CW069

카탈로그 번호S7336 배치:S733601

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기술 자료

화학식

C₂₃H₂₁IN₂O₃

분자량

500.33

CAS 번호

1594094-64-0

용해도 (25°C)*

시험관 내(In vitro)

DMSO

100 mg/mL (199.86 mM)

Ethanol

4 mg/mL (7.99 mM)

Water

Insoluble

생체 내(In Vivo) (개별적으로 순서대로 용매를 제품에 첨가하십시오.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Selleck 연구소에서 검증했습니다. 이 제형에 대한 조정이 필요한 경우 맞춤형 테스트를 위해 당사 영업팀에 문의하십시오.	5.000mg/ml (9.99mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 100 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5% DMSO 1 95% Corn oil Selleck 연구소에서 검증했습니다. 이 제형에 대한 조정이 필요한 경우 맞춤형 테스트를 위해 당사 영업팀에 문의하십시오.	1.000mg/ml (2.00mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 20 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml은 약간 용해되거나 불용해됨을 의미합니다.
* Selleck은 모든 화합물의 용해도를 자체적으로 테스트하며, 실제 용해도는 게시된 값과 약간 다를 수 있습니다. 이는 정상적인 현상이며, 약간의 배치 간 변동으로 인해 발생합니다.
* 실온 배송 (안정성 테스트 결과 이 제품은 냉각 조치 없이 배송될 수 있음을 보여줍니다.)

원액 준비

생물학적 활성

설명

CW069는 미세소관 운동 단백질 HSET의 알로스테릭 및 선택적 억제제로, IC50이 75 μM이며 KSP에 비해 상당한 선택성을 나타냅니다.

표적

HSET

75 μM

시험관 내(In vitro)

CW069는 정상적인 인간 진피 섬유아세포에서 양극성 방추 형태를 변경하지 않고 과다 중심체를 가진 N1E-115 세포에서 다극성 방추를 증가시킵니다. 이 화합물은 IC50 10 μM로 암 N1E-115 세포의 성장을 억제하지만, NHDF 또는 원발성 인간 골수 세포에서는 억제하지 않습니다.

특징

알로스테릭, HSET-선택적 억제제.

프로토콜 (참조)

키나아제 분석:^{^[1]}	시험관 내 효소 ATPase 분석 이 프로토콜은 전체 길이, N-말단, 6His-태그 HSET 및 KSP에 최적화되어 있으며 단백질의 MT-자극 활성을 측정합니다. HSET/KSP의 Gsp 합성 효소 활성 억제는 ATP의 가수분해를 피루베이트 키나제/락테이트 탈수소효소 반응을 통해 NADH의 산화에 연결함으로써 분광광도법으로 관찰됩니다. 분석은 정제된 Gsp 합성 효소/아미다제(12.8 nM)를 다음 구성 요소(최종 농도)를 포함하는 분석 혼합물에 첨가하여 시작됩니다: 6 nM 단백질, 0.07 mg/ml MT(University Biologicals), 1.56 mM 글루타티온, 10 mM 스페르미딘, 2 mM ATP, 2.7 mM MgCl₂, 1 mM 포스포(에놀)-피루베이트, 0.2 mM NADH, 50 μg/ml 락테이트 탈수소효소, 100 μg/ml 피루베이트 키나제 및 이 화합물의 다양한 농도를 모두 50 mM Na PIPES(pH 6.8)에 37°C에서 넣습니다. ADP-Glo 검출 분석(Promega)은 제조사 지침에 따라 수행됩니다. 모든 화합물 첨가는 multidrop BioMek Nxp를 사용하여 수행되었습니다. 플레이트는 Pherastar 마이크로플레이트 리더를 사용하여 읽었습니다.
세포 분석:^{^[1]}	세포주 N1E-115 cells, NHDF and primary human bone marrow cells. 농도 ~400 μM 배양 시간 72 hours 방법 Cells are cultured in DMEM supplemented with 10% fetal calf serum (FCS) at 37°C and 5% CO2. All compounds used in the Sulforhodamine B colorimetric (SRB) assay are dissolved in DMSO and diluted in culture medium to a final concentration of 0.2% DMSO. For the SRB assay and live-cell imaging, cells are seeded in 96-well plates at a density of 2,500 cells per well. After 24 hr, the cells are treated with this compound for 72 hr, with triplicate wells for each concentration. For the SRB assay, the cells are then fixed with trichloroacetic acid (TCA) and stained with SRB. Fluorescence is quantified using an Infinite 200 PRO plate-reader at a wavelength of 545 nm. Compound-treated wells are compared with solvent control wells and the concentration of this chemical that results in 50% of the solvent-control cell growth is designated as the IC50 concentration, calculated using Graphpad PRISM 6. At least three biological replicates are performed for each assay.

키나아제 분석:^{^[1]}

시험관 내 효소 ATPase 분석
이 프로토콜은 전체 길이, N-말단, 6His-태그 HSET 및 KSP에 최적화되어 있으며 단백질의 MT-자극 활성을 측정합니다. HSET/KSP의 Gsp 합성 효소 활성 억제는 ATP의 가수분해를 피루베이트 키나제/락테이트 탈수소효소 반응을 통해 NADH의 산화에 연결함으로써 분광광도법으로 관찰됩니다. 분석은 정제된 Gsp 합성 효소/아미다제(12.8 nM)를 다음 구성 요소(최종 농도)를 포함하는 분석 혼합물에 첨가하여 시작됩니다: 6 nM 단백질, 0.07 mg/ml MT(University Biologicals), 1.56 mM 글루타티온, 10 mM 스페르미딘, 2 mM ATP, 2.7 mM MgCl₂, 1 mM 포스포(에놀)-피루베이트, 0.2 mM NADH, 50 μg/ml 락테이트 탈수소효소, 100 μg/ml 피루베이트 키나제 및 이 화합물의 다양한 농도를 모두 50 mM Na PIPES(pH 6.8)에 37°C에서 넣습니다. ADP-Glo 검출 분석(Promega)은 제조사 지침에 따라 수행됩니다. 모든 화합물 첨가는 multidrop BioMek Nxp를 사용하여 수행되었습니다. 플레이트는 Pherastar 마이크로플레이트 리더를 사용하여 읽었습니다.

세포 분석:^{^[1]}

세포주
N1E-115 cells, NHDF and primary human bone marrow cells.
농도
~400 μM
배양 시간
72 hours
방법
Cells are cultured in DMEM supplemented with 10% fetal calf serum (FCS) at 37°C and 5% CO2. All compounds used in the Sulforhodamine B colorimetric (SRB) assay are dissolved in DMSO and diluted in culture medium to a final concentration of 0.2% DMSO. For the SRB assay and live-cell imaging, cells are seeded in 96-well plates at a density of 2,500 cells per well. After 24 hr, the cells are treated with this compound for 72 hr, with triplicate wells for each concentration. For the SRB assay, the cells are then fixed with trichloroacetic acid (TCA) and stained with SRB. Fluorescence is quantified using an Infinite 200 PRO plate-reader at a wavelength of 545 nm. Compound-treated wells are compared with solvent control wells and the concentration of this chemical that results in 50% of the solvent-control cell growth is designated as the IC50 concentration, calculated using Graphpad PRISM 6. At least three biological replicates are performed for each assay.

참조

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24210220/

고객 제품 검증

: 데이터 출처 [ , , J Cell Sci, 2017, 130(21):3676-3684 ]

Sellecks CW069 인용됨 8 출판물

Two cancer cell lines utilize Myosin 10 and the kinesin HSET differentially to maintain mitotic spindle bipolarity [ PLoS One, 2025, 20(5):e0325016]	PubMed: 40440343
Molecular landscape and functional characterization of centrosome amplification in ovarian cancer [ Nat Commun, 2023, 14(1):6505]	PubMed: 37845213
KIF24 depletion induces clustering of supernumerary centrosomes in PDAC cells [ Life Sci Alliance, 2022, 5(11)e202201470]	PubMed: 35803737
Terminally differentiated osteoclasts organize centrosomes into large clusters for microtubule nucleation and bone resorption [ Mol Biol Cell, 2022, mbcE22030098]	PubMed: 35511803
IFT proteins interact with HSET to promote supernumerary centrosome clustering in mitosis. [ EMBO Rep, 2020, 9:e49234]	PubMed: 32270908
Unraveling mitotic protein networks by 3D multiplexed epitope drug screening [ Mol Syst Biol, 2018, 14(8):e8238]	PubMed: 30104419
Centrosome Clustering Is a Tumor-selective Target for the Improvement of Radiotherapy in Breast Cancer Cells [Choe MH Anticancer Res, 2018, 38(6):3393-3400]	PubMed: 29848688
Precocious Centriole Disengagement and Centrosome Fragmentation Induced by Mitotic Delay [ Nat Commun, 2017, 13;8:15803]	PubMed: 28607478

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배송 및 보관
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인간, 수의학 진단 또는 치료 용도로 사용하지 마십시오.