데이터시트

생물학적 설명

특이성	Collagen VII Antibody [K3G14]는 총 Collagen VII 단백질의 내인성 수준을 검출합니다.
배경	콜라겐 VII은 주로 피부의 진피-표피 경계를 안정화하는 앵커 섬유 형성을 담당하는 특수 섬유성 콜라겐입니다. 이는 COL7A1 유전자에 의해 암호화되며 주로 표피 각질 형성 세포와 진피 섬유 아세포에서 발현됩니다. 구조적으로, 콜라겐 VII은 세 개의 pro-α1(VII) 사슬로 구성된 동형삼량체이며, 각 사슬은 중앙의 삼중 나선 도메인(약 1,530개 아미노산)을 특징으로 하며, 프로테아제에 민감한 39개 아미노산의 "힌지" 영역을 포함하여 19개의 불완전성에 의해 중단됩니다. 이 중앙 도메인은 두 개의 비콜라겐성 도메인으로 둘러싸여 있습니다: N-말단에는 피브로넥틴 유형 III 반복 및 폰 빌레브란트 인자 A 도메인과 같은 접착성 모듈을 포함하는 NC-1이 있고, C-말단에는 쿠니츠 프로테아제 억제제 유사 세그먼트를 포함하는 NC-2가 있습니다. 두 개의 콜라겐 VII 분자는 이황화 결합에 의해 안정화된 역평행 이합체로 조립된 다음 앵커 섬유로 더 응집됩니다. 기능적으로, 콜라겐 VII은 라미닌-332 및 콜라겐 IV와 같은 기저막 구성 요소에 고친화성으로 결합하여 기저막을 기저 진피에 고정하고 피부 무결성을 유지합니다. 콜라겐 VII의 돌연변이는 심각한 수포성 피부 질환인 이영양성 표피박리증(DEB)을 유발합니다.

특이성

Collagen VII Antibody [K3G14]는 총 Collagen VII 단백질의 내인성 수준을 검출합니다.

배경

콜라겐 VII은 주로 피부의 진피-표피 경계를 안정화하는 앵커 섬유 형성을 담당하는 특수 섬유성 콜라겐입니다. 이는 COL7A1 유전자에 의해 암호화되며 주로 표피 각질 형성 세포와 진피 섬유 아세포에서 발현됩니다. 구조적으로, 콜라겐 VII은 세 개의 pro-α1(VII) 사슬로 구성된 동형삼량체이며, 각 사슬은 중앙의 삼중 나선 도메인(약 1,530개 아미노산)을 특징으로 하며, 프로테아제에 민감한 39개 아미노산의 "힌지" 영역을 포함하여 19개의 불완전성에 의해 중단됩니다. 이 중앙 도메인은 두 개의 비콜라겐성 도메인으로 둘러싸여 있습니다: N-말단에는 피브로넥틴 유형 III 반복 및 폰 빌레브란트 인자 A 도메인과 같은 접착성 모듈을 포함하는 NC-1이 있고, C-말단에는 쿠니츠 프로테아제 억제제 유사 세그먼트를 포함하는 NC-2가 있습니다. 두 개의 콜라겐 VII 분자는 이황화 결합에 의해 안정화된 역평행 이합체로 조립된 다음 앵커 섬유로 더 응집됩니다. 기능적으로, 콜라겐 VII은 라미닌-332 및 콜라겐 IV와 같은 기저막 구성 요소에 고친화성으로 결합하여 기저막을 기저 진피에 고정하고 피부 무결성을 유지합니다. 콜라겐 VII의 돌연변이는 심각한 수포성 피부 질환인 이영양성 표피박리증(DEB)을 유발합니다.

사용 정보

응용

IHC-Fr

희석

IHC

1:300 - 1:600

반응성

Human

출처

Mouse Monoclonal Antibody

MW

보관 완충액

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

보관
(수령일로부터)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

실험 방법
IHC	Experimental Protocol： Deparaffinization/Rehydration 1. Deparaffinize/hydrate sections: 2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each. 3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each. 4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each. 5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each. 6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min. Staining 1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each. 2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min. 3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each. 4. Wash sections in wash buffer for 5 min. 5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature. 6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C. 7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each. 8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature. 9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each. 10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use. 11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity. 12. Immerse slides in dH2O. 13. If desired, counterstain sections with hematoxylin. 14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each. 15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each. 16. Mount sections with coverslips and mounting medium.

실험 방법

IHC

Experimental Protocol：

Deparaffinization/Rehydration

1. Deparaffinize/hydrate sections:

2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each.

3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each.

4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each.

5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each.

6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min.

Staining

1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each.

2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min.

3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.

4. Wash sections in wash buffer for 5 min.

5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature.

6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C.

7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each.

8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature.

9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each.

10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use.

11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity.

12. Immerse slides in dH2O.

13. If desired, counterstain sections with hematoxylin.

14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.

15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each.

16. Mount sections with coverslips and mounting medium.

참조

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19945621/

적용 데이터

IHC

Selleck 검증

Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human tonsils tissue with F3214 at 1:500 dilution.