BMS-986142

B 세포 수용체(BCR)를 통해 자극된 B 세포에서 BMS-986142는 칼슘 유입(IC50 = 9 nM), 사이토카인 생성, 증식, 보조 자극 분자 CD86의 표면 발현(IC50 = 3–4 nM)을 포함한 신호 전달 및 기능적 종말점을 강력하게 억제합니다. T 세포에서 T 세포 수용체(TCR)를 통해 자극된 ITK-촉매 PLCγ1 인산화는 B 세포에서 BTK 의존적 신호 전달 종말점보다 이 화합물에 의해 적어도 45배 덜 강력하게 억제되는데, 이는 효소 분석에서 ITK에 대한 BTK의 30배 선택성에 근거한 예상과 일치합니다[2].

다종 약동학 연구에서 BMS-986142의 절대 경구 생체이용률은 생쥐에서 93%, 쥐에서 67%, 게잡이원숭이에서 33%, 개에서 100%입니다. 이 화합물의 전신 혈장 청소율은 모든 종에서 낮습니다. 관찰된 큰 정상 상태 분포 용적은 높은 단백질 결합에도 불구하고 혈관 외 분포를 나타냅니다. 그러나 쥐에서는 뇌 침투가 매우 낮습니다(혈장 농도의 <5%). 이 화합물은 생체 내 NZB/W 루푸스 유발 쥐 모델에서 심각한 단백뇨 증가를 차단합니다. 이 화학 물질로 치료하면 세뇨관간질 및 사구체 신염과 염증 침윤에 대한 강력한 보호 효과를 제공합니다[2].

• 인간 재조합 BTK 효소 분석

  V-바닥 384웰 플레이트에 시험 화합물, 인간 재조합 BTK (1 nM), 형광 표지 펩타이드 (1.5 μM), ATP (20 μM), 분석 완충액 (pH 7.4에서 20 mM HEPES, 10 mM MgCl2, 0.015% Brij 35 계면활성제, 1.6% DMSO에 4 mM DTT)을 최종 부피 30 μL로 첨가했습니다. 실온에서 60분 인큐베이션 후, 각 샘플에 45 μL의 35 mM EDTA를 첨가하여 반응을 종료했습니다. 반응 혼합물은 형광 기질과 인산화된 생성물의 전기영동 분리를 통해 분석되었습니다. 억제 데이터는 효소가 없는 대조군 반응 (100% 억제) 및 억제제가 없는 대조군 (0% 억제)과 비교하여 계산되었습니다. BTK 활성 50%를 억제하는 데 필요한 농도 (IC50)를 결정하기 위해 용량-반응 곡선을 생성했습니다. 이 화합물은 DMSO에 10 mM로 용해되어 11가지 농도에서 평가되었습니다.

• 세포주

  Ramos B cells

• 농도

  0.4, 1.6, 6, 25, 100 and 400 nM

• 배양 시간

  1 h

• 방법

  B-cell receptor (BCR)-stimulated phospholipase C (PLC)-γ2 phosphorylation in Ramos B cells: After 1 hour of pre-incubation of Ramos B cells in media containing 10% fetal bovine serum (FBS) with varying concentrations of this compound at 37°C, the cells are stimulated with AffiniPure F(ab’)2 fragment goat anti-human immunoglobulin (Ig)M at 50 μg/mL for exactly 2 minutes at 37°C, followed by addition of ice-cold phosphate-buffered saline for quenching. The cells are pelleted and lysed, and PLCγ2 levels are measured by immunoblot using rabbit anti-human phosphoY759-PLCγ2 and analyzed using the Odyssey Infrared Imaging System with normalization to an actin control to ensure consistent loading.

• 동물 모델

  female NZB/W lupus-prone mouse model

• 용량

  30 mg/kg

• 투여

  by oral gavage