CFTRinh-172

CFTRinh-172는 CFTR 매개 Cl^- 수송을 용량 및 시간 의존적으로 억제하고, 여러 유형의 작용제 또는 활성제에 의한 CFTR 활성화를 효과적으로 억제합니다. [1] 이 화합물은 선택적 CFTR 채널 억제제로서 토끼 눈물샘의 샘세포와 도관 세포에서 Cl⁻ 전류를 완전히 제거합니다. [2] 또한 CFTR 억제와 무관하게 ROS 생성, 미토콘드리아 기능 부전 및 NF-κB 신호 전달 경로 활성화를 유도합니다. [3]

CFTRinh-172 (20 µg/6 h)는 생체 내에서 V. cholerae 성장에 영향을 미치지 않으면서 V. cholerae 유발 장액 분비를 완전히 제거합니다. [4]

• 스크리닝 절차

  분석은 3미터 로봇 팔, CO₂ 배양기, 플레이트 세척기, 액체 처리 워크스테이션, 바코드 리더, 뚜껑 제거 스테이션 및 두 대의 FLUOstar 형광 플레이트 리더로 구성된 맞춤형 스크리닝 시스템을 사용하여 수행됩니다. 각 플레이트 리더에는 두 개의 주사기 펌프와 HQ500/20X (500 ± 10 nm) 여기 및 HQ535/30M (535 ± 15 nm) 방출 필터가 장착되어 있습니다. 로봇 시스템은 두 대의 플레이트 리더에 맞게 수정된 SAMI 버전 3.3 소프트웨어를 사용하여 통합됩니다. 저장된 데이터 파일에서 기준선이 제거되고 정규화된 형광 기울기(할로겐화물 유입 속도 제공)를 계산하기 위해 Microsoft VBA(Visual Basic for Applications)로 사용자 지정 소프트웨어가 작성됩니다. 분석은 배양기(37°C, 90% 습도, 5% CO₂)에 FRT 세포가 들어 있는 40~60개의 96웰 플레이트를 로딩하고, 테스트 화합물과 일회용 플라스틱 피펫 팁이 들어 있는 96웰 플레이트를 캐러셀에 로딩하여 설정됩니다. 분석을 시작하기 위해 96웰 플레이트의 각 웰은 PBS로 세 번 세척하고(300 μl/세척), 50 μL의 PBS를 남깁니다. CFTR 활성화 칵테일(5 μM 포스콜린, 100 μM IBMX, 25 μM 아피게닌을 PBS에 녹인 것) 10 마이크로리터를 첨가하고, 5분 후 각 웰에 하나의 테스트 화합물(1 mM DMSO 용액 0.5 μL)을 첨가하여 최종 농도 10 μM이 되도록 합니다. 10분 후, 96웰 플레이트는 형광 분석을 위해 플레이트 리더로 옮겨집니다. 각 웰은 CFTR 매개 I– 수송을 위해 개별적으로 분석되며, 형광은 2초 동안(기준선) 그리고 137 mM Cl–가 I–로 대체된 등장성 PBS 165 μL을 빠르게(<0.5초) 첨가한 후 12초 동안 연속적으로(점당 200 ms) 기록됩니다.

• 세포주

  Fischer rat thyroid (FRT) cells

• 농도

  ~1 mM

• 배양 시간

  24 hours

• 방법

  Cell toxicity is assayed by the dihydrorhodamine method at 24 hours after cell incubation with 0–1,000 μM of this compound.

• 동물 모델

  An adult mouse model of Vibrio cholerae-induced diarrhea

• 용량

  20 µg/6 h

• 투여

  Intraperitoneal administration