CHIR-124

CHIR-124는 다른 알려진 Chk1 억제제와 구조적으로 관련이 없는 퀴놀론 기반의 작은 분자입니다. 이 화합물은 돌연변이 p53 유전자를 포함하는 유방암 (MDA-MB-231 및 MDA-MB-435) 및 결장암 (SW-620 및 Colo205)을 포함한 다양한 암세포주에서 증식 억제를 유발하는 토포이소머라제 독소 (예: 캄프토테신 또는 SN-38)와 시너지 효과를 나타냅니다. 이는 SN-38 유도 S 및 G2-M Cell Cycle Checkpoints를 폐지하고 MDA-MD-435 유방암 세포에서 아폽토시스를 강화합니다. 이 화학 물질에 의한 G2-M Cell Cycle Checkpoint의 폐지 및 아폽토시스 유도는 p53 손실에 의해 강화됩니다. [1] 이 화합물은 또한 PDGFR 및 Flt3와 같은 다른 키나아제에도 강력하게 작용하며 각각 6.6 nM 및 5.8 nM의 IC50을 가집니다. [2]

CHIR-124는 G₂-M Cell Cycle Checkpoint를 폐지하고 정위 유방암 이종이식 모델에서 종양 아폽토시스를 증가시킴으로써 성장 억제 효과를 강화합니다.

• Chk1 Assay

  Chk1 분석을 위해, 키나아제 도메인은 Sf9 곤충 세포에서 발현되며, 합의 Chk1/Chk2 인산화 부위 (*) (biotin-[AHX]SGSGS*GLYRSPSMP-ENLNRPR[CONH2])를 포함하는 비오틴화된 cdc25c 펩타이드가 기질로 사용됩니다. CHIR-124의 희석 계열은 최종 농도 30 mM Tris-HCl(pH 7.5), 10 mM MgCl₂, 2 mM DTT, 4 mM EDTA, 25 mM β-글리세로포스페이트, 5 mM MnCl₂, 0.01% 소 혈청 알부민, 1.35 nM CHK1 키나아제 도메인, 0.5 μM 펩타이드 기질, 그리고 1 AM 미표지 ATP, 또한 5 nM ³³Pγ표지 ATP (비활성 = 2,000 Ci/mmol)를 포함하는 키나아제 반응 완충액과 혼합됩니다. 반응 및 인산 전이 검출은 방사능 방법으로 수행됩니다. 반응은 실온에서 1~4시간 동안 인큐베이션되며, 인산화된 펩타이드는 정지 반응 완충액 (25 mM EDTA [에틸렌디아민테트라아세트산], 50 mM HEPES, pH 7.5)을 포함하는 스트렙타비딘 코팅 마이크로타이터 플레이트에 포획됩니다. 인산화된 펩타이드는 유로피움 표지 항-포스포티로신 항체 PT66을 사용하여 DELFIA TRF 시스템으로 측정됩니다. IC50에 대한 이 화합물의 농도는 XL-Fit 데이터 분석 소프트웨어를 사용하여 비선형 회귀로 계산됩니다.

• 세포주

  MDA-MB-231, MDA-MB-435, SW-620, and COLO 205 cells

• 농도

  0-2350 nM, dependent on cell types

• 배양 시간

  48 hours

• 방법

  MDA-MB-231, MDA-MB-435, SW-620, and COLO 205 cells in log-phase are plated into 96-well microplates. CHIR-124 is serially diluted in the presence of six different concentrations of Camptothecin or 0 nM camptothecin. Camptothecin is also serially diluted in the absence of this compound. This chemical is added to cells in 96-well dishes and incubated at 37 °C for 48 hours. Each treatment condition is done in triplicate. Cell proliferation is monitored by the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5- (3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium (MTS), inner salt assay. MTS inner salt is added to the microplates, which are incubated for another 3 hours, and absorbance at 490 nm is read on a plate reader. The concentrations of each drug in the combinations required to produce 50% inhibition are plotted to generate the isoboles. Isobologram analysis of drug interaction is based the equation of Loewe additivity (1= D _A /IC50, _A + D_B/IC50, _B), where IC50, _A and IC50, _B are the concentrations of drugs to result in 50% inhibition for each drug alone, and D_A and D_B are concentrations of each drug in the combination that yield 50% overall inhibition. A diagonal line indicating Loewe additivity is included in each graph. Data points that fall below the line indicate synergy, whereas those that fall above the line will indicate antagonism

• 동물 모델

  MDA-MB-435 cells are implanted in the mammary fat pad of 8- to 10-week-old female immunodeficient mice.

• 용량

  10 mg/kg or 20 mg/kg

• 투여

  CHIR-124 is given orally four times daily × 6 on days 2 to 7 in captisol.