CFSE

CFDA-SE 작동액 준비
1.1 원액 준비
1 mg의 CFDA-SE를 0.1794 mL의 DMSO에 녹여 10 mM CFSE를 얻습니다.
참고: 원액은 빛을 피해 -20 ℃ 또는 -80 ℃에서 보관하고 반복적인 동결-해동 주기를 피하는 것이 좋습니다.
1.2 이 화학물질 작동액 준비
원액을 혈청 없는 세포 배양 배지 또는 PBS에 희석하여 5-10 μM의 이 화학물질 작동액을 얻습니다.
참고: 실제 상황에 따라 이 화학물질 작동액의 농도를 조절하십시오.
세포 염색
2.1 부유 세포의 경우: 4℃에서 1000 g로 3-5분간 원심분리한 다음 상층액을 버립니다. PBS로 5분씩 두 번 세척합니다.
부착 세포의 경우: 세포 배양 배지를 버리고 트립신을 추가하여 세포를 해리시켜 단일 세포 부유액을 만듭니다. 4℃에서 1000 g로 3-5분간 원심분리한 다음 상층액을 버립니다. PBS로 5분씩 두 번 세척합니다.
2.2 이 화학물질 작동액 1 mL를 넣은 다음 실온에서 30분간 배양합니다.
2.3 4℃에서 400 g로 3-4분간 원심분리한 다음 상층액을 버립니다.
2.4 PBS로 5분씩 두 번 세척합니다.
2.5 혈청 없는 세포 배양 배지 또는 PBS로 세포를 재현탁한 다음 형광 현미경 또는 유세포 분석기로 검출합니다.

CFSE를 이용한 세포의 생체 내 표지는 표지된 세포나 인접 세포에 거의 독성 영향을 미 미치지 않으면서 실현 가능합니다. 이는 말초 림프 기관에서 T-세포의 회복으로 입증된 바와 같이 비교적 장기적인 이동 연구에 이점이 있습니다[2].

• 세포주

  human erythroleukaemic cell line K562, mouse lymphoma cell line YAC-1, human mammary cancer cell line MCF-7 and human melanoma cell line A375

• 농도

  2 µM, 3 µM, 4 µM, 5 µM, 10 µM and 20 µM

• 배양 시간

  5, 6, 7, 8, 10 and 15 min

• 방법

  The 5 mM CFDA-SE stock in DMSO is diluted to different concentrations(2 µM, 3 µM, 4 µM, 5 µM, 10 µM and 20 µM) in PBS with a total volume of 1 ml. After each cell line is harvested and washed three times with PBS, 1×10⁹ cells are added to equal volume of this compound with different concentrations and incubated at 37°C for 5, 6, 7, 8, 10 and 15 min with agitation. The labeling reaction is stopped for 1 min by adding an equal volume of heat inactivated fetal bovine serum. The CFDA-SE labeled cells are washed twice with PBS and recounted, and the cell concentration is adjusted to 6×104cells/ml in IMDM containing 10% FCS.

• 동물 모델

  C57Bl/6 mice

• 용량

  10 μM

• 투여

  injected into thymic lobe