BX-912

카탈로그 번호S1275 배치:S127501

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기술 자료

화학식

C₂₀H₂₃BrN₈O

분자량

471.35

CAS 번호

702674-56-4

용해도 (25°C)*

시험관 내(In vitro)

DMSO

94 mg/mL (199.42 mM)

Ethanol

94 mg/mL (199.42 mM)

Water

Insoluble

생체 내(In Vivo) (개별적으로 순서대로 용매를 제품에 첨가하십시오.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	30%PEG400 1 0.5%Tween80 2 5%propylene glycol Selleck 연구소에서 검증했습니다. 이 제형에 대한 조정이 필요한 경우 맞춤형 테스트를 위해 당사 영업팀에 문의하십시오.	30.000mg/ml (63.65mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 300 μL of 100 mg/ml clarified PEG400 stock solution to 5 μL of Tween80, mix evenly to clarify it; add 50 μL Propylene glycol to the above system, mix evenly to clarify it; then continue to add 645 μL ddH2O to adjust the volume. to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml은 약간 용해되거나 불용해됨을 의미합니다.
* Selleck은 모든 화합물의 용해도를 자체적으로 테스트하며, 실제 용해도는 게시된 값과 약간 다를 수 있습니다. 이는 정상적인 현상이며, 약간의 배치 간 변동으로 인해 발생합니다.
* 실온 배송 (안정성 테스트 결과 이 제품은 냉각 조치 없이 배송될 수 있음을 보여줍니다.)

원액 준비

생물학적 활성

설명

BX912는 12 nM의 IC50를 가진 강력하고 특이적인 PDK1 억제제이며, 세포 없는 분석에서 PKA 및 PKC보다 PDK1에 대해 각각 9배 및 105배 더 큰 선택성을 보입니다. GSK3 에 비해 PDK1에 대한 선택성은 600배입니다.

표적

PDK-1 (Cell-free assay)	PKA (Cell-free assay)	KDR (Cell-free assay)	CDK2/CyclinE (Cell-free assay)	Chk1 (Cell-free assay)	더 보기
12 nM	110 nM	410 nM	650 nM	830 nM	더 보기

시험관 내(In vitro)

BX912는 ChcK1, PKA, c-kit 및 KDR을 각각 0.83, 0.11, 0.85 및 0.41 의 IC50로 억제합니다. BX912는 종양 세포에서 PDK1/Akt 신호 전달을 차단하고 다양한 종양 세포주(예: PC-3 세포)의 부착 의존성 성장을 억제하거나 세포자멸사를 유도합니다. Akt 활성이 증가된 여러 암 세포주(예: MDA-468 유방암)는 연한 한천 배지에서 조직 배양 플라스틱보다 PDK1 억제제 BX912에 의한 성장 억제에 30배 이상 민감하며, 이는 특히 부착되지 않은 세포에 중요한 PDK1/Akt 신호 전달 경로의 세포 생존 기능과 일치합니다. BX912는 직접적인 키나아제 분석 형식에서 PDK1 효소 활성을 강력하게 차단하지만, BX912는 사전 활성화된 AKT2 활성을 차단하지 못합니다(IC50 > 10 ). 따라서 BX-912는 PDK1의 직접적인 억제제입니다. BX912는 기질인 ATP에 대한 PDK1 활성의 경쟁적 억제제이며, 이는 BX912가 PDK1의 ATP 결합 포켓에 결합함을 시사합니다. BX912의 아미노피리미딘 골격은 PDK1의 활성 부위에서 유사한 방향을 취합니다. BX912는 4N DNA 함량을 가진 MDA-468 세포의 집단에서 현저한 증가를 촉진하며, 이는 세포 주기의 G2/M 단계에서의 차단을 나타냅니다. BX912는 또한 연한 한천 배지에서 HCT-116 세포의 성장을 강력하게 억제하여 1 의 용량에서 96%의 억제 효과를 보입니다. BX912는 연한 한천 배지에서 PC-3 세포의 성장을 강력하게 억제하며, 0.32 의 IC50를 나타냅니다.

프로토콜 (참조)

키나아제 분석:^{^[1]}	키나아제 분석 PDK1은 직접적인 키나아제 분석과 PDK1 및 PtdIns-3,4-P2 매개 AKT2 활성화를 측정하는 결합 분석 형식으로 분석됩니다. 결합 분석의 경우, 최종 분석 혼합물(60 L)은 다음과 같이 구성됩니다: 15 mM MOPS, pH 7.2, 1 mg/mL 소 혈청 알부민, 18 mM -글리세롤 인산염, 0.7 mM 디티오트레이톨, 3 mM EGTA, 10 mM MgOAc, 7.5 M ATP, 0.2 Ci [- ³³P]ATP, 7.5 M 비오틴화 펩타이드 기질 (biotin-ARRRDGGGAQPFRPRAATF), 0.5 L PtdIns-3,4-P2 함유 인지질 소포, 60 pg 정제된 재조합 인간 PDK1, 그리고 172 ng 정제된 재조합 인간 AKT2. 실온에서 2시간 배양 후, 비오틴 표지된 펩타이드는 스트렙타비딘 코팅된 SPA 비드에 10 L의 분석 혼합물에서 포획되며, 생성물 형성은 Wallac MicroBeta 카운터에서 섬광 근접법으로 측정됩니다. 생성된 생성물은 배양 시간 및 첨가된 PDK1과 비활성 AKT2의 양에 비례합니다. PDK1은 최적 이하의 수준으로 첨가되므로, 분석은 AKT2 활성화 억제제뿐만 아니라 PDK1 또는 AKT2의 직접적인 억제제 BX912를 민감하게 검출할 수 있습니다. PDK1 활성을 직접 측정하기 위해, 최종 분석 혼합물(60 L)은 50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 0.1 mM EGTA, 0.1 mM EDTA, 0.1% -메르캅토에탄올, 1 mg/mL 소 혈청 알부민, 10 mM MgOAc, 10 M ATP, 0.2 Ci [- ³³P]ATP, 7.5 M 기질 펩타이드 (H2N-ARRRGVTTKTFCGT), 그리고 60 ng 정제된 재조합 인간 PDK1을 포함했습니다. 실온에서 4시간 후, 25 mM EDTA가 첨가되고 반응 혼합물의 일부가 P81 인산셀룰로스 종이에 스폿됩니다. 필터 용지는 0.75% 인산으로 세 번, 아세톤으로 한 번 세척됩니다. 건조 후, 필터에 결합된 표지된 펩타이드는 형광 이미저를 사용하여 정량화됩니다.
세포 분석:^{^[1]}	세포주 MDA-468, MDA-453 농도 0.001-1 μM 배양 시간 72 hours 방법 Cells such as MDA-468, MDA-453 are seeded at a low density (1.5-3 × 10³ cells/well, 0.1 mL/well, 96-well plates) and are incubated overnight. BX912 treatments are made by adding 10 μL/well of the compound in 1% dimethyl sulfoxide and growth medium (final concentration of dimethyl sulfoxide, 0.1%), followed by brief shaking. Treated cells are incubated for 72 hours, and viability is measured by the addition of 10 μL of the metabolic dye WST-1. The WST-1 signal is read in a plate reader at 450 nm, and a no cell, or zero time cell, background is subtracted to calculate the net signal.

키나아제 분석:^{^[1]}

키나아제 분석
PDK1은 직접적인 키나아제 분석과 PDK1 및 PtdIns-3,4-P2 매개 AKT2 활성화를 측정하는 결합 분석 형식으로 분석됩니다. 결합 분석의 경우, 최종 분석 혼합물(60 L)은 다음과 같이 구성됩니다: 15 mM MOPS, pH 7.2, 1 mg/mL 소 혈청 알부민, 18 mM -글리세롤 인산염, 0.7 mM 디티오트레이톨, 3 mM EGTA, 10 mM MgOAc, 7.5 M ATP, 0.2 Ci [- ³³P]ATP, 7.5 M 비오틴화 펩타이드 기질 (biotin-ARRRDGGGAQPFRPRAATF), 0.5 L PtdIns-3,4-P2 함유 인지질 소포, 60 pg 정제된 재조합 인간 PDK1, 그리고 172 ng 정제된 재조합 인간 AKT2. 실온에서 2시간 배양 후, 비오틴 표지된 펩타이드는 스트렙타비딘 코팅된 SPA 비드에 10 L의 분석 혼합물에서 포획되며, 생성물 형성은 Wallac MicroBeta 카운터에서 섬광 근접법으로 측정됩니다. 생성된 생성물은 배양 시간 및 첨가된 PDK1과 비활성 AKT2의 양에 비례합니다. PDK1은 최적 이하의 수준으로 첨가되므로, 분석은 AKT2 활성화 억제제뿐만 아니라 PDK1 또는 AKT2의 직접적인 억제제 BX912를 민감하게 검출할 수 있습니다. PDK1 활성을 직접 측정하기 위해, 최종 분석 혼합물(60 L)은 50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 0.1 mM EGTA, 0.1 mM EDTA, 0.1% -메르캅토에탄올, 1 mg/mL 소 혈청 알부민, 10 mM MgOAc, 10 M ATP, 0.2 Ci [- ³³P]ATP, 7.5 M 기질 펩타이드 (H2N-ARRRGVTTKTFCGT), 그리고 60 ng 정제된 재조합 인간 PDK1을 포함했습니다. 실온에서 4시간 후, 25 mM EDTA가 첨가되고 반응 혼합물의 일부가 P81 인산셀룰로스 종이에 스폿됩니다. 필터 용지는 0.75% 인산으로 세 번, 아세톤으로 한 번 세척됩니다. 건조 후, 필터에 결합된 표지된 펩타이드는 형광 이미저를 사용하여 정량화됩니다.

세포 분석:^{^[1]}

세포주
MDA-468, MDA-453
농도
0.001-1 μM
배양 시간
72 hours
방법
Cells such as MDA-468, MDA-453 are seeded at a low density (1.5-3 × 10³ cells/well, 0.1 mL/well, 96-well plates) and are incubated overnight. BX912 treatments are made by adding 10 μL/well of the compound in 1% dimethyl sulfoxide and growth medium (final concentration of dimethyl sulfoxide, 0.1%), followed by brief shaking. Treated cells are incubated for 72 hours, and viability is measured by the addition of 10 μL of the metabolic dye WST-1. The WST-1 signal is read in a plate reader at 450 nm, and a no cell, or zero time cell, background is subtracted to calculate the net signal.

참조

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15772071/

고객 제품 검증

: , , Oncotarget, 2014, 5(21):10732-44.

: 데이터 출처 [ , , Am J Respir Cell Mol Biol, 2018, 59(3):295-305 ]

Sellecks BX-912 인용됨 14 출판물

Deregulation and epigenetic modification of BCL2-family genes cause resistance to venetoclax in hematologic malignancies [ Blood, 2022, blood.2021014304]	PubMed: 35704690
The 3-phosphoinositide-dependent protein kinase 1 is an essential upstream activator of protein kinase A in malaria parasites [ PLoS Biol, 2021, 19(12):e3001483]	PubMed: 34879056
Effects of inhibiting PDK‑1 expression in bone marrow mesenchymal stem cells on osteoblast differentiation in vitro [ Mol Med Rep, 2021, 23(2)118]	PubMed: 33300048
Application of a Biphasic Mathematical Model of Cancer Cell Drug Response for Formulating Potent and Synergistic Targeted Drug Combinations to Triple Negative Breast Cancer Cells. [ Cancers (Basel), 2020, 27;12(5)pii: E1087]	PubMed: 32349331
Biphasic Mathematical Model of Cell-Drug Interaction That Separates Target-Specific and Off-Target Inhibition and Suggests Potent Targeted Drug Combinations for Multi-Driver Colorectal Cancer Cells. [ Cancers (Basel), 2020, 13;12(2) pii: E436]	PubMed: 32069833
Gene Essentiality Profiling Reveals Gene Networks and Synthetic Lethal Interactions with Oncogenic Ras. [ Cell, 2019, 36(2):179-193]	PubMed: 28162770
A Pharmacogenomic Landscape in Human Liver Cancers. [ Cancer Cell, 2019, 36(2):179-193]	PubMed: 31378681
Mapping phospho-catalytic dependencies of therapy-resistant tumours reveals actionable vulnerabilities. [ Nat Cell Biol, 2019, 21(6):778-790]	PubMed: 31160710
Discoidin Domain Receptor 2 Signaling Regulates Fibroblast Apoptosis through PDK1/Akt [Jia S Am J Respir Cell Mol Biol, 2018, 59(3):295-305]	PubMed: 29652518
Systematic Functional Characterization of Resistance to PI3K Inhibition in Breast Cancer. [ Cancer Discov, 2016, 6(10):1134-1147]	PubMed: 27604488

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