Silmitasertib (CX-4945)

Silmitasertib (CX-4945)는 CK2에 선택적이며, 0.5 μM 농도에서 238가지 키나아제 중 7가지만 90% 이상 억제하며, 이는 CK2의 IC50보다 500배 높은 수치입니다. 세포 없는 시스템에서 이 화합물은 FLT3, PIM1, CDK1을 각각 35 nM, 46 nM, 56 nM의 IC50로 억제하지만, 10 μM 농도에서의 처리는 세포 기반 기능 분석에서 FLT3, PIM1, CDK1에 대해 비활성입니다. 이 화합물은 광범위한 항증식 활성을 보이며, 유방암 세포주는 1.71-20.01 μM의 EC50으로 가장 넓은 범위의 민감도를 나타냅니다. CX-4945의 항증식 활성은 CK2α mRNA 및 단백질 수준과 상관관계가 있지만, CK2α' 촉매 서브유닛, 조절 CK2β 서브유닛, PI3K/Akt 또는 PTEN 돌연변이 상태와는 상관관계가 없습니다. PI3K/Akt 신호 전달을 PTEN 활성화가 아닌 CK2에 의한 세린 129에서의 Akt 인산화를 직접적으로 차단하여 억제합니다. 이 화합물로 치료하면 p21 (T145) 인산화가 감소하고, 총 p21 및 p27 수준이 증가하며, 카스파제 3/7 활성이 유도됩니다. BT-474 세포에서는 G2/M 세포 주기 정지를 유도하고, BxPC-3 세포에서는 G1 정지를 유도합니다. 이 화합물은 HUVEC 증식, 이동 및 튜브 형성을 각각 5.5 μM, 2 μM, 4 μM의 IC50로 억제합니다. BT-474 및 BxPC-3 세포의 저산소 조건에서 p53 및 pVHL의 하향 조절을 방지하고 HIF-1α 전사의 활성화를 감소시킵니다. [1] Jurkat 세포에서 0.1 μM의 IC50로 내인성 세포내 CK2 활성을 강력하게 억제합니다. [2]

Silmitasertib (CX-4945)를 25 mg/kg 또는 75 mg/kg 용량으로 1일 2회 경구 투여 시 BT-474 모델에서 강력한 항종양 활성을 나타내며, 각각 88% 및 97%의 TGI를 보였고, 각 그룹의 9마리 중 2마리에서 초기 종양 부피 대비 50% 이상의 종양 크기 감소를 보였습니다. BxPC-3 모델에서 이 화합물을 75 mg/kg 용량으로 1일 2회 처리 시 93%의 TGI를 보였고, 치료 기간 종료 시 3마리에서는 종양 잔존 증거가 없었습니다. [1] PC3 이종이식 모델에서 25 mg/kg, 50 mg/kg 또는 75 mg/kg 용량으로 투여 시 각각 19%, 40%, 86%의 TGI로 종양 성장 억제를 유발했습니다. [2]

• CK2 Kinase Assay

  Silmitasertib (CX-4945)는 10 μL의 부피로 반응 혼합물에 첨가되며, 이 혼합물은 10 μL의 분석 희석 완충액 (ADB; 20 mM MOPS, pH 7.2, 25 mM β-글리세롤인산염, 5 mM EGTA, 1 mM 오르토바나듐산 나트륨 및 1 mM 디티오트레이톨), 10 μL의 기질 펩타이드 (RRRDDDSDDD, ADB에 1 mM 농도로 용해), 10 μL의 재조합 인간 CK2 (ααββ-홀로효소, ADB에 25 ng 용해)를 포함합니다. 반응은 10 μL의 ATP 용액 (90% 75 mM MgCl₂, 75 μM ATP (최종 ATP 농도=15 μM)를 ADB에 용해; 10% [γ-³³P]ATP (원액 1 mCi/100 μL; 3000 Ci/mM)를 첨가하여 시작하며, 30 °C에서 10분 동안 유지됩니다. 반응은 100 μL의 0.75% 인산으로 퀀칭된 다음 인산셀룰로오스 필터 플레이트로 옮겨져 여과됩니다. 각 웰을 0.75% 인산으로 5회 세척한 후, 플레이트는 5분 동안 진공 건조되고, 각 웰에 15 μL의 섬광액을 첨가한 후 Wallac 발광 카운터를 사용하여 잔류 방사능이 측정됩니다. 이 화합물의 IC50 값은 0.0001 μM에서 1 μM 범위의 8가지 농도에서 파생됩니다.

• 세포주

  SKBr3, MDA-MB-453, BT-474, ZR-75-1, MDA-MB-231, MDA-MB-468, T47D, MCF 7, Hs578T, MDA-MB-361, UACC-812, et al.

• 농도

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~100 μM

• 배양 시간

  4 days

• 방법

  Cells are seeded at a density of 3,000 cells per well 24 hours prior to treatment with Silmitasertib (CX-4945), in appropriate media, and then treated with various concentrations of this compound. Suspensions cells are seeded and treated on the same day. Following 4 days of incubation, Alamar Blue (20 μL, 10% of volume per well) is added and the cells are further incubated at 37 °C for 4-5 hours. Fluorescence with excitation wavelength at 530-560 nm and emission wavelength at 590 nm is measured.

• 동물 모델

  Female immunocompromised mice CrTac:Ncr-Foxn1nu injected with BxPC-3 or BT-474 cells

• 용량

  25 or 75 mg/kg

• 투여

  Oral gavage twice daily