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생물학적 설명
| 특이성 | Connexin 36 Antibody [L23J6]는 총 Connexin 36 단백질의 내인성 수준을 검출합니다. |
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| 배경 | Connexin 36 (Cx36, GJC1)은 포유류 뇌의 개재뉴런과 망막 뉴런에서 고도로 발현되는 뉴런 특이적 간극 연접 단백질로, 각 단량체가 4개의 막관통 도메인(TM1–4)을 특징으로 하는 육합체 코넥손으로 조립됩니다. TM1과 TM2는 세포간 도킹을 촉진하는 보존된 d-프롤린(Pro47, Pro187)을 포함하는 세포외 루프(EL1/EL2)에 의해 측면이 형성된, 기공 내벽의 소수성 수축 부위를 형성합니다. 이 채널은 CaMKII 인산화 부위(특히 Ser293)를 가진 짧은 세포내 N-말단 꼬리와 Ca²⁺/칼모듈린 결합을 매개하는 세포질 루프(CL) 도메인을 가지며, 이는 ~15 Å 직경의 수성 기공을 알로스테릭하게 게이팅하며, 이 기공은 1.2 kDa 미만의 양이온 및 음이온(K⁺, IP₃, cAMP, 루시퍼 옐로우 포함)에 선택적으로 투과성입니다. 전압에 둔감하지만, Cx36 간극 연접 채널은 pH 및 Ca²⁺에 민감하며, 낮은 단일 전도도(~15 pS)를 나타내고, 소마와 수상돌기 사이의 직접적인 전류 흐름을 허용함으로써 억제성 네트워크 전반에 걸쳐 정확한 스파이클렛 동기화를 위한 양방향 전기적 커플링을 매개합니다. Ser293에서의 CaMKII 의존적 인산화는 시냅스 가소성 동안 개방 확률을 증가시키는 반면, 메플로퀸 및 퀴닌과 같은 약리학적 물질은 단량체 간 TM1/TM2 소수성 포켓(I35/V38/A39/I40, I76/V80)에 결합하여 채널 전도도를 억제하고, 이온 투과 경로를 탈수시키고 전도도를 50% 이상 감소시키는 폐색성 고리를 형성합니다. Cx36은 감마 진동, 시상하부 핵(SCN) 일주기성 조절기에서의 위상 동기화, 망막의 AII 무축삭세포 매개 막대 경로 신호 전달에 필수적입니다. Cx36의 녹아웃은 스파이크 타이밍 정밀도를 방해하고, 시각 운동 반사를 손상시키며, 발작 감수성을 증가시킵니다. R278H와 같은 돌연변이는 간극 연접 플라크를 불안정하게 하여 청소년기 근간대성 간질 및 안면치아손가락형성부전 증후군 표현형을 유발합니다. |
사용 정보
| 응용 | IHC, IF | 희석 |
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| 반응성 | Human, Mouse | ||||||
| 출처 | Mouse Monoclonal Antibody | MW | |||||
| 보관 완충액 | PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 | 보관 (수령일로부터) |
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years | ||||
| IHC |
Experimental Protocol：
Deparaffinization/Rehydration
1. Deparaffinize/hydrate sections:
2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each.
3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each.
4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each.
5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each.
6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min.
Staining
1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each.
2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min.
3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.
4. Wash sections in wash buffer for 5 min.
5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature.
6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C.
7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each.
8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature.
9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each.
10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use.
11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity.
12. Immerse slides in dH2O.
13. If desired, counterstain sections with hematoxylin.
14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.
15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each.
16. Mount sections with coverslips and mounting medium.
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| IF |
Experimental Protocol:
Sample Preparation
1. Adherent Cells: Place a clean, sterile coverslip in a culture dish. Once the cells grow to near confluence as a monolayer, remove the coverslip for further use.
2. Suspension Cells: Seed the cells onto a clean, sterile slide coated with poly-L-lysine.
3. Frozen Sections: Allow the slide to thaw at room temperature. Wash it with pure water or PBS for 2 times, 3 minutes each time.
4. Paraffin Sections: Deparaffinization and rehydration. Wash the slide with pure water or PBS for 3 times, 3 minutes each time. Then perform antigen retrieval.
Fixation
1. Fix the cell coverslips/spots or tissue sections at room temperature using a fixative such as 4% paraformaldehyde (4% PFA) for 10-15 minutes.
2. Wash the sample with PBS for 3 times, 3 minutes each time.
Permeabilization
1.Add a detergent such as 0.1–0.3% Triton X-100 to the sample and incubate at room temperature for 10–20 minutes.
(Note: This step is only required for intracellular antigens. For antigens expressed on the cell membrane, this step is unnecessary.)
Wash the sample with PBS for 3 times, 3 minutes each time.
Blocking
Add blocking solution and incubate at room temperature for at least 1 hour. (Common blocking solutions include: serum from the same source as the secondary antibody, BSA, or goat serum.)
Note: Ensure the sample remains moist during and after the blocking step to prevent drying, which can lead to high background.
Immunofluorescence Staining (Day 1)
1. Remove the blocking solution and add the diluted primary antibody.
2. Incubate the sample in a humidified chamber at 4°C overnight.
Immunofluorescence Staining (Day 2)
1. Remove the primary antibody and wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time.
2. Add the diluted fluorescent secondary antibody and incubate in the dark at 4°C for 1–2 hours.
3. Remove the secondary antibody and wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time.
4. Add diluted DAPI and incubate at room temperature in the dark for 5–10 minutes.
5. Wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time.
Mounting
1. Mount the sample with an anti-fade mounting medium.
2. Allow the slide to dry at room temperature overnight in the dark.
3. Store the slide in a slide storage box at 4°C, protected from light.
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참조
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