D 4476

카탈로그 번호S7642 배치:S764201

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기술 자료

화학식

C₂₃H₁₈N₄O₃

분자량

398.41

CAS 번호

301836-43-1

용해도 (25°C)*

시험관 내(In vitro)

DMSO

79 mg/mL (198.28 mM)

Water

Insoluble

Ethanol

Insoluble

생체 내(In Vivo) (개별적으로 순서대로 용매를 제품에 첨가하십시오.)

Homogeneous suspension

CMC-NA

≥5mg/ml

Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.

* <1 mg/ml은 약간 용해되거나 불용해됨을 의미합니다.
* Selleck은 모든 화합물의 용해도를 자체적으로 테스트하며, 실제 용해도는 게시된 값과 약간 다를 수 있습니다. 이는 정상적인 현상이며, 약간의 배치 간 변동으로 인해 발생합니다.
* 실온 배송 (안정성 테스트 결과 이 제품은 냉각 조치 없이 배송될 수 있음을 보여줍니다.)

원액 준비

생물학적 활성

설명

D 4476은 Schizosaccharomyces pombe 유래 CK1 및 CK1δ에 대한 무세포 분석에서 각각 200 nM 및 300 nM의 IC50을 갖는 강력하고 선택적이며 세포 투과성 CK1 (casein kinase 1) 억제제입니다. 또한 500 nM의 IC50을 갖는 ALK5 억제제로도 작용합니다.

표적

CK1 from Schizosaccharomyces pombe	CK1δ	ALK5
200 nM	300 nM	500 nM

시험관 내(In vitro)

D4476 (10 μM)은 CK1 및 ALK5를 효과적으로 억제하며, 대조군 대비 각각 약 7% 및 22%의 활성을 보입니다. H4IIE 간암 세포에서 D4476은 내인성 forkhead box 전사 인자 O1a (FOXO1a)의 Ser322 및 Ser325 인산화를 특이적으로 억제하며, 다른 부위의 인산화에는 영향을 미치지 않습니다. D4476은 ANBL6, INA6 및 RPMI8226 계열에서 세포독성을 유도합니다. MM1S 및 U266 계열은 덜 민감하며, OPM1 계열은 완전히 저항성을 보입니다. 고농도 (50 μM)의 D4476은 모든 다발성 골수종 (MM) 계열에서 독성을 유도했습니다. MM 세포에서 D4476은 TP53, P27 및 FADD의 단백질 수준을 증가시키고, 세포 주기 진행 및 세포자멸사를 유도합니다. D4476으로 백혈병 줄기세포 (LSC)를 치료하면 정상 HSPC에 비해 LSC를 고도로 선택적으로 사멸시키는 것으로 나타났습니다.

프로토콜 (참조)

키나아제 분석:^{^[4]}	CK1 kinase assay 모든 단백질 키나아제 분석(25 μL)은 실온(21℃)에서 수행됩니다. 분석은 Biomek 2000 실험실 자동화 워크스테이션을 사용하여 96웰 형식으로 40분 동안 수행됩니다. 분석에서 마그네슘 아세테이트 및 [γ-^33P]ATP(800 cpm/pmol)의 농도는 각각 10 mM 및 0.1 mM입니다. 분석은 MgATP로 시작하여 5 μL의 0.5 M 오르토인산 첨가로 중단됩니다. 알리쿼트는 P30 필터 매트에 스포팅된 다음, ATP를 제거하기 위해 75 mM 인산에서 4회 세척하고, 메탄올에서 1회 세척한 다음, 건조하고 방사능을 측정합니다. CK1 δ(5-20 m-단위)는 20 mM Hepes, pH 7.5, 0.15 M NaCl, 0.1 mM EGTA, 0.1% (v/v) Triton X-100, 5 mM 디티오트레이톨, 50% (v/v) 글리세롤에 희석되어 20 mM Hepes, pH 7.5, 0.15 M NaCl, 0.1 mM EDTA, 5 mM DTT, 0.1% (v/v) Triton X-100 및 0.5 mM 기질 펩타이드를 포함하는 배양액에서 펩타이드 RRKDLHDDEEDEAMSITA에 대해 분석됩니다.
세포 분석:^{^[2]}	세포주 MM cell lines including MM1S, RPMI8226, U266, MM1R, OPM1, OPM2, INA6, ANBL6, ANBL-6VR, LR5 and RPMI-DOX40 (DOX40) cells 농도 50 μM 배양 시간 72 h 방법 MM cells are seeded in triplicate into 96-well plates in 100 μL culture media. D4476 is added to each well at concentrations of 0, 5, 10, 20, 30, 40, and 50 μM in another 100 μL culture media. Cell viability is measured with MTT at the 72 h drug exposure. Absorbance is measured at 570 nm with spectrophotometer.

키나아제 분석:^{^[4]}

CK1 kinase assay
모든 단백질 키나아제 분석(25 μL)은 실온(21℃)에서 수행됩니다. 분석은 Biomek 2000 실험실 자동화 워크스테이션을 사용하여 96웰 형식으로 40분 동안 수행됩니다. 분석에서 마그네슘 아세테이트 및 [γ-^33P]ATP(800 cpm/pmol)의 농도는 각각 10 mM 및 0.1 mM입니다. 분석은 MgATP로 시작하여 5 μL의 0.5 M 오르토인산 첨가로 중단됩니다. 알리쿼트는 P30 필터 매트에 스포팅된 다음, ATP를 제거하기 위해 75 mM 인산에서 4회 세척하고, 메탄올에서 1회 세척한 다음, 건조하고 방사능을 측정합니다. CK1 δ(5-20 m-단위)는 20 mM Hepes, pH 7.5, 0.15 M NaCl, 0.1 mM EGTA, 0.1% (v/v) Triton X-100, 5 mM 디티오트레이톨, 50% (v/v) 글리세롤에 희석되어 20 mM Hepes, pH 7.5, 0.15 M NaCl, 0.1 mM EDTA, 5 mM DTT, 0.1% (v/v) Triton X-100 및 0.5 mM 기질 펩타이드를 포함하는 배양액에서 펩타이드 RRKDLHDDEEDEAMSITA에 대해 분석됩니다.

세포 분석:^{^[2]}

세포주
MM cell lines including MM1S, RPMI8226, U266, MM1R, OPM1, OPM2, INA6, ANBL6, ANBL-6VR, LR5 and RPMI-DOX40 (DOX40) cells
농도
50 μM
배양 시간
72 h
방법
MM cells are seeded in triplicate into 96-well plates in 100 μL culture media. D4476 is added to each well at concentrations of 0, 5, 10, 20, 30, 40, and 50 μM in another 100 μL culture media. Cell viability is measured with MTT at the 72 h drug exposure. Absorbance is measured at 570 nm with spectrophotometer.

참조

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14710188/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24962017/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24616378/

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12534346/

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고객 제품 검증

: 데이터 출처 [ , , Mol Oncol, 2016, 10(5):677-92 ]

Sellecks D 4476 인용됨 22 출판물

SCFβ-TrCP targets Ajuba for degradation in a GSK3β-dependent manner in colorectal cancer [ Neoplasia, 2025, 66:101175]	PubMed: 40367710
A kinome-wide CRISPR screen identifies CK1α as a target to overcome enzalutamide resistance of prostate cancer [ Cell Rep Med, 2023, 4(4):101015]	PubMed: 37075701
Golgi retention and oncogenic KIT signaling via PLCγ2-PKD2-PI4KIIIβ activation in gastrointestinal stromal tumor cells [ Cell Rep, 2023, 42(9):113035]	PubMed: 37616163
Neddylation inhibition induces glutamine uptake and metabolism by targeting CRL3SPOP E3 ligase in cancer cells [ Nat Commun, 2022, 13(1):3034]	PubMed: 35641493
CHMP2B regulates TDP-43 phosphorylation and cytotoxicity independent of autophagy via CK1 [ J Cell Biol, 2022, 221(1)e202103033]	PubMed: 34726688
CK1α upregulates the IFNAR1 expression to prompt the anti-HBV effect of type I IFN in hepatoma carcinoma cells [ Virol Sin, 2022, S1995-820X(22)00143-2]	PubMed: 35985475
SPOP and OTUD7A Control EWS-FLI1 Protein Stability to Govern Ewing Sarcoma Growth [ Adv Sci (Weinh), 2021, e2004846]	PubMed: 34060252
SPOPandOTUD7AControlEWS–FLI1Protein Stability to Govern Ewing Sarcoma Growth [ ADVANCED SCIENCE, 2021, 8(14)]	PubMed: None
CK1δ stimulates ubiquitination-dependent proteasomal degradation of ATF4 to promote chemoresistance in gastric Cancer [ Clin Transl Med, 2021, 11(10):e587]	PubMed: 34709767
SKI activates the Hippo pathway via LIMD1 to inhibit cardiac fibroblast activation [ Basic Res Cardiol, 2021, 116(1):25]	PubMed: 33847835

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