CP-673451

CP 673451은 IC50이 10 nM/1 nM인 PDGFRα/β의 선택적 억제제이며, 다른 혈관신생 수용체에 비해 >450배의 선택성을 나타냅니다. 교모세포종 종양에서 이 화합물(33 mg/kg)은 4시간 동안 PDGFR-β 수용체의 >50% 억제를 제공하며, 이는 C_max에서 혈장 내 EC50 120 ng/mL에 해당합니다. 스폰지 혈관신생 모델에서 이 억제제는 3 mg/kg (q.d. ×5, p.o., C_max에서 5.5 ng/mL에 해당) 용량에서 PDGF-BB-자극 혈관신생의 70%를 억제합니다.[1] 이 화학물질은 GSK-3α 및 GSK-3β의 인산화 감소를 포함하는 기전을 통해 세포 증식률을 감소시킵니다. RD 및 RUCH2 배양 모두에서, 이는 횡문구형성 능력 및 세포 분화를 손상시키고, 노화 증가를 유발합니다. [2]

CP 673451 (일상적으로 1일 1회 경구 투여 ?0일)은 무흉선 마우스의 s.c.에서 성장한 여러 인간 종양 이종이식편, 예를 들어 H460 인간 폐암, Colo205 및 LS174T 인간 결장암, U87MG 인간 교모세포종 다형에서 종양 성장(ED50 < 33 mg/kg)을 억제합니다. [1] RUCH2 이종이식편을 가진 마우스에서 이 화합물은 종양 성장 및 기질 세포 침윤을 감소시킵니다. [2]

• 키나아제 억제 분석

  PDGFR-β의 세포내 부분(아미노산 693-1401, accession no. J03278)의 글루타티온 S-전달효소 태그 키나아제 도메인 구축물은 Sf-9 세포(바쿨로바이러스 발현 시스템)에서 발현됩니다. 효소 역학은 인산화 버퍼 [50 mmol/L HEPES (pH 7.3), 125 mmol/L NaCl, 24 mmol/L MgCl₂]에서 ATP 농도를 증가시키면서 효소를 배양하여 결정됩니다. 이 버퍼는 이전에 PBS에 희석된 100 μg/mL 폴리-글루-티르 (4:1 비율) 100 μL로 코팅된 Nunc Immuno MaxiSorp 96웰 플레이트에서 수행됩니다. 10분 후, 플레이트는 세척되고 (PBS, 0.1% Tween 20), 항-포스포티로신-호스래디쉬 퍼옥시다제 항체와 함께 배양되며, PBS, 0.05% Tween 20, 3% BSA에 희석되어 실온에서 30분 동안 반응합니다. 플레이트는 위와 같이 세척되고 3,3과 함께 배양됩니다.

• 세포주

  PAE

• 농도

  ~3000 nM

• 배양 시간

  18 min

• 방법

  PAE cells stably expressing full-length PDGFR and VEGFR have been generated. For cell-based selectivity assays, PAE cells are transfected with fulllength human PDGFR-a, PDGFR-h, or VEGFR-2. Cells are seeded at 4×10⁵ cells/mL in 50 μL growth medium (Ham's F-12 media supplemented with 10% fetal bovine serum, 50,000 units each penicillin and streptomycin. After 6 to 8 hours, the growth medium is replaced with 50 μL serum-depleted medium (as above, but with 0.1% fetal bovine serum) and cells are incubated overnight. Immediately before compound addition, the medium was replaced with 95 μL serum-depleted medium. Compounds are diluted in 100% DMSO, added to the cells at a final DMSO concentration of 0.25% v/v, and incubated at 37°C for 10 minutes. Cells are stimulated with the appropriate ligand and incubated as above for an additional 8 minutes. The medium is removed and the cells washed once with PBS, then lysed with 50 μL HNTG buffer [20 mmol/L HEPES (pH 7.5), 150 mmol/L NaCl, 2% Triton X-100, 10% glycerol, 5 μmol/L EDTA, 2 mmol/L NaVO₄, and 1 EDTA-free complete protease inhibitor tablet per 25 mL] for 5 minutes at room temperature. Lysates are then diluted with 50 μL HG buffer [20 mmol/L HEPES (pH 7.5), 10% glycerol]. The diluted cell lysates are mixed thoroughly, 50 μL of supernatant are transferred to the ELISA capture plate, and incubated at room temperature for 2 hours with agitation. ELISA capture plates are prepared by coating 96-well ReactiBind goat-antirabbit plates with 100 μL/well of 5 μg/mL rabbit anti-human PDGFR-h, anti-PDGFR-a, or anti-VEGFR-2 antibody for 60 to 90 minutes. At the end of the 2-hour incubation the plates are washed (PBS, 0.1% Tween 20) before incubation with anti-phosphotyrosine-horseradish peroxidase antibody (diluted in PBS, 0.05% Tween 20) for 30 minutes at room temperature. The plates are washed again, then incubated with tetramethylbenzidine and evaluated as described above. IC50 values are calculated as percent inhibition of control.

• 동물 모델

  Athymic female mice

• 용량

  3, 10, or 33 mg/kg

• 투여

  Oral gavage