Acute Myeloid Leukemia Cell Survival through the Inhibition of Autophagy and Intensifies the Anti-leukemic Effect of Arsenic Trioxide [ Iran J Pharm Res, 2019, 18(Suppl1):119-131] PubMed: 32802093
Frequent Genetic Aberrations in the CDK4 Pathway in Acral Melanoma Indicate the Potential for CDK4/6 Inhibitors in Targeted Therapy [Kong Y Clin Cancer Res, 2018, 23(22):6946-6957] PubMed: 28830923

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