Delanzomib

CEP-18770은 Proteasome의 트립신 및 펩티딜 글루타밀 활성을 미미하게 예방합니다.[1] CEP-18770은 A2780 난소암 세포, PC3 전립선암, H460, LoVo 결장암, RPMI8226 다발성 골수종암 및 HS-Sultan 역형성 비호지킨 림프종을 각각 13.7, 22.2, 34.2, 11.3, 5.6 및 8.2 nM의 IC50 값으로 억제합니다.[1] CEP-18770은 여러 MM 및 만성 골수성 백혈병 세포주 K562에서 유비퀴틴-Proteasome 경로를 차단합니다. CEP-18770은 4~8시간에 걸쳐 유비퀴틴화된 단백질의 축적을 유발합니다.[1] IκBα 분해는 CEP-18770 전처리로 완전히 차단됩니다. CEP-18770은 RPMI-8226 및 U266 세포 모두에서 높은 수준의 NF-κB 활성을 유의하게 억제합니다. CEP-18770에 의한 MM 세포주에서 NF-kB DNA 결합 활성의 시간 및 농도 의존적 억제는 IkBα 자체, X-염색체 연결된 세포자멸사 억제 단백질 (XIAP), 전염증성 사이토카인 TNF-α 및 인터루킨-1β (IL-1β), 세포내 접착 분자 (ICAM1) 및 전혈관신생 인자 혈관 내피 성장 인자를 포함하여 종양 세포의 성장 및 생존을 매개하는 여러 NF-κB 조절 유전자의 발현 감소로 이어집니다.[1] 이러한 NF-κB 매개 유전자의 발현은 이 약물에 대한 더 유리한 임상 반응성과 관련이 있으며, CEP-18770 노출에 대한 반응에서 잠재적인 예후 가치를 강조합니다.[1] MM에 대한 CEP-18770의 세포자멸사 활성은 종양 유래 MM 세포주에만 국한되지 않고 재발성 또는 불응성 환자의 원발성 MM 이식편으로 확장됩니다.[1] 또한, CEP-18770은 병용 시 시험관 내에서 MM 세포 생존력의 시너지 억제를 생성합니다.[2]

CEP-18770은 지속적인 용량 관련 상대적 종양 중량 억제를 나타냅니다. CEP-18770은 용량 관련 완전 종양 퇴행을 유도하며, 이는 1.2 mg/kg의 최대 내약 용량(MTD) 정맥 투여 시 50%의 CR 발생률을 초래합니다.[1] CEP-18770은 이 연구 완료 시점(종양 이식 후 120일)에 종양 없는 생쥐 발생률의 용량 관련 증가를 나타냅니다. CEP-18770의 경구 투여는 120일 연구 기간 동안 동물 체중의 최소한의 변화와 함께 종양 중량의 현저한 감소 및 완전 종양 퇴행의 주목할 만한 용량 관련 발생률을 유도합니다.[1]_ECEP-18770의 유사 활성 용량은 종양 Proteasome 활성의 더 크고 더 지속적인 용량 관련 억제를 나타내며, 카스파제-3 및 7 활성의 최대 유도와 일시적으로 일치합니다.[1] 최대 세포자멸사 신호는 CEP-18770에 대해 2.5배 더 큽니다. 대조적으로, CEP-18870의 Proteasome 억제 프로파일은 검사된 정상 생쥐 말초 조직(간, 폐, 전혈, 뇌[활동 없음])에서 그 크기와 지속 시간 모두에서 비교할 만합니다.[1] 뇌 조직에서는 CEP-18770에 대해 어떤 시점에서도 Proteasome 억제가 감지되지 않습니다.[1] 단일 제제 CEP-18770 PO도 이러한 이종이식 모델에서 현저한 항-MM 효과를 보입니다.[1]

• 세포 추출물에서 Proteasome 활성 탐색

  인간 다발성 골수종 세포를 차가운 인산염 완충 식염수로 두 번 세척하고, 펠릿화한 후, 유리 구슬(<106 마이크론, 산세척) 1 부피와 균질화 완충액(50mM Tris (pH 7.4), 1mM 디티오트레이톨, 5mM MgCl₂, 2mM ATP 및 250mM 수크로스) 동일 부피로 4°C에서 15-30분 동안 고속 볼텍싱하여 용해시킵니다. 그런 다음 구슬, 막 분획, 핵 및 세포 잔해를 16,000g에서 5분 동안 원심분리하여 상층액에서 제거합니다. 추출물의 단백질 함량은 브래드포드 분석법을 사용하여 정량화합니다. Proteasome 활성은 아래에 설명된 대로 분석됩니다. 동일한 양(일반적으로 60g)의 단백질을 환원 샘플 완충액에서 끓여 변성시키고, 12.5% SDS-PAGE로 분리한 후 폴리비닐리덴 디플루오르화물(PVDF) 막으로 전기 전이시킵니다. 면역블로팅은 단실-설폰아미도헥사노일 다클론 항체(1:7,500, 토끼)와 서양고추냉이 과산화효소 결합 염소 또는 돼지 항토끼 2차 항체를 사용하여 수행한 다음 강화된 화학발광을 사용합니다.

• 세포주

  HMEC and TEC cells

• 농도

  0-100 nM

• 배양 시간

  6 hours

• 방법

  HMEC and TEC cells are seeded into 24-well plates at a density of 10⁴ cells/well in DMEM supplemented with 5% FCS. After incubation with proteasome inhibitors (48 hours), cells are washed, air dried, and stained with crystal violet as described. Cell number is determined, in duplicate samples, on the basis of a standard curve obtained with known cell numbers. All experiments are performed in triplicate. In vitro formation of capillary-like structures is studied on cells (4 × 10⁴ cells/well in DMEM supplemented with 5% FCS. After incubation with proteasome inhibitors (48 hours), cells are washed (cells/well in 24-well plates) and seeded onto Matrigel-coated wells in DMEM containing 0.25% BSA. HMEC and TEC cells (5 × 10³ per well), suspended in 200 μL DMEM with 5% FCS (positive control), serum-free medium (negative control), are layered onto the Matrigel surface in the presence or absence of proteasome inhibitor CEP-18770. Cells are observed with a microscope and experimental results are then recorded after a 6-hour incubation at 37 °C. Data is analyzed, as the mean (× 1 SD) of total length of capillary-like structures, by the Micro-Image system and is expressed as mm/field by the computer analysis system in 5 different fields at 100 × magnification in duplicated wells for 4 different experiments.

• 동물 모델

  Human MM RPMI 8226 subcutaneous xenograft model in SCID mice

• 용량

  From 1.5 to 4 mg/kg, twice for 7 days to 4 weeks.

• 투여

  Intravenously