Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml은 약간 용해되거나 불용해됨을 의미합니다. * Selleck은 모든 화합물의 용해도를 자체적으로 테스트하며, 실제 용해도는 게시된 값과 약간 다를 수 있습니다. 이는 정상적인 현상이며, 약간의 배치 간 변동으로 인해 발생합니다. * 실온 배송 (안정성 테스트 결과 이 제품은 냉각 조치 없이 배송될 수 있음을 보여줍니다.)
원액 준비
생물학적 활성
설명
Zorifertinib (AZD3759)는 EGFR(WT), EGFR(L858R) 및 EGFR(exon 19Del)에 대해 각각 0.3 nM, 0.2 nM 및 0.2 nM의 IC50 값을 갖는 강력한 경구 활성, 중추신경계 침투성 EGFR 억제제입니다. 이 화합물은 1상에 있습니다.
표적
EGFR (L858R) (Cell-free assay)
EGFR (exon 19Del) (Cell-free assay)
EGFR (WT) (Cell-free assay)
0.2 nM
0.2 nM
0.3 nM
시험관 내(In vitro)
H3255(L858R) 세포에서 Zorifertinib (AZD3759)는 7.2 nM의 IC50으로 EGFR 인산화를 억제합니다. 이 화합물은 EGFR 돌연변이 유래 세포 PC-9 및 H3255의 pEGFR 경로 및 증식에 대해 각각 7.7 nM 및 7 nM의 IC50으로 억제 효과를 보였지만, H838 세포의 증식에 대해서는 유의미한 활성을 보이지 않았습니다.
생체 내(In Vivo)
Zorifertinib (AZD3759)는 개에서 우수한 경구 생체 이용률을 보이며 원숭이 뇌에 광범위하게 침투합니다. 뇌 전이 PC-9 (Exon19Del) 모델에서 이 화합물(15 mg/kg)은 유의미한 용량 의존적 항종양 효능을 유발합니다.
EGFR WT 및 돌연변이 효소에 대한 Zorifertinib (AZD3759)의 억제 효능은 제조사의 지침에 따라 CisBio 균질 시간 분해 형광 접근법(HTRF, Cat No. 62TK0PEJ)을 사용하여 평가됩니다. 이 분석에 사용된 최종 효소 농도는 EGFR 야생형, L858R 및 Exon19Del에 대해 각각 0.1 nM, 0.03 nM 및 0.026 nM이며, EGFR 효소의 Km 값에 해당하는 0.8 μM, 4 μM 및 25 μM ATP가 적절하게 적용됩니다. 간략하게, 3 μL의 ATP와 2 μM TK 바이오틴-펩타이드 기질은 384웰 Greiner 흰색 폴리스티렌 분석 플레이트에서 실온에서 연속 희석된 화합물의 존재 또는 부재 하에 배양됩니다. 반응은 기질 펩타이드를 인산화할 수 있는 3 μL 키나제의 첨가로 시작되며, 분석 완충액은 1 mM DTT, 5 mM MgCl2, 1 mM MnCl2 및 0.01% CHAPS를 포함합니다. 30분 배양 후, 반응은 검출 완충액에 희석된 250 nM Strep-XL665 및 TK Ab Europium Cryptate를 포함하는 6 μl 검출 시약 혼합물의 첨가로 중단됩니다. 플레이트는 1시간 동안 배양된 후, Perkin Elmer의 EnVision Multilabel Reader를 사용하여 표준 HTRF 설정으로 320 nm의 여기 파장에서 각각 615 nm 및 665 nm에서 형광이 측정됩니다. 계산된 665 nm/615 nm의 신호 비율은 키나제 활성에 비례합니다. 해당 키나제의 50% 억제를 유발하는 이 화합물의 농도(IC50)는 4가지 매개변수 로지스틱 피팅을 사용하여 계산됩니다.
PC-9 (exon 19Del), H3255 (L858R) and H838 (wt) cells
농도
~30 mM
배양 시간
72 h
방법
Zorifertinib (AZD3759) cell proliferation is determined by MTS methods. Briefly, cells are seeded in 96-well plates (at a density to allow for logarithmic growth during the 72-hour assay) and incubated overnight at 37 °C and 5% CO2. Cells are then exposed to concentrations of this compound ranging from 30 to 0.0003 mM for 72 hours. For the MTS endpoint, cell proliferation is measured by the CellTiter AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay reagent in accordance with the manufacturer’s protocol. Absorbance is measured with a Tecan Ultra instrument. Predose measurements are made, and concentration needed to reduce the growth of treated cells to half that of untreated cells (GI50) values are determined using absorbance readings.
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