KD025 (Belumosudil)

Belumosudil (KD025)은 인간 PBMC에서 IL-17 및 IL-21 분비를 하향 조절하고, CD4+ T 세포에서 STAT3 인산화, IRF4 및 RORγt 발현의 하향 조절을 유도합니다. [2]

또한 인간 말초혈액 단핵구에서 인산화된 STAT3 감소와 IRF4 및 BCL6의 단백질 발현 감소와 함께 IL-21, IL-17 및 IFNγ의 분비를 억제합니다. [3]

Belumosudil (KD025) (200 mg/kg, p.o.)은 MYPT1 인산화 정도로 측정했을 때 뇌와 심장에서 ROCK 활성을 억제합니다. 이는 동측 반구의 관류 결함 영역과 조직 손실을 유의하게 감소시킵니다. [1]

콜라겐 유도 관절염 (CIA) 마우스 모델에서 이 화합물 (200 mg/kg, i.p.)은 Th17 매개 경로를 표적으로 하여 콜라겐 유도 관절염의 진행을 하향 조절합니다. [2]

이는 (150 mg/kg, i.p. 또는 p.o.) 기관 시스템 cGVHD를 동반한 세기관지염 폐쇄증후군이 있는 완전 MHC 불일치 모델과 경미한 MHC 불일치 피부경화성 GVHD 모델에서 cGVHD를 효과적으로 개선합니다. [3]

• 재조합 ROCK1 및 ROCK2 분석

  Belumosudil (KD025) 화합물 희석 및 반응은 96웰 폴리스티렌 저결합 플레이트에서 수행됩니다. 여과는 친수성 인산-셀룰로스 양이온 교환막을 포함하는 96웰 필터 플레이트에서 이루어집니다. 재조합 ROCK1 및 ROCK2의 효소 활성은 50 μL의 반응 혼합물(어세이 버퍼 포함: 50 mmol/L Tris, pH 7.5, 0.1 mmol/L 에틸렌글리콜테트라아세트산, 10 mmol/L 마그네슘 아세트산 및 1 mmol/L 디티오트레이톨)에서 방사선 측정으로 측정됩니다. 반응은 실온에서 45분 동안 배양하고 25 μL의 3% 인산으로 중단됩니다. 인산화된 긴 S6 펩타이드는 소광된 반응 내용을 P30 인산셀룰로스 필터 플레이트를 통해 여과하여 미반응 [[gamma]-³³P]ATP로부터 분리됩니다. 각 필터는 75 μL의 75 mmol/L 인산으로 세 번, 그리고 30 μL의 100% 메탄올로 한 번 세척됩니다. 필터 플레이트는 건조시킨 후 각 웰에 30 μL의 OptiPhase 'SuperMix' 섬광액을 첨가합니다. ³³인은 I450 MicroBeta 섬광 계수기로 정량하고 배경 샘플과 관련된 방사능을 빼서 보정합니다. 데이터는 ((U - B)/(C - B)) × 100 공식을 사용하여 분석되고 억제율로 표현됩니다. 여기서 U는 미지 값, B는 스타우로스포린 배경 웰의 평균, C는 대조군 웰의 평균입니다. 곡선 피팅은 GraphPad Prism 소프트웨어에서 시그모이드 용량-반응(가변 기울기) 방정식 유형 분석을 사용하여 IC50 값을 생성합니다. Ki 값은 Ki = IC50/(1 + [S]/Km)) 방정식에서 계산되며, 여기서 [S]와 Km은 각각 ATP의 농도와 ATP의 Km 값입니다.

• 세포주

  A7r5 cells

• 농도

  10 µM

• 배양 시간

  2 h

• 방법

  Cells were treated with Belumosudil (KD025) for 2 hours.

• 동물 모델

  Young adult, aged, or type 2 diabetic mice

• 용량

  300 mg/kg

• 투여

  p.o.